| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
B-Raf
The primary target of claturafenib is mutant BRAF, a serine/threonine-protein kinase that is a key component of the MAPK/ERK signaling pathway. It is a pan-mutant BRAF inhibitor, meaning it targets both Class I (V600) and non-V600 BRAF mutations. The compound is brain-penetrant, which is important for treating brain metastases. It inhibits pERK levels in cancer cells. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
PF-07799933 是一种可穿透血脑屏障的选择性泛突变型 BRAF 抑制剂。在体外，PF-07799933 可抑制由 BRAFV600E 突变单体、BRAF II/III 类突变二聚体以及诱导突变型 BRAFV600E 二聚化的治疗获得性基因改变所驱动的细胞中的 pERK 活性。此外，在含有 BRAFV600E + p61 剪接变体或 BRAFV600E + NRASQ61K（可诱导突变型 BRAF 二聚化）的细胞中，PF-07799933 可破坏内源性突变型 BRAF：野生型 CRAF 二聚体。然而，PF-07799933 在体外 BRAF 野生型细胞中不抑制 pERK，也不破坏 BRAF 野生型:CRAF 野生型二聚体。[1] PF-07799933 通过破坏突变型 BRAF 二聚体来克服多种 BRAF 突变体，这在临床前研究中得到了验证。在 BRAF 野生型细胞中，PF-07799933 未表现出对 pERK 的抑制作用，这与泛 RAF 二聚体抑制剂不同，并且与恩考拉非尼相比，其对 pERK 的反常激活作用也较小。等温稳定性偏移剂量反应分析 (ITDR) 显示，在 A375 BRAFV600E 突变型黑色素瘤细胞裂解液中，PF-07799933 与 BRAFV600E 的结合亲和力比野生型 CRAF 蛋白高 10 倍。体外实验表明，克拉妥非尼对携带 I 类 BRAF 突变的细胞系中的 pERK 水平具有广泛的抑制作用，IC₅₀ 值为 0.7-7 nM。临床前研究显示，克拉妥非尼对 BRAF V600 突变型和非 V600 突变型癌症均具有抗肿瘤活性。该化合物是一种选择性泛突变型 BRAF 抑制剂。它对 V600 突变型和非 V600 突变型均有效，这使其区别于仅靶向 V600E 突变型的第一代 BRAF 抑制剂。
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| 体内研究 (In Vivo) |
PF-07799933作为单药治疗，对BRAFV600E突变体和非V600突变体均具有广泛的体内抗肿瘤活性，包括全身性和脑部抗肿瘤活性；此外，PF-07799933与比美替尼联合治疗时，对携带治疗获得性BRAF p61剪接变体的BRAFV600E突变体也具有抗肿瘤活性。[1]在皮下或颅内植入的携带创始BRAFV600E（I类）突变的小鼠异种移植瘤模型中，PF-07799933单药治疗比恩考拉非尼联合比美替尼治疗更能有效抑制肿瘤生长。PF-07799933治疗还能抑制皮下植入的BRAFG469A（II类）突变型非小细胞肺癌、BRAFK601E（II类）突变型黑色素瘤和BRAF插入缺失突变型胰腺癌肿瘤的生长。相比之下，普利索拉非尼对BRAFV600E和BRAFG469A突变模型的疗效较差，这与体外pERK抑制作用较弱以及已知的体内代谢脆弱性相符。同样，与体外pERK抑制作用较弱相符，艾沙拉非尼对BRAFV600E突变模型的活性也较低。对于普利索拉非尼和艾沙拉非尼，我们证实动物体内达到的药物暴露量与人体达到的暴露量相近。因此，观察到的相对于PF-07799933±比美替尼的疗效降低并非由于相对于人体临床可达到的剂量而言药物暴露量降低所致。在携带获得性BRAF p61剪接变体的BRAFV600突变黑色素瘤患者来源异种移植（PDX）模型中，恩科拉非尼联合比美替尼并未提高比美替尼单药治疗的微弱抗肿瘤活性。然而，单药PF-07799933展现出更优异的活性，其与比美替尼联合用药可进一步增强疗效，导致肿瘤消退，且耐受性良好，不会引起体重减轻。[1]
