| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
Fluorescent Dye
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Alexa 350、Alexa 430、Alexa Fluor 488-azide/Alexa Fluor 488叠氮化物、Alexa 532、Alexa 546、Alexa 568和Alexa 594染料是一系列新的荧光染料，其发射/激发光谱分别与AMCA、Lucifer Yellow、荧光素、罗丹明6G、四甲基罗丹明或Cy3、lissamine罗丹明B和Texas Red相似（Alexa名称中的数字表示近似的激发波长最大值，单位为nm）。所有Alexa染料及其偶联物都比上面列出的常用光谱类似物更具荧光性和耐光性。此外，Alexa染料对4-10范围内的pH值不敏感。我们评估了Alexa染料与传统染料在使用各种偶联物的应用中的比较，包括山羊抗小鼠IgG（GAM）、链霉抗生物素蛋白、小麦胚芽凝集素（WGA）和刀豆球蛋白A（ConA）的偶联物。Alexa 546的结合物比Cy3结合物的荧光至少多两倍。用Alexa 568或Alexa 594染料标记的蛋白质分别比用赖氨酸罗丹明B或德克萨斯红染料标记的相同蛋白质亮几倍。鬼笔环肽的Alexa染料衍生物以高特异性染色F-actin。酰肼形式的Alexa染料是非常明亮的、可固定甲醛的极性示踪剂。Alexa 430（ex 430 nm/em 520 nm）和Alexa 532（ex 530 nm/em 548 nm）荧光染料的共轭物是光谱上独特的荧光探针，在其激发和发射波长范围内具有相对较高的量子产率。[1]
为了研究bCdc42 C末端CCaX基序的翻译后修饰，我们首先在HEK293细胞中证实了bCdc42的棕榈酰化。细胞与棕榈酸类似物17-十八炔酸（17-ODYA）或棕榈酸作为阴性对照孵育。通过Cu（I）催化的叠氮-炔烃环加成（click）化学，用Alexa Fluor 488-azide/Alexa Fluor 488叠氮化物进行选择性标记，检测到掺入17-ODYA的蛋白质。如前所述，bCdc42而非Cdc42是棕榈酰化的（图1B）。bCdc42的棕榈酰化被2-溴棕榈酸酯抑制，这是一种抑制棕榈酰化的不可代谢脂肪酸（图1C）。有趣的是，一种香叶基香叶基转移酶抑制剂也阻断了棕榈酸酯掺入bCdc42（图1C），这表明香叶基香叶基修饰可能是bCdc42棕榈酰化的先决条件。为了确认bCdc42的异戊二烯化，将细胞与香叶基-香叶基叠氮化物或法尼基叠氮化物一起孵育。bCdc42掺入了两种异戊二烯基脂质类似物，并且掺入被异戊二烯基转移酶特异性抑制剂阻断（图1D）[2]。 |
| 酶活实验 |
结合试验。[1]
对于下拉试验，用PBS洗涤转染细胞，并用补充有蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解。将澄清的裂解物在4°C下与1μM GST或GST-RhoGDIα预偶联到谷胱甘肽琼脂糖中孵育2小时。用RIPA缓冲液洗涤三次后，通过免疫印迹分析结合的蛋白质。对于体外结合试验，将1μM棕榈酸酯或17-ODYA标记的His-bCdc42与1μM GST或GST-RhoGDIα在结合缓冲液B（20 mM HEPES NaOH[pH 7.4]、100 mM NaCl、3 mM MgCl2和1%NP-40）中在30°C下孵育1.5小时。样品在4°C下与谷胱甘肽琼脂糖进一步孵育1小时。通过离心收集树脂，回收上清液作为谷胱甘肽琼脂糖未结合部分。用结合缓冲液B洗涤三次后，通过在含有1%SDS的结合缓冲液中煮沸来洗脱结合的蛋白质（结合部分）。将SDS以1%的终浓度加入到未结合的部分中，并使每个部分的总体积相等。对结合和未结合的组分进行点击化学和免疫印迹。 脂质体结合试验。[1] 将17 ODYA标记的bCdc42（1μM）与1 mg/ml含有35%磷脂酰乙醇胺、25%磷脂酰丝氨酸、5%磷脂酰肌醇和35%胆固醇的脂质体一起孵育30分钟，并在16000×g下离心20分钟。将脂质体颗粒悬浮在结合缓冲液C（50 mM HEPES NaOH[pH 7.4]、100 mM NaCl、3 mM MgCl2）中，与GST-RoGDIα一起孵育三十分钟。最后离心后，将颗粒悬浮在含有1%SDS的结合缓冲液中。上清液补充SDS（终浓度，1%），每个样品用于点击化学。点击化学后，用甲醇-氯仿沉淀样品并溶解在样品缓冲液中。分别通过凝胶内荧光和CBB染色检测标记为bCdc42的探针和总bCdc42。 Cu（I）催化叠氮炔烃环加成反应（点击化学）。[1] 转染的HEK293细胞在含有10%FBS的DMEM中培养42小时。然后将细胞在含10%透析FBS和100μM 17-ODYA或棕榈酸的DMEM中温育6小时。对于抑制剂处理，在17-ODYA-标记前18小时向细胞中加入5μM香叶基香叶基转移酶抑制剂（GGTI-298）或法尼基转移酶抑制物（FTI-277）；在17-ODYA标记前1小时将2-溴棕榈酸酯加入细胞中。为了检测异戊二烯化，将转染的细胞培养8小时，然后在含有10%透析FBS和30μM香叶基-香叶基叠氮化物或法尼基叠氮化物的DMEM中孵育24小时。用磷酸缓冲盐水（PBS）洗涤细胞，并用补充有蛋白酶抑制剂（3μg/ml亮肽和1 mM苯甲基磺酰氟[PSF]）的RIPA缓冲液（20 mM HEPES NaOH[pH 7.4]、100 mM NaCl、3 mM MgCl2、1%NP-40、0.5%脱氧胆酸盐和0.1%SDS）裂解细胞。