Tubulin polymerization/microtubule

以剂量和时间依赖性方式，VERU-111（2.5-80 nM；24-48 小时）抑制 Panc-1、AsPC-1 和 HPAF-II 细胞的发育（24 小时：IC50 为 25、35 、 和 35 nM，分别；48 小时：IC50 分别为 11.8、15.5 和 25 nM）[4]。 VERU-111（5-20 nM；24 小时）以剂量依赖性方式将 Panc-1 和 AsPC-1 细胞阻滞在 G2/M 期 [4]。 VERU-111（5-20 nM；24 小时）表现出对 caspase 3 和 9 前体的剂量依赖性抑制以及 caspase-3 和 9 的激活，促进 Bax 和 Bad 的产生，并抑制 Bcl-2 AsPC 的表达Panc-1细胞中的-1和Bcl-xl蛋白[4]。

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化合物II/沙比沙布林和IAT对癌症细胞（包括多药耐药细胞）表现出潜在的细胞毒性使用SRB测定评估化合物II/ 化合物II/沙比扎布林和IAT与微管蛋白上的秋水仙碱结合位点结合，抑制微管蛋白聚合，并诱导癌症细胞凋亡开发了竞争性质谱结合测定法来研究小分子抑制剂与微管蛋白的相互作用，并应用于检测我们的先导化合物SMART-H，该化合物选择性结合微管蛋白上秋水仙碱位点。化合物II/Sabizabulin和IAT化合物与秋水仙素有效竞争微管蛋白结合（图1a），效力与鬼臼毒素相似。阴性对照长春花碱没有抑制秋水仙素与微管蛋白的结合，成功证明了这种竞争性质谱结合测定的特异性。将猪脑微管蛋白（纯度>97%）与II或IAT（5μM）一起孵育，以测试它们对微管蛋白聚合的影响（图1b）。化合物II和IAT在15分钟时分别抑制微管蛋白聚合47%和40%。以5μM的秋水仙素作为阳性对照，抑制微管蛋白聚合32%。这些数据表明，II和IAT都比秋水仙碱更好地抑制微管蛋白聚合，并表明这些化合物与SMART化合物结合在同一位点。将PC-3和PC-3/TxR细胞暴露于0.8-600 nmol/L的化合物II、IAT或多西他赛24小时。通过DNA-组蛋白复合物形成测量，化合物II/Sabizabulin和IAT在24小时内诱导PC-3（图1c）和PC-3/TxR（图1d）细胞凋亡的能力相同。尽管多西他赛能有效诱导PC-3细胞的细胞凋亡，但由于P-糖蛋白的过表达，PC-3/TxR细胞的凋亡明显较弱[7]。

将媒介物治疗组与 VERU-111（50 μg/小鼠；瘤内注射；每周 3 次，持续三周）进行比较，结果表明肿瘤生长显着减少。给予 VERU-111 的小鼠没有表现出任何明显的毒性，尽管它们的体重不断增加 [4]。