在体内，克拉妥拉非尼在BRAF V600突变型和非V600突变型癌症的临床前研究中均显示出抗肿瘤活性。它能穿透血脑屏障，因此可能用于治疗BRAF突变型癌症的脑转移。它可与MEK抑制剂联合使用，以增强疗效并克服耐药性。其口服生物利用度和脑穿透性是支持其研发的关键因素。 |
| 酶活实验 |
将等体积的Braf KDS:恩考拉非尼复合物与储液混合，采用悬滴气相扩散法进行共结晶。储液成分为18% PEG3350、0.2 mol/L Na₂SO₄、0.1 mol/L磷酸钠钾缓冲液（pH 6.6）。对于Braf-KDL:PF-07799933复合物的结晶，储液成分为17% PEG5000MME、1% PEG6000、乙酸钠、0.2 mol/L NaCl和5%他克西酯。两种晶体均在含有20% (v/v)甘油（作为冷冻保护剂）的储液中收集，并用液氮速冻。[1]
克拉妥拉非尼的体外非细胞酶活性测定通常包括激酶抑制研究。常用方案如下：（1）制备重组BRAF激酶（野生型和突变型）；（2）将激酶与ATP、底物和不同浓度的克拉妥拉非尼一起孵育；（3）使用放射性（³²P-ATP）或发光（ADP-Glo）检测测量激酶活性；（4）根据剂量反应曲线计算IC₅₀值；（5）评估对一系列激酶（包括野生型BRAF、CRAF和其他激酶）的选择性；以及（6）通过动力学分析确定抑制机制。 |
| 细胞实验 |
等温稳定性偏移剂量反应测定[1]
将胰蛋白酶消化的 A375 细胞沉淀物重悬于 PBS 中，并用 DMSO 或 PF-07799933（浓度范围为 0.122 至 2,000 nmol/L）在 37°C 下处理 30 分钟。将细胞置于 PCR 板中，使用 PTC-200 热循环仪在 50°C 下加热 3 分钟，然后立即在水平离心机中以 4,700 rpm 的转速在 4°C 下离心 30 秒。在加入非变性缓冲液[10 mmol/L Na2PO4、1.8 mmol/L KH2PO4 (pH 7.4)、137 mmol/L NaCl、2.7 mmol/L KCl、1 mmol/L CaCl2、10 mmol/L MgCl2、0.02% n-十二烷基β-D-麦芽糖苷、2×完全蛋白酶抑制剂和2%磷酸酶抑制剂混合物2和3]之前，细胞经液氮中三次冻融循环裂解。 共免疫沉淀和免疫印迹[1] 对于内源性RAF蛋白的共免疫沉淀，将MEL21514或A375-NRASQ61K细胞以每150 mm培养皿1.5 × 107个细胞的密度接种。将细胞在 37°C、5% CO2 条件下，分别与 DMSO 溶剂对照或指定浓度的恩考拉非尼或 PF-07799933 孵育 1 小时。用 1 mL/皿的镁裂解缓冲液 [25 mmol/L 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸 pH 7.5、75 mmol/L NaCl、5 mmol/L MgCl2、5% 甘油和 0.1% NP-40] 收集细胞裂解液，并补充 HALT 蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合物。 克拉妥拉非尼的体外细胞试验通常包括：(1) 在适当的培养基中培养 BRAF 突变癌细胞系（例如，HT29、A375 或患者来源的细胞）； （2）用不同浓度（0.1-1000 nM）的克拉妥拉非尼处理细胞 2-72 小时；（3）使用 MTT 或 CellTiter-Glo 检测评估细胞活力；（4）通过 Western blot 或 ELISA 检测 pERK 水平；（5）通过流式细胞术（Annexin V/PI）评估细胞凋亡；（6）评估下游信号通路抑制；以及（7）计算细胞生长抑制的 IC₅₀ 值。 |
| 动物实验 |
CTG-1441 和 CTG-0362 PDX 模型的疗效研究由一家合同研究组织 (CRO) 公司完成。MEL21514 PDX 模型取自一位 51 岁西班牙裔女性黑色素瘤患者（曾接受 Braftovi 和 Mektovi 治疗，MT 集团）的活检样本。通过全外显子组测序和 RNA 测序分别证实了 MEL21514 PDX 肿瘤中存在 BRAFV600E 突变和 p61 剪接变体表达。为了构建细胞系，根据推荐的硬肿瘤方案，使用 Miltenyi Biotec 人类肿瘤解离试剂盒结合 gentleMACS Octo 解离器对 MEL21514 PDX 肿瘤样本进行解离。然后使用 Miltenyi 小鼠细胞去除试剂盒对解离的细胞悬液进行磁性标记，并使用 MACS 磁分离器进行分离，以富集人肿瘤细胞。