| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The METTL3 and METTL14 proteins, which are the core components of the N6-methyladenosine (m6A) methyltransferase complex (also known as the "writer" complex).
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| 体外研究 (In Vitro) |
WD6305 TFA 是一种选择性降解剂，而非抑制剂。它通过泛素-蛋白酶体途径诱导 METTL3 和 METTL14 的降解。其对 METTL3 的 DC50 值（50% 降解浓度）为 140 nM，对 METTL14 的 DC50 值为 194 nM，对 METTL3 的最大降解率 (Dmax) 为 91.9%。
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| 体内研究 (In Vivo) |
WD6305 TFA 能有效降低 AML 细胞（例如 Mono-Mac-6 细胞）中 METTL3 和 METTL14 蛋白的表达水平。这导致 mRNA 上 m6A 修饰水平的总体下降。因此，它能抑制 AML 细胞增殖并诱导其凋亡，显示出其作为抗癌药物的潜力。
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| 酶活实验 |
用于PROTAC的无细胞（或生化）检测的一般方案包括评估三元复合物（PROTAC-E3连接酶-靶蛋白）的形成。靶蛋白（例如METTL3）和E3连接酶（例如VHL）均需纯化。在不同浓度的WD6305 TFA存在下，可使用TR-FRET（时间分辨荧光能量转移）检测METTL3-VHL复合物的形成。其中一种蛋白用供体标记（例如，GST用铽标记的抗GST抗体标记），另一种蛋白用受体标记（例如，His用d2标记的抗His抗体标记）。当PROTAC使两种蛋白靠近时，会产生FRET信号。三元复合物形成的EC50值可根据剂量反应曲线计算得出。
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| 细胞实验 |
评估 WD6305 TFA 降解活性的一般方案包括用该化合物处理细胞，然后通过蛋白质印迹法检测靶蛋白水平。将 Mono-Mac-6（人急性髓系白血病）细胞接种于 6 孔板中，并用不同浓度的 WD6305 TFA（20、50、100、250、500、1000、2000 和 5000 nM）处理 24 小时。处理后，裂解细胞，并将裂解液进行 SDS-PAGE 电泳，然后用针对 METTL3、METTL14 和内参（例如 GAPDH 或 β-肌动蛋白）的抗体进行免疫印迹分析。定量分析条带强度。通过绘制剩余靶蛋白的百分比与化合物浓度的对数作图，计算 DC50 值。通过用 1 和 2.5 uM 的 WD6305 处理 Mono-Mac-6 细胞 48 小时，然后通过蛋白质印迹法测量裂解 caspase-3 和裂解 PARP 的水平来评估细胞凋亡的诱导情况。
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| 动物实验 |
评估疗效的一般体内方案是使用AML细胞的小鼠异种移植模型。将Mono-Mac-6细胞皮下植入免疫缺陷小鼠（例如NOD/SCID小鼠）。当肿瘤形成（例如，约150 mm³）后，通过腹腔注射（IP）WD6305 TFA治疗小鼠，剂量例如为20 mg/kg，每隔一天注射一次，持续2-3周。每周测量两次肿瘤体积和体重。研究结束时，收集肿瘤组织进行Western blot分析以确认METTL3和METTL14的降解，并通过ELISA或LC-MS/MS定量m6A。可进行TUNEL或Caspase-3染色以评估细胞凋亡。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
WD6305 TFA 的一般药代动力学 (PK) 研究方案包括：通过静脉注射 (IV) 和口服 (PO) 途径，向雄性 CD-1 小鼠单次给药（例如，10 mg/kg）。在不同时间点（0.083、0.25、0.5、1、2、4、8 和 24 小时）采集血样。采用经验证的液相色谱-串联质谱 (LC-MS/MS) 方法定量血浆药物浓度。计算 Cmax、Tmax、半衰期、清除率、分布容积和口服生物利用度 (%F) 等参数。PROTAC 类化合物通常具有较高的分子量（WD6305 TFA 的分子量约为 1226.4）[49L4-L5]，可能存在口服生物利用度欠佳的情况，但静脉注射途径可用于体内药效研究。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
将在为期14天的大鼠重复给药研究中评估PROTAC分子（例如WD6305 TFA）的总体毒性。动物将每日一次接受静脉或腹腔注射（例如，5、15和40 mg/kg）给药。评估参数包括体重、食物消耗量和临床观察。将进行血液学、血清化学（肝酶、肾功能）和凝血功能的标准检测。研究结束时，将对主要器官（肝脏、肾脏、脾脏、肾上腺等）进行全面的组织病理学评估。脱靶降解是PROTAC普遍存在的安全隐患，因此也可能进行蛋白质组学分析以评估其选择性。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
WD6305 TFA 是一种异双功能 PROTAC 分子，由一个靶向 METTL3 的配体和一个 Von Hippel-Lindau (VHL) E3 泛素连接酶的配体连接而成。它通过将靶蛋白带到 E3 连接酶附近，导致 METTL3 和 METTL14 复合物的泛素化，进而被蛋白酶体降解。TFA 盐形式可提高化合物的溶解度。WD6305 TFA 的分子量为 1226.4，分子式为 C₆3H₇₆F₉N11O₇S。
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| 分子式 |
C63H76F5N11O7S
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| 分子量 |
1226.40
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| 外观&性状 |
Solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 95 mg/mL (77.46 mM; with sonication)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.8154 mL | 4.0770 mL | 8.1539 mL | |
| 5 mM | 0.1631 mL | 0.8154 mL | 1.6308 mL | |
| 10 mM | 0.0815 mL | 0.4077 mL | 0.8154 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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