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化合物II/SabizabulinIAT抑制紫杉醇抗性前列腺（PC-3/TxR）异种移植生长亲本PC-3和紫杉醇抗性的前列腺癌症PC-3（PC-3/TxR）细胞接种到裸鼠中，并使肿瘤体积达到约150～300mm3。多烯紫杉醇（10或20mg/kg）是一种被批准用于晚期前列腺癌症临床的抗癌药物，用于比较。PC-3/TxR肿瘤异种移植物生长迅速，研究结束时肿瘤体积达到1500-2500mm3。尽管静脉注射多西他赛（10和20mg/kg）在两种模型中都显示出体内抗癌活性（图2a，b），但当静脉注射10mg/kg时，肿瘤生长抑制（TGI）效果从PC-3肿瘤的84%TGI降低到PC-3/TxR肿瘤的14%TGI（表V）。在较高剂量（20mg/kg）下，多西他赛引起PC-3肿瘤的部分消退（>100%TGI），但在PC-3/TxR肿瘤中仅引起56%的TGI。与PC-3肿瘤相比，多西他赛在PC-3/TxR肿瘤中的疗效降低，表明疗效受到P-糖蛋白介导的耐药性的损害。这些结果与我们的体外细胞毒性和凋亡数据一致。与多西他赛在PC-3/TxR肿瘤中缺乏疗效相反，化合物II/Sabizabulin（6.7mg/kg）口服给药，显示TGI超过100%，对体重没有影响（图2b和表V）。此外，在用化合物II治疗的4只携带PC-3/TxR肿瘤的裸鼠中，有2只在第19天没有肿瘤。进一步利用PC-3/TxR异种移植物模型来评估使用不同给药方案给药时化合物II和IAT的疗效。II的最大耐受剂量（体重减轻>20%）为10mg/kg，每天口服一次，持续4天；或每天两次（b.i.d.）给药5天时为3.3mg/kg（数据未显示）。如图2c所示，在第一周的前四天，每天两次服用3.3 mg/kg的II/Sabizabulin，然后在第2周和第4周将时间表改为每天一次。在第4-19天获得偏回归。TGI为97%，七只小鼠中的一只在第26天没有肿瘤。较高剂量（10mg/kg）和较低给药频率（q2d）的化合物II（图2d）在第13-29天引发了部分肿瘤消退，表明替代给药方案成功抑制了PC-3/TxR异种移植物的生长。化合物IAT以10或30mg/kg b.i.d.的剂量口服给裸小鼠，在第1至4周之间每周五次（图2c）。接受10mg/kg IAT的小鼠的TGI值为59%，而在接受更高剂量（30mg/kg）IAT治疗的动物中，从第19天到研究终止（第26天）观察到部分回归（>100%TGI）。载体组的一些小鼠在终点体重较低，部分原因是肌肉萎缩和/或癌症恶病质。相反，用化合物II（3.3mg/kg）或IAT（30mg/kg）治疗的小鼠体重增加（表V），表明这些优化剂量的II或IAT具有良好的耐受性[7]。

体外微管蛋白聚合测定[5,6]
根据Wang等人描述的方法，将猪脑微管蛋白（纯度>97%）与普通微管蛋白缓冲液（80 mM PIPES、2.0 mM MgCl2、0.5 mM EGTA和1 mM GTP）混合，在4°C下达到3 mg/mL的最终浓度。在96孔板中混合微管蛋白溶液和测试化合物后，立即在37°C的SYNERGY 4微孔板读取器中孵育微管蛋白聚合测定，并在340nm下每30秒监测65分钟。以紫杉醇作为微管蛋白聚合的阳性对照，秋水仙碱和ABI-274作为微管蛋白解聚的阳性对照进行重复实验。

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用于亲和性测定的SPR[5,6]
在配备有葡聚糖SPR传感器芯片（Reichert Polycarboxylate Hydrogel chip P/N 13206067）的Reicher4SPR系统中使用SPR技术分析与微管蛋白的结合亲和力。然后，将50μg/mL微管蛋白固定在传感器芯片表面，以获得12μRIU。芯片上的四个流动池中的一个作为阴性对照。在传感器芯片表面上注射不同浓度的4v或秋水仙碱进行缔合分析，然后进行离解分析。实验数据在25°C下使用运行缓冲液PBST（8 mM Na2HPO4、136 mM NaCl、2 mM KH2PO4、2.6 mM KCl和0.05%（v/v）Tween 20，pH 7.4）获得。平衡离解常数（KD）是用TraceDrawer软件通过稳态拟合模式计算的。