分离得到的MEL21514肿瘤细胞混合后，使用添加了10%胎牛血清（FBS）、青霉素/链霉素和霍乱毒素的Renaissance Essential Tumor Medium（RETM）进行培养。在RETM中传代10次后，将MEL21514细胞转移至添加了10% FBS和1 mmol/L丙酮酸钠的RPMI培养基中培养。细胞系和PDX模型均通过短串联重复序列分析进行鉴定，并定期检测支原体和鼠病毒。所有小鼠均在6至8周龄时获得，每组5只，并在接种癌细胞前进行1周的适应期。食物、水、温度和湿度均按照药理学测试设施的性能标准，并符合2011年《实验动物饲养和使用指南》（NRC）和AAALAC-International的要求进行维持。对于皮下异种移植，将每种细胞系（5 × 10⁶ 个细胞）或 PDX（使用 Miltenyi gentleMACS 制备的细胞悬液）皮下注射到雌性 Foxn1nu 小鼠的右侧腹部，待肿瘤生长至约 200 mm³ 后，根据肿瘤大小随机分组，每组 8 只动物。每周记录两次小鼠的体重和皮下肿瘤体积[计算公式为 (长 × 宽²)/2]。对于颅内异种移植，将 A375-荧光素酶细胞系（10,000 个细胞）注射到雌性 Foxn1nu 小鼠颅缝处，距前囟外侧 2 mm 处。7 天后，根据 IVIS Spectrum 体内成像系统测量的总发光通量（光子/秒）所反映的肿瘤负荷，将小鼠随机分组，每组 10 只动物。每周记录两次体重和总通量，并将平均总通量与肿瘤植入后天数作图。
克拉妥非尼的体内动物实验通常采用异种移植模型。常用方案如下：(1) 将BRAF突变癌细胞（例如HT29、A375）皮下注射到免疫缺陷小鼠体内；(2) 待肿瘤生长至约150-200 mm³的体积；(3) 每日或按特定方案口服克拉妥非尼，剂量为10-50 mg/kg；(4) 通过游标卡尺测量监测肿瘤生长；(5) 通过免疫组织化学或Western blot检测评估肿瘤中pERK的抑制情况；(6) 通过TUNEL检测评估肿瘤细胞凋亡；(7) 通过测量脑组织中的药物浓度评估药物的脑渗透性；以及(8) 确定最大耐受剂量并与载体对照组进行比较，评估疗效。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
克拉妥拉非尼的药代动力学特性：它是一种能穿透血脑屏障的化合物，表明其具有良好的血脑屏障穿透性。它具有口服生物利用度（正如其作为口服药物的开发所表明的那样）。分子量为490.31。该化合物的纯度≥98%。详细的药代动力学参数，例如半衰期、Cmax和AUC，尚未公开，但正在临床前和临床研究中进行评估。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
PF-07799933 单药治疗或联合治疗耐受性良好。未发生剂量限制性毒性 (DLT)，也未达到最大耐受剂量 (MTD)。单药治疗组和联合治疗组分别有 94% 和 100% 的患者出现治疗期间出现的不良事件 (TEAE)，其中 ≥ 3 级不良事件的发生率分别为 28% 和 44%。补充表 S4 列出了 ≥ 3 例患者报告的 TEAE，无论其归因如何。单药治疗中最常见的 TEAE 为疲乏（任何级别 44% / ≥ 3 级 0%）、头痛（28% / 0%）、视力模糊 [22% / 6%（1 例 3 级）] 和脂肪酶升高（16% / 0%）。联合治疗中最常见的治疗期间出现的不良事件（TEAE）为外周水肿（33% / 0%）、痤疮样皮疹、腹泻和疲乏（均为 28% / 0%）。一名接受 PF-07799933 单药治疗（每日两次，每次 450 mg）的患者因出现视力模糊、周围感觉神经病变、肌痛、疲乏和食欲下降等不良反应而降低了剂量。8 名出现视力模糊的患者中有 6 名在未调整剂量的情况下症状缓解，随访眼科检查未发现异常。没有患者因与研究药物相关的不良反应而停止治疗。[1]
克拉妥非尼的毒性特征正在临床前和临床研究中进行评估。作为一种 BRAF 抑制剂，其潜在的不良反应可能包括与 MAPK 通路抑制相关的反应，例如皮疹、疲乏、关节痛和光敏性。该化合物仅供研究使用，未经监管部门批准，不得用于人体治疗。处理材料时应遵循标准的实验室安全操作规程。 |
| 参考文献 |
[1]. A Next-Generation BRAF Inhibitor Overcomes Resistance to BRAF Inhibition in Patients with BRAF-Mutant Cancers Using Pharmacokinetics-Informed Dose Escalation. Cancer Discov . 2024 Sep 4;14(9):1599-1611.