用抗FLAG和G-Sepharose蛋白对清除的裂解物进行免疫沉淀4小时。用RIPA缓冲液洗涤免疫沉淀物3次，并将其悬浮在94μl PBS中，加入6μl新鲜预混合的点击化学试剂（终浓度为10μMAlexa Fluor 488叠氮化物或Alexa Fluor 647炔烃、1 mM三（2-羧乙基）膦（TCEP）、100μM三[（1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-基）甲基]胺（TBTA）和1 mM CuSO4）。在室温下放置1小时后，用含有1%NP-40的PBS洗涤免疫沉淀物两次，并用样品缓冲液进行SDS-PAGE处理。通过凝胶内荧光检测探针标记的蛋白质。 |
| 细胞实验 |
Fractionation assay。[1]
转染的细胞培养8小时，然后在含有30μM香叶基叠氮和17-ODYA的培养基中分别孵育24小时和6小时。用含有蛋白酶抑制剂的缓冲液A（20 mM HEPES NaCl[pH 7.4]、5 mM KCl和2 mM EDTA）收获细胞。细胞在冰上通过27号注射针20次均质化。通过800×g离心5分钟去除细胞核和完整细胞。核后上清液在100000×g离心30分钟，将颗粒悬浮在含有1%NP-40、0.5%脱氧胆酸盐和0.1%SDS的缓冲液A中。将相同的洗涤剂直接添加到上清液中。孵育1小时后，对样品进行超速离心，将清除的裂解物用于免疫沉淀，然后进行点击化学。 共聚焦显微镜。[1] HeLa细胞在玻璃底培养皿上生长并瞬时转染。转染后6小时，将细胞在含有10%FBS和25 mM HEPES的无酚红DMEM中孵育过夜。使用Plan复消色差63×/1.4数字孔径（NA）物镜在蔡司LSM510 META共聚焦显微镜上对细胞进行成像。 BRET。[1] 在转染前24小时将HEK293细胞接种在12孔板上。Rluc-bCdc42野生型或突变体（供体）单独转染或与Venus-PTP1b、Venus giantin或Venus-K-Ras（受体）一起转染。转染后24小时，用PBS洗涤细胞，用含有2 mM EDTA的PBS从平板上分离，并通过400×g离心5分钟收集。将细胞悬浮在含有CaCl2和MgCl2的PBS中，转移到96孔平板上。在BRET测量前10分钟加入Coeleterazine-h（5μM）。使用多模微孔板阅读器Synergy 2（BioTek）检测发光和荧光信号。BRET比率是通过将荧光信号（528/20发射滤光片）除以发光信号（460/40发射滤光片）来计算的。净BRET是这个比率减去仅表达供体构建体的细胞测量的相同比率。 萤光素酶测定。[1] 将HEK293细胞接种在12孔板上，并用pEGFP-bCdc42或突变bCdc42质粒、pSRE-Luc和pEF-Rluc转染。转染后7小时，用含有1%FBS的DMEM代替培养基。17小时后，裂解细胞并进行Dual-Glo萤光素酶测定系统。通过免疫印迹法确认和定量bCdc42及其突变体的表达水平。来源于pSRE-Luc的萤火虫荧光素酶活性被标准化为来源于pEF-Rluc的Renilla荧光素酶活动。数据被标准化为bCdc42及其突变体的表达水平。 |
| 动物实验 |
小鼠新生脑组织中内源性棕榈酰化bCdc42的化学计量比。[1]
对于酰基-RAC测定，将小鼠新生脑组织或成年肾脏组织在含有蛋白酶抑制剂的缓冲液A中用Dounce匀浆器匀浆。通过800 × g离心7分钟去除细胞核和完整细胞。将上清液以100,000 × g离心30分钟，沉淀物重悬于含有0.1% MMTS的封闭缓冲液中，于42℃旋转孵育30分钟。加入3倍体积的冷丙酮沉淀蛋白质。离心后，用70%冷丙酮洗涤蛋白质沉淀，并重悬于结合缓冲液中。取一部分作为上样。剩余样品用于上述酰基-RAC测定。将酰基-RAC样品和输入样品（占总量的10%）进行免疫印迹分析，使用bCdc42特异性抗体和Cdc42抗体。Cdc42抗体可检测Cdc42和bCdc42两种亚型。对于RhoGDIα下拉实验，将新生儿脑和成年肾脏的核后裂解液以100,000 × g离心30分钟，并将沉淀物重悬于结合缓冲液B中。孵育1小时后，将样品进行超速离心，并将澄清的裂解液（2 mg/ml）与预先偶联于谷胱甘肽-琼脂糖的0.4 μM GST-RhoGDIα在4°C下孵育2小时。收集GST-RhoGDIα的未结合组分和结合组分。通过免疫印迹检测bCdc42。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
高效低成本地去除废水中的染料和重金属仍然是研究人员面临的一大挑战。活性炭吸附法被广泛用于去除这些有毒污染物。人们已经研究了物理、化学和生物改性方法来提高活性炭的吸附性能。文献表明，化学改性活性炭对水溶液中的染料和重金属表现出最高的吸附容量。由于试剂易得、易于改性以及表面官能团可调等原因，酸改性、碱改性和浸渍等化学改性方法得到了广泛的研究。然而，为了提高活性炭去除废水中染料和重金属的效率，需要对活性炭的化学改性方法进行系统的研究。本综述重点关注了最新的化学改性活性炭实验，这些实验表明，化学改性可以提高活性炭对水溶液中染料和重金属的吸附容量。现有实验数据表明，适当的化学改性处理策略可以增强改性活性炭对染料和重金属的吸附能力。最佳的改性工艺可以改善改性活性炭的结构或表面官能团特性，从而提高其对吸附质或特定物质的吸附或结合能力。