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竞争性质谱结合分析[7]
如前所述，进行了竞争性质谱结合研究。秋水仙素（1.2μM）与猪脑微管蛋白（1.0 mg/mL）在37°C的孵育缓冲液[80 mM哌嗪-N，N′-双（2-乙磺酸）（PIPES），2.0 mM氯化镁（MgCl2），0.5 mM乙二醇四乙酸（EGTA），pH 6.9]中孵育1小时。使用不同浓度（0.2-200μM）的鬼臼毒素（阳性对照）、化合物II/Sabizabulin、化合物IAT和长春花碱（阴性对照）与秋水仙素与微管蛋白的结合竞争。孵育1小时后，使用Li等人的超滤法（微浓缩器）获得滤液。作者的个人副本分子截留尺寸为30 kDa。在没有任何竞争对手的情况下，目标化合物抑制每种配体结合的能力表示为对照结合的百分比。每个实验进行三次。

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体外微管聚合试验[7]
将猪脑微管蛋白（0.4 mg）与5μM的目标化合物或载体[二甲基亚砜（DMSO）]混合，并在100μL缓冲液[80 mM PIPES、2.0 mM MgCl2、0.5 mM EGTA、pH 6.9和1 mM鸟苷-5′-三磷酸（GTP）]中孵育。每分钟监测一次340 nm波长的吸光度，持续15分钟。分光光度计保持在37°C进行微管蛋白聚合。

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代谢稳定性[7]
代谢稳定性研究是通过在37°C的振荡水浴中，将感兴趣的化合物（0.5μM）在总反应体积为1 mL的反应缓冲液中孵育进行的，该缓冲液中含有1 mg/mL微粒体蛋白[0.2 M磷酸盐缓冲溶液（pH 7.4）、1.3 mM烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐（NADP+）、3.3 mM葡萄糖-6-磷酸和0.4 U/mL葡萄糖-6-磷酸脱氢酶]。混合的人肝微粒体用于检查代谢稳定性。NADPH再生系统（溶液A和B）购自BD Biosciences（马萨诸塞州贝德福德）。反应溶液中DMSO的总浓度约为0.5%（v/v）。在5、10、20、30、60和90分钟时，从用于测定代谢稳定性的反应混合物中取样等分试样（100μL）。加入含有200 nM内标（23）的乙腈（150μL）以淬灭反应并沉淀蛋白质。然后在室温下以4000g离心样品15分钟，并通过液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）直接分析上清液。

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CYP酶特异性测定[7]
进行了五次CYP酶抑制试验，并通过LC-MS/MS进行分析。简而言之，对于CYP2D6、CYP2C9、CYP1A2和CYP2C19，将0.1 mg/mL微粒体蛋白与其特定底物在37°C的0.1 M磷酸钾缓冲液（pH 7.4）中孵育，而0.05 mg/mL微粒体蛋白用于CYP3A4试验。底物睾酮（50μM）、右美沙芬（7μM），（S）-苯妥英钠（80μM）；双氯芬酸（7μM）和非那西丁（100μM）分别用于CYP 3A4、2D6、2C19、2C9、1A2抑制试验。在这些测定中检测了0.04-50μM范围内的化合物II/Sabizabulin或IAT。用于CYP 3A4、2D6、2 C19、2 C9和1A2抑制试验的阳性对照分别为酮康唑（0.0009-1μM）、奎宁定（0.0009–1μM）、噻氯匹啶（0.019–20μM），磺胺苯唑（0.019-20μM，和呋喃茶碱（0.04–50μM）。

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水溶性[7]
化合物II/Sabizabulin和IAT的溶解度通过多屏幕溶解度滤板结合LC-MS/MS测定。简而言之，将198μL磷酸盐缓冲盐水（PBS）缓冲液（pH 7.4）装入96孔板中，分配2μL 10mM试验化合物（在DMSO中），在室温（N0 3）下轻轻摇动（200-300rpm）混合1.5小时。将平板在800g下离心10分钟，滤液用于通过LC-MS/MS方法测定其浓度和试验化合物的溶解度。