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| 其他信息 |
RAF抑制剂彻底改变了BRAFV600突变癌症患者的治疗，但其临床益处受到ERK信号通路的适应性激活、诱导BRAFV600二聚体形成的基因改变以及脑部渗透性差等因素的限制。新一代全RAF二聚体抑制剂的治疗指数更窄。PF-07799933（ARRY-440）是一种全突变BRAF抑制剂，具有强大的脑部渗透性和高选择性。PF-07799933在体外抑制信号通路，干扰内源性突变BRAF和野生型CRAF的二聚化，而不影响野生型ERK信号通路。PF-07799933，无论是否与bimetinib联合使用，均能抑制由以二聚形式作用的突变BRAF驱动的鼠类异种移植肿瘤的生长，以及对现有RAF抑制剂耐药的BRAFV600E。在一项首次人体临床试验（NCT05355701）中，我们采用了一种新颖、灵活的基于药代动力学的剂量递增设计，以快速在难治性BRAF突变实体肿瘤患者中达到PF-07799933的有效浓度。PF-07799933 ± bimetinib 耐受性良好，在对已批准的 RAF 抑制剂耐药的 BRAF 突变癌症患者中观察到多例确认的全身和脑部反应。重要性：PF-07799933 治疗在临床前研究和难治性患者中均显示出对 BRAF V600 突变和非 V600 突变癌症的抗肿瘤活性，且 PF-07799933 可以安全地与 MEK 抑制剂联合使用。这种新颖的、基于药代动力学（PK）的剂量递增设计为加速下一代靶向疗法在早期临床阶段的测试提供了新的范式。[1] PF-07799933（ARRY-440）是一种新一代选择性全突变 BRAF 抑制剂。它不是全突变 RAF 抑制剂，没有 prisorafenib 的代谢风险，可以与 MEK 抑制剂联合使用，并且能够穿越血脑屏障。鉴于 BRAF 突变癌症患者在现有治疗失败后面临巨大的未满足医疗需求，我们旨在在首次人体 I 期试验中实施基于数据的剂量递增策略，以在更短的时间内在较少的患者中实现所需的药物暴露。该化合物也被称为PF-07799933和ARRY-440。它是一种能够穿透大脑的选择性全突变BRAF抑制剂。在BRAF V600突变和非V600突变癌症的临床前研究中显示出抗肿瘤活性，并且可以与MEK抑制剂联合使用。其分子式为C₁₈H₁₅Cl₂F₂N₅O₃S。该产品不是药物，且没有临床试验或监管批准状态。
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| 分子式 |
C18H15CL2F2N5O3S
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|---|---|
| 分子量 |
490.31
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| 精确质量 |
489.0240722
|
| CAS号 |
2754408-94-9
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| PubChem CID |
165150001
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
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| 沸点 |
585.0±60.0 °C(Predicted)
|
| 熔点 |
1.72±0.1 g/cm3(Temp: 20 °C; Press: 760 Torr)(Predicted)
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| LogP |
2.8
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| tPSA |
103Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
9
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
826
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CN1C=NC2=C(C1=O)C(=C(C=C2)NC3=C(C=CC(=C3Cl)NS(=O)(=O)N4CC(C4)F)F)Cl
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| InChi Key |
SHENFUUACGRLOZ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H15Cl2F2N5O3S/c1-26-8-23-11-4-5-12(15(19)14(11)18(26)28)24-17-10(22)2-3-13(16(17)20)25-31(29,30)27-6-9(21)7-27/h2-5,8-9,24-25H,6-7H2,1H3
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| 化学名 |
N-[2-chloro-3-[(5-chloro-3-methyl-4-oxoquinazolin-6-yl)amino]-4-fluorophenyl]-3-fluoroazetidine-1-sulfonamide
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| 别名 |
2754408-94-9; PF07799933; Claturafenib (USAN); PF-07799933; SCHEMBL25280690; N-(2-chloro-3-((5-chloro-3-methyl-4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-6-yl)amino)-4-fluorophenyl)-3-fluoroazetidine-1-sulfonamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0395 mL | 10.1976 mL | 20.3953 mL | |
| 5 mM | 0.4079 mL | 2.0395 mL | 4.0791 mL | |
| 10 mM | 0.2040 mL | 1.0198 mL | 2.0395 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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