此外，还比较了改性活性炭和相应活性炭的吸附能力。[3] Rho GTP酶的膜定位对其生物学功能至关重要，部分取决于羧基末端CaaX基序的一系列翻译后修饰：半胱氨酸的异戊二烯化、aaX三肽的蛋白水解和羧甲基化。这些CaaX加工步骤的准确性和变异性尚不明确。脑特异性剪接变体Cdc42 (bCdc42) 以CCIF序列结尾。本文表明，脑Cdc42经历两种不同的翻译后修饰：经典的CaaX加工或在CCaX半胱氨酸上的新型串联异戊二烯化和棕榈酰化。在双重脂化途径中，bCdc42被异戊二烯化，但它绕过了蛋白水解和羧甲基化，直接在第二个半胱氨酸上进行棕榈酸酯修饰。异戊二烯化后的替代加工途径在GTP酶RalA和RalB以及磷酸酶PRL-3中均得以保留，这些蛋白质的末端均含有CCaX基序。不同修饰形式的bCdc42表现出功能差异。异戊二烯化和棕榈酰化的脑Cdc42不与RhoGDIα相互作用，并且相对于经典加工形式，其在质膜中富集。异戊二烯化的CCaX基序蛋白通过棕榈酰化或内切蛋白水解和甲基化进行替代加工，扩展了信号转导GTP酶的多样性，并通过棕榈酸酯的可逆修饰实现了另一层调控。[2]
|
| 分子式 |
C39H56N8O10S2
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|---|---|
| 分子量 |
861.04
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| 精确质量 |
759.235632
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| CAS号 |
1006592-64-8
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| PubChem CID |
172653583
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| 外观&性状 |
Brown to orange solid powder
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| tPSA |
273 Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
5
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| 氢键受体(HBA)数目 |
14
|
| 可旋转键数目(RBC) |
14
|
| 重原子数目 |
52
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| 分子复杂度/Complexity |
1580
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CCN(CC)CC.C1=CC(=C(C=C1C(=O)NCCCCCCN=[N+]=[N-])C(=O)O)C2=C3C=CC(=[NH2+])C(=C3OC4=C2C=CC(=C4S(=O)(=O)[O-])N)S(=O)(=O)O
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| InChi Key |
XOPKJMYTNXSBHS-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C27H26N6O10S2.C6H15N/c28-19-9-7-16-21(17-8-10-20(29)25(45(40,41)42)23(17)43-22(16)24(19)44(37,38)39)15-6-5-14(13-18(15)27(35)36)26(34)31-11-3-1-2-4-12-32-33-30;1-4-7(5-2)6-3/h5-10,13,28H,1-4,11-12,29H2,(H,31,34)(H,35,36)(H,37,38,39)(H,40,41,42);4-6H2,1-3H3
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| 化学名 |
3-amino-6-azaniumylidene-9-[4-(6-azidohexylcarbamoyl)-2-carboxyphenyl]-5-sulfoxanthene-4-sulfonate;N,N-diethylethanamine
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| 别名 |
Alexa fluor 488 azide ditriethylamine; 1006592-64-8
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.1614 mL | 5.8069 mL | 11.6139 mL | |
| 5 mM | 0.2323 mL | 1.1614 mL | 2.3228 mL | |
| 10 mM | 0.1161 mL | 0.5807 mL | 1.1614 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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