细胞增殖测定 [4]
细胞类型： Panc-1、AsPC-1、HPAF-II 细胞
测试浓度： 2.5、5、10、 20、40、80 nM
孵育时间：24、48 小时
实验结果：抑制 PanCa 细胞的生长和剂量- 和时间相关的方式。治疗 24 小时后，VERU-111 在 Panc-1、AsPC-1 和 HPAF-II 中的 IC50 分别为 25、35 和 35 nM，48 小时后)) 处理后它们分别为 11.8、15.5 和 25 nM。

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细胞凋亡分析 [4]
细胞类型： Panc-1、AsPC-1 细胞
测试浓度： 5、10、20 nM
孵育持续时间：24小时
实验结果：Panc-1和AsPC-1细胞在G2/M期方法中停滞。

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蛋白质印迹分析[4]
细胞类型： AsPC-1 和 Panc-1 细胞
测试浓度： 5、10、 20 nM
孵育持续时间：24 小时
实验结果：Caspase 3 和 9 前体以及 Caspase-3 的剂量依赖性抑制和 9 9 在激活的 AsPC-1 和 Panc-1 细胞中。诱导 Bax 和 Bad 的表达并抑制 Bcl-2 和 Bcl-xl 蛋白的表达。

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前列腺癌和胶质瘤细胞系的细胞培养和细胞毒性测定[7]
前列腺癌症细胞系（LNCaP，PC-3，DU145，PPC-1）和神经胶质瘤细胞系（U87MG）来源于ATCC。由于前列腺癌症的患病率和多西他赛治疗该疾病的常用性，选择前列腺癌症细胞进行这些研究。神经胶质瘤细胞系（U87MG）用于检测化合物在另一种类型的癌症（即神经胶质瘤）中的活性，并与脑-血屏障研究相协调。紫杉醇耐药性PC-3（PC-3/TxR；一种过度分泌P-糖蛋白的前列腺癌症细胞系）是密歇根大学安娜堡分校病理学系Evan T.Keller博士的礼物。PC-3/TxR被用作MDR模型。所有细胞系均经ATCC测试和认证，并立即扩增和冷冻，以便每2~3个月从同一批细胞的冷冻瓶中重新启动。细胞培养用品购自Cellgro Mediatech。前列腺癌症细胞系维持在补充有10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培养基中，而神经胶质瘤癌症细胞系保持在含有2mML-谷氨酰胺和10%FBS的Eagle's MEM培养基中。如前所述，通过磺基罗丹明B（SRB）测定法在细胞系中测试感兴趣的化合物、紫杉醇和多烯紫杉醇的抗增殖活性。

动物/疾病模型： 6周龄雌性无胸腺裸鼠（携带AsPC-1细胞）
剂量： 50 μg/只
给药途径： 瘤内注射；每周3次，持续3周
实验结果： 有效抑制肿瘤生长。\n

