QSY 21 NHS

目录号: V90305
QSY 21 NHS 是一种暗猝灭剂,也是远红外和近红外荧光探针的高效能量转移受体。
QSY 21 NHS CAS号: 304014-13-9
产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
5mg
10mg
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产品描述
QSY 21 NHS 是一种暗猝灭剂,也是远红外和近红外荧光探针的高效能量转移受体。QSY 21 NHS 的工作波长范围为 540-750 nm,常用于 FRET 应用。QSY 21 NHS 在正常条件下不发出荧光。NHS 酯可用于标记蛋白质的伯胺 (R-NH2)、胺修饰的寡核苷酸和其他含胺分子。
QSY 21 NHS(CAS 304014-13-9)是一种QSY家族的暗猝灭染料,其工作原理基于荧光共振能量转移(FRET)。它能够吸收激发态荧光团的能量而不重新发射光,因此可作为FRET检测中的受体染料。N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯与伯胺反应形成稳定的酰胺键,从而可以与蛋白质、肽和其他含胺生物分子共价结合。
生物活性&实验参考方法
靶点
QSY 21 NHS targets primary amine groups (‑NH2) on lysine residues and the N‑terminus of peptides and proteins. The NHS ester group reacts efficiently at pH 7-9 to form covalent amide bonds. Once conjugated to a biomolecule, QSY 21 serves as a FRET acceptor, quenching the fluorescence of donor fluorophores such as Alexa Fluor 488, fluorescein, or other green‑emitting dyes when in close proximity (typically 1-10 nm).
体外研究 (In Vitro)
在体外,QSY 21 NHS 可用于生成标记生物分子,用于基于 FRET 的检测。它可以与肽、抗体或寡核苷酸偶联,构建 FRET 探针。常见应用包括蛋白酶活性检测(例如,半胱天冬酶、基质金属蛋白酶)、受体二聚化研究以及用于核酸检测的分子信标检测。猝灭效率可通过供体荧光强度的降低来衡量。当与含有蛋白酶可切割序列的肽偶联时,蛋白水解切割会将 QSY 21 受体与供体荧光团分离,从而恢复供体荧光。
体内研究 (In Vivo)
由于其高分子量和疏水性,QSY 21 NHS 除非与靶向基团偶联,否则不适用于体内动物实验。当与抗体或其他靶向蛋白偶联时,它可以作为可激活探针的一部分,用于活细胞成像或小动物荧光成像。在这些应用中,探针在到达靶位点(例如肿瘤)之前保持荧光猝灭状态,到达靶位点后,蛋白水解酶的切割会激活其荧光。此类偶联物通常以 1-10 mg/kg 的典型抗体剂量进行静脉注射。
酶活实验
NHS酯标记效率通常通过测量模型蛋白的标记度(DOL)来评估。将牛血清白蛋白(BSA,10 mg/mL,溶于0.1 M碳酸氢钠缓冲液,pH 8.5)与10倍摩尔过量的QSY 21 NHS(溶于DMSO,最终浓度1-5%)在室温下轻柔振荡孵育1小时。未结合的染料通过尺寸排阻色谱(例如Sephadex G-25)或透析去除。DOL根据染料最大吸收波长(通常在600-650 nm附近,具体数值请参考制造商提供)和蛋白质浓度(通过BCA或Bradford法测定)并利用比尔-朗伯定律计算得出。
细胞实验
将细胞置于含有 QSY 21 标记探针的培养基中,在 37°C 下孵育不同时间(0.5-24 小时),以研究其摄取、定位和激活情况。对于活细胞成像,将细胞接种于玻璃底培养皿中,并与 1-100 nM 的标记探针孵育。使用配备相应供体荧光团滤光片组(例如,488 nm 激发,520 nm 发射)的共聚焦显微镜或荧光显微镜监测荧光。可通过与内体标记物(例如,LysoTracker、Rab5)共染色来评估内吞作用。使用 MTT 法评估细胞活力,以确保所用浓度的标记探针不具有细胞毒性。
动物实验
对于体内成像,将QSY 21标记的探针以1-10 mg/kg的剂量通过尾静脉注射给小鼠。动物麻醉后,使用荧光成像系统(例如IVIS Spectrum)在多个时间点(注射后1、4、8、24和48小时)进行成像。实验结束时,处死动物,并取出主要器官(肝脏、脾脏、肾脏、心脏、肺脏)进行离体成像,以评估生物分布。当蛋白水解激活荧光时,计算信号强度相对于基线的倍数增加。
药代性质 (ADME/PK)
QSY 21 NHS 通常储存在 -20°C 的干燥避光环境中。NHS 酯类染料对水分敏感,在水溶液中会迅速水解。进行偶联时,应在使用前立即将染料溶解于无水 DMSO 中。储备液(DMSO 溶液,浓度为 10-20 mM)在干燥条件下可在 -20°C 保存长达 1 个月。与蛋白质偶联后,标记的偶联物应储存在含有防腐剂(例如 0.02% 叠氮化钠)的缓冲液中,并避光保存于 4°C,以防止光漂白。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
QSY 21 NHS 是一种研究用化学品,而非药物;因此,其毒性数据尚未标准化。该染料应被视为潜在刺激物。避免吸入、皮肤接触和眼睛接触;穿戴适当的个人防护装备(实验服、手套、护目镜)。处理固体染料或 DMSO 储备溶液时,请在通风橱内操作。虽然 NHS 酯可能与皮肤或呼吸道蛋白质上的胺基发生反应,但其急性毒性较低。该化合物未被国际癌症研究机构 (IARC) 或美国国家毒理学计划 (NTP) 列为致癌物。
参考文献

[1]. A comparative study of the binding of QSY 21 and Rhodamine 6G fluorescence probes to DNA: structure and dynamics. Phys Chem Chem Phys. 2010 Sep 7;12(33):9677-84.

其他信息
QSY 21 NHS 并非药物,也未获准用于人体治疗。它是一种生化分析试剂,仅用于研究用途,尤其适用于基于 FRET 的生物分子相互作用、蛋白酶活性和邻近性研究等分析。本产品仅供研究使用,不得用于诊断或治疗用途。QSY 染料家族包含多种具有不同吸收光谱的猝灭剂,以匹配不同的供体荧光团。QSY 21 经过优化,可猝灭 Alexa Fluor 488 和荧光素等绿色荧光染料。该化合物可从专业的生化试剂供应商处购买,产品目录号例如 A10479(Thermo Fisher)及类似名称。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C45H39CLN4O7S
分子量
815.33
精确质量
814.223
CAS号
304014-13-9
PubChem CID
162310014
外观&性状
Purple to purplish red solid powder
熔点
>200℃
氢键受体(HBA)数目
10
可旋转键数目(RBC)
7
重原子数目
58
分子复杂度/Complexity
1790
定义原子立体中心数目
0
SMILES
C1CN(CCC1C(=O)ON2C(=O)CCC2=O)S(=O)(=O)C3=CC=CC=C3C4=C5C=CC(=[N+]6CCC7=CC=CC=C76)C=C5OC8=C4C=CC(=C8)N9CCC1=CC=CC=C19.[Cl-]
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.2265 mL 6.1325 mL 12.2650 mL
5 mM 0.2453 mL 1.2265 mL 2.4530 mL
10 mM 0.1226 mL 0.6132 mL 1.2265 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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