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\n\n药代动力学研究[7]
\n使用6-8周龄雄性ICR小鼠（每组3或4只）研究化合物II/沙比扎布林或IAT的药代动力学(PK)。两种化学品分别配制于DMSO/聚乙二醇300 (PEG300) (1/9，v/v) 和Tween80/DMSO/H2O (2/2/6，v/v/v) 混合溶剂中，用于静脉推注（iv，10 mg/kg）和口服（po，20 mg/kg）给药。静脉注射的给药体积为50 μL，经尾静脉注射；口服给药的给药体积为200 μL，经口灌胃。静脉给药后，分别于给药后2、5、15和30分钟，以及1、2、4、8、16和24小时采集血样。口服给药后，分别于给药后0.5、1、1.5、2、3、4、8、16和24小时采集血样。将血液样本以 8,000 g 离心 5 分钟制备血浆样本。所有血浆样本立即储存于 -80°C 直至分析。实验采用雌性 Sprague-Dawley 大鼠（每组 3 或 4 只）。大鼠胸颈静脉导管购自 Braintree Scientific Inc.（Braintree，MA）。所有动物在给药前均已喂食。静脉推注 (iv) 和口服 (po) 给药的剂量分别为 2 mL/kg 和 4 mL/kg。化合物 II/沙比扎布林 (Sabizabulin) 或 IAT 以 5 mg/kg 的剂量（溶于 DMSO/PEG300，1/9，v/v）经胸颈静脉静脉注射。根据体表面积，大鼠的剂量选择为小鼠剂量的一半。静脉推注后，用 1 mL 肝素化生理盐水冲洗导管。注射等体积的肝素化生理盐水以补充抽取的血液，并通过颈静脉导管分别于10、20、30分钟以及1、2、4、8、12和24小时采集血样（250 μL）。化合物II/沙比扎布林和IAT也以10 mg/kg的剂量（溶于Tween80/DMSO/H2O，2/2/6，v/v/v）经口灌胃给药，以评估其口服生物利用度。所有口服给药后的血样（250 μL）均于30、60、90分钟、120分钟、150分钟、180分钟、210分钟、240分钟以及8、12和24小时通过颈静脉导管采集。采血前已准备好肝素化注射器和试管。本研究使用了体重约10 kg的雌性比格犬。实验组（N04）犬只单次静脉注射化合物II/沙比扎布林或IAT（2 mg/kg，溶于DMSO/PFG300，1/9，v/v），给药体积为0.2 mL/kg。分别于10、20、30分钟以及1、2、4、8、12、24、48、96小时采集血样。口服组（N04）犬只单次口服化合物IAT（5 mg/kg，溶于Tween80/DMSO/H2O，2/2/6，v/v/v），给药体积为1 mL/kg。我们选择的犬口服剂量为5 mg/kg，该剂量为小鼠剂量的四分之一，略高于校正体表面积差异所需的剂量（即小鼠剂量的六分之一），这是因为体外研究表明，这些化合物在犬体内的代谢稳定性较低（数据未显示）。分别于20、40、60、80、100、120、150、180、210分钟以及4、8、12、24、48、96小时采集血液样本。采用蛋白质沉淀法进行样品制备。将含有内标的乙腈（ACN）200 μL加入100 μL血浆中，并充分涡旋振荡15秒。离心后，取上清液进行LC-MS/MS分析。采用非房室模型分析法测定药代动力学参数。\n

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\n\n脑渗透研究[7]
\n裸鼠单次口服（20 mg/kg）化合物II/沙比扎布林和IAT，以及单次腹腔注射（10 mg/kg）多西他赛后，采集血浆和脑组织。所有三种化合物均配制于Tween80/DMSO/H2O（2/2/6，v/v/v）溶液中。在给药后指定时间点（1 h和4 h），采集裸鼠血液和脑组织。血浆的制备方法如前所述，并储存于-80°C直至分析。脑组织样本用Bessman组织粉碎机研磨成粉末。粉碎机在液氮中预冷1分钟。将约 50 mg 组织置于粉碎机上，将整个装置置于液氮中冷却 1 分钟，然后将组织研磨成细粉。立即将粉末转移至样品瓶中，加入 4 倍体积的水涡旋振荡，然后加入 10 倍体积含有内标的乙腈进行提取。离心后，用 LC-MS/MS 分析上清液，以测定其在脑组织和血浆中的浓度。\n

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\n\nPC-3 和紫杉醇耐药 PC-3 (PC-3/TxR) 肿瘤异种移植研究 [7]
\n将 PC-3 或 PC-3/TxR 细胞（10⁸ 个/mL）制备于含 10% FBS 的培养基中，并与高浓度、不含酚红的 Matrigel 按 1:1 的比例混合。将100 μL混合物（每只动物5×10⁶个细胞）皮下注射到6-8周龄雄性无胸腺裸鼠的侧腹部，建立肿瘤模型。测量肿瘤的长和宽，并根据公式π/6 × L × W²计算肿瘤体积（mm³），其中长（L）和宽（W）的单位为mm。当肿瘤体积达到约150-300 mm³时，分别给予动物静脉注射制剂[Tween80/乙醇/生理盐水（7.5/7.5/85）]或口服制剂[Tween80/DMSO/H₂O（2/2/6）]治疗。在PC-3和PC-3/TxR异种移植模型中，多西他赛（10或20 mg/kg）于第1天和第9天静脉给药；化合物II/沙比扎布林（6.7 mg/kg）在PC-3/TxR异种移植模型中口服给药（每日一次，每周五次）。在另一项PC-3/TxR异种移植研究中，化合物II/沙比扎布林（3.3 mg/kg）在第一周的前四天每日两次给药，之后由于毒性反应，在第2-4周改为每日一次，每周五天。在小鼠身上，化合物 IAT（10 和 30 mg/kg）以口服给药的方式给药，每周两次，持续四周；同时，在 PC-3/TxR 异种移植瘤模型中，也考察了更高剂量的化合物 II（10 mg/kg），采用隔日（q2d）给药的方式。

化合物 II/沙比扎布林和 IAT 表现出良好的类药性 [7]
对化合物 II 和 IAT 的类药性，例如代谢稳定性、渗透性、水溶性和药物相互作用进行了考察（表 II）。化合物 II/沙比扎布林的代谢稳定性和水溶性均优于 IAT。两种化合物均表现出良好的渗透性，表明它们适合口服给药。此外，两种化合物在CYP酶抑制试验中均显示出较高的IC50值（微摩尔级），表明它们不会引起CYP介导的药物相互作用。

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小鼠、大鼠和犬的药代动力学研究[7]
表III总结了化合物II/沙比扎布林和IAT在ICR小鼠、Sprague-Dawley大鼠和比格犬单次静脉或口服给药后的药代动力学参数。化合物II在小鼠和大鼠中的清除率较低，表明其在这些物种中具有较长的代谢稳定性和最小的首过肝脏代谢。此外，化合物II在小鼠和大鼠中的分布容积适中，表明其在组织中分布广泛。令人惊讶的是，化合物II在犬中的总清除率很高。在犬血浆中观察到两种含量丰富的代谢物，一种是羟基化代谢物，另一种是质荷比母体化合物高34 m/z的未知代谢物（数据未显示），这与在犬肝微粒体中发现的代谢物一致。此外，化合物II与犬肝微粒体孵育时也观察到了丰富的代谢物，但在小鼠、大鼠或人肝微粒体中未观察到（数据未显示）。尽管如此，化合物II/沙比沙布林在大鼠、小鼠和犬中的口服生物利用度分别为21%、36%和50%，均可接受。化合物IAT在大鼠中的全身清除率较低，在小鼠和犬中的清除率中等。与化合物II类似，化合物IAT在这些物种中也表现出中等的分布容积。化合物IAT在三种物种中的口服生物利用度相当（24%~36%）。

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化合物 II/沙比沙布林和 IAT 在裸鼠体内的脑渗透性 测定了化合物 II 和 IAT 在裸鼠体内的全脑/血浆浓度比值，并与多西他赛进行了比较（表 IV）。化合物 IAT 的脑渗透性优于化合物 II 和多西他赛。化合物 II 在 1 小时和 4 小时的脑/血浆浓度比值均略高于多西他赛，而 IAT 在 1 小时和 4 小时的脑浓度分别达到血浆浓度的 14%–19%，在 1 小时和 4 小时的脑/血浆浓度比值均比多西他赛高 3.2 倍。

[1]. Structure-Guided Design, Synthesis, and Biological Evaluation of (2-(1H-Indol-3-yl)-1H-imidazol-4-yl)(3,4,5-trimethoxyphenyl) Methanone (ABI-231) Analogues Targeting the Colchicine Binding Site in Tubulin. J Med Chem . 2019 Jul 25;62(14):6734-6750.

[2]. Discovery of novel 2-aryl-4-benzoyl-imidazole (ABI-III) analogues targeting tubulin polymerization as antiproliferative agents. J Med Chem . 2012 Aug 23;55(16):7285-9.

[3]. ABI-231: A novel small molecule suppresses tumor growth and metastatic phenotypes of cervical cancer cells via targeting Human papilloma virus (HPV) E6 and E7. Cancer Research 78(13 Supplement):679-679.

[4]. Therapeutic efficacy of a novel βIII/βIV-tubulin inhibitor (VERU-111) in pancreatic cancer. J Exp Clin Cancer Res. 2019 Jan 23;38(1):29.

[5]. Structure-Activity Relationship Study of Novel 6-Aryl-2-benzoyl-pyridines as Tubulin Polymerization Inhibitors with Potent Antiproliferative Properties. J Med Chem. 2020 Jan 23;63(2):827-846.

[6]. Discovery of novel 2-aryl-4-benzoyl-imidazole (ABI-III) analogues targeting tubulin polymerization as antiproliferative agents. J Med Chem . 2012 Aug 23;55(16):7285-9.

[6]. Orally bioavailable tubulin antagonists for paclitaxel-refractory cancer. Pharm Res. 2012 Nov;29(11):3053-63.

盐酸沙比扎布林是一种小分子药物，目前处于I期临床试验阶段，并有一项在研适应症。

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沙比扎布林是一种口服生物利用度高的小分子微管蛋白抑制剂，具有潜在的抗肿瘤、抗病毒和抗炎活性。口服后，沙比扎布林与微管α和β亚基的秋水仙碱结合位点结合，使微管交联，从而抑制肿瘤血管内皮细胞和肿瘤细胞中的微管聚合。这会阻断有丝分裂纺锤体的形成，导致细胞周期停滞在G2/M期。因此，该药物会破坏肿瘤血管系统和肿瘤血流，剥夺肿瘤细胞的营养，并诱导细胞凋亡。此外，由于微管在细胞内运输中发挥重要作用，抑制其聚合可能破坏雄激素受体 (AR) 进入细胞核的运输，以及病毒在细胞内的转运。这可能降低病毒的复制和组装。抑制微管蛋白聚合也可能抑制促炎细胞因子的释放并破坏炎症细胞的活性。沙比扎布林不是 P-糖蛋白 (Pgp) 的底物，Pgp 是一种外排泵，过度表达时可能导致对紫杉烷类药物的耐药性。VERU-111 是一种用于多种治疗用途的研究性药物，目前正在临床试验 NCT04842747、NCT03752099、NCT04388826、NCT04844749、NCT05008510 和 NCT05079360 中进行研究。这些试验旨在评估其在SARS-CoV-2感染、转移性去势抵抗性前列腺癌（mCRPC）、成人呼吸窘迫综合征和转移性三阴性乳腺癌等疾病中的疗效、安全性和耐受性。
SABIZABULIN是一种小分子药物，目前已完成III期临床试验（涵盖所有适应症），并有5个在研适应症。

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作用机制
Veru-111是一种选择性微管蛋白抑制剂，目前正在进行胰腺癌治疗的临床试验。Veru-111通过增强miR-200C的表达来抑制α-和β-微管蛋白亚基。在黑色素瘤和前列腺癌细胞系中，它均显示出强大的抗增殖活性。它还能抑制微管聚合，并导致细胞周期停滞于 G2/M 期，这表明其具有抗肿瘤特性。

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背景：由于对现有治疗方法的反应不佳，胰腺癌 (PanCa) 的治疗极其困难。微管蛋白在细胞动力学中发挥着重要作用，因此是癌症治疗的重要分子靶点。在各种微管蛋白中，βIII 和 βIV 微管蛋白亚型主要与胰腺癌的进展、转移和化疗耐药性有关。然而，目前尚缺乏具有强效抗癌活性且毒性低的这些亚型的特异性抑制剂。方法：我们利用胰腺癌的体外（MTS、伤口愈合、Boyden 小室和实时 xCELLigence 检测）和体内（异种移植研究）模型，确定了一种新型小分子抑制剂 (VERU-111) 的抗癌分子机制和治疗效果。本研究采用蛋白质印迹法、免疫组织化学（IHC）、共聚焦显微镜、实时定量PCR（qRT-PCR）和原位杂交（ISH）分析，检测了VERU-111处理对β-微管蛋白亚型表达、细胞凋亡、肿瘤标志物和microRNA的影响。结果：我们发现了一种新型小分子抑制剂（VERU-111），它通过恢复miR-200c的表达，优先抑制具有临床意义的βIII和βIV微管蛋白亚型。因此，VERU-111有效抑制了胰腺癌细胞的致瘤性和转移性。VERU-111通过调节细胞周期调控蛋白（Cdc2、Cdc25c和Cyclin B1）和凋亡相关蛋白（Bax、Bad、Bcl-2和Bcl-xl），将细胞周期阻滞在G2/M期，并诱导胰腺癌细胞凋亡。在胰腺癌异种移植小鼠模型中，VERU-111 治疗也抑制了肿瘤生长（P < 0.01）。结论：本研究鉴定了一种βIII/βIV微管蛋白抑制剂，该抑制剂作为单药疗法或与常规治疗方案联合用于胰腺癌治疗具有极佳的潜力。[4]

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我们近期报道了微管蛋白与秋水仙碱结合位点抑制剂（CBSI）ABI-231（含有2-芳基-4-苯甲酰基咪唑，简称ABI）复合物的晶体结构。基于此及其他晶体结构，我们在此报道了一系列新型ABI-231吡啶类似物的构效关系研究，其中化合物4v对多种癌细胞系的活性最强（平均IC50约为1.8 nM）。我们解析了另一种强效CBSI ABI-274和化合物4v与微管蛋白复合物的晶体结构，并证实了它们与秋水仙碱结合位点的直接结合。化合物 4v 抑制微管蛋白聚合，显著抑制 A375 黑色素瘤肿瘤生长，诱导肿瘤坏死，破坏肿瘤血管生成，并导致体内肿瘤细胞凋亡。综上所述，这些研究表明化合物 4v 代表了一种很有前景的新一代微管蛋白抑制剂。[5]

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基于我们之前报道的 ABI-I 和 ABI-II 类似物，我们设计并合成了新型 ABI-III 化合物。ABI-III 化合物对多种黑色素瘤和前列腺癌细胞系具有高度活性，其中活性最佳的化合物平均 IC50 值为 3.8 nM。它们不是 Pgp 的底物，因此可能有效克服 Pgp 介导的多药耐药性。ABI-III 类似物通过抑制微管蛋白聚合发挥其作用机制。[6]

C21H20CLN3O4

413.854204177856

413.114233

C, 60.95; H, 4.87; Cl, 8.57; N, 10.15; O, 15.46

2635953-17-0

1332881-26-1

155922982

Typically exists as solids at room temperature

3

5

6

29

534

0

Cl.O(C)C1C(=C(C=C(C=1)C(C1=CN=C(C2=CNC3C=CC=CC2=3)N1)=O)OC)OC

Sabizabulin hydrochloride; VERU-111 hydrochloride; 917KGG1Y1X; UNII-917KGG1Y1X; 2635953-17-0; Sabizabulin hydrochloride (USAN); SABIZABULIN HYDROCHLORIDE [USAN]; Methanone, (2-(1H-indol-3-yl)-1H-imidazol-5-yl)(3,4,5-trimethoxyphenyl)-, hydrochloride (1:1);

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。