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TMB dihydrochloride x.hydrate

别名: Sure Blue TMB dihydrochloride x.hydrate
目录号: V99445
COA 产品数据 产品说明书 SDS
TMB（二盐酸盐 x.hydrate）是 TMB 的二盐酸盐 x 水合物形式。
TMB dihydrochloride x.hydrate CAS号: 207738-08-7
产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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1g
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产品描述
TMB（二盐酸盐 x 水合物）是 TMB 的二盐酸盐 x 水合物形式。TMB（二盐酸盐 x 水合物）是一种无毒、无致突变性的无色染料，也是辣根过氧化物酶检测系统的显色剂。TMB（二盐酸盐 x 水合物）可用作活性氧和活性氮（ROS/RNS）的光声探针，并能与次氯酸盐、过氧化氢、单线态氧和二氧化氮反应生成蓝色氧化产物。TMB（二盐酸盐 x 水合物）可检测大肠杆菌 ATCC 25922 细胞外膜产生的单线态氧。
TMB二盐酸盐x水合物（3,3',5,5'-四甲基联苯胺二盐酸盐水合物，CAS 207738-08-7，分子量313.27（无水），分子式C1₆H20N2·2HCl·xH2O）是一种水溶性显色底物，可用于辣根过氧化物酶（HRP）的检测。它是一种无色、无毒、无致突变性的染料，广泛用于酶联免疫吸附试验（ELISA）、蛋白质印迹法、免疫组织化学（IHC）和其他基于HRP的检测系统。它产生一种可溶性蓝色产物（λmax 370 nm和652 nm），可通过分光光度法进行测定。
生物活性&实验参考方法
靶点
The primary target of TMB is horseradish peroxidase (HRP, EC 1.11.1.7), a heme-containing enzyme commonly used as a label in immunoassays. In the presence of hydrogen peroxide (H2O2), HRP catalyzes the one-electron oxidation of TMB to form a blue charge-transfer complex (TMB radical cation), which can be further oxidized to a yellow diimine product after acidification (H2SO4 or H3PO4) for measurement at 450 nm. TMB also detects reactive oxygen/nitrogen species (ROS/RNS).
体外研究 (In Vitro)
TMB（二盐酸盐 x 水合物）可以与大肠杆菌 ATCC 25922 细胞紧密结合，而不是被内化，从而检测外膜上产生的单线态氧[1]。
体外实验中，TMB（0.1-1 mg/mL）用于辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测方法。在典型的酶联免疫吸附试验（ELISA）中，HRP标记的检测抗体在0.01-0.03% H2O2存在下氧化TMB，产生蓝色（A₆₅2）。加入2 M H2SO4终止反应后，读取黄色产物的吸光度（A4₅0）。HRP的检测限低至10-¹⁷ mol。TMB优于其他底物（例如ABTS、OPD），因为它具有低背景、高灵敏度和无致癌性等优点。它还能与次氯酸盐、单线态氧和NO2反应生成蓝色氧化产物。在细菌研究中，TMB可用于检测大肠杆菌产生的单线态氧。
体内研究 (In Vivo)
TMB二盐酸盐通常不用于体内实验，它是一种体外诊断试剂。然而，它已被探索作为一种光声探针，用于检测动物组织中的活性氧/活性氮（ROS/RNS）。将其局部注射到肿瘤组织中，然后进行光声成像，可以绘制ROS的产生图。除诊断应用外，它没有其他显著的体内活性。
酶活实验
对于HRP酶促反应，将捕获抗体包被于96孔微孔板中，并与抗原和HRP标记的检测抗体孵育。TMB溶液：将TMB二盐酸盐（0.1 mg/mL）溶解于含有0.01-0.03% H2O2的50 mM磷酸-柠檬酸缓冲液（pH 5.0）中。每孔加入100 uL溶液，室温孵育5-30分钟。加入100 uL 2 M H2SO4或0.5 M H3PO4终止反应。分别在450 nm（黄色产物）或652 nm（蓝色产物）处读取吸光度。对于动力学反应，每30秒连续测量一次A₆₅2，持续10分钟。对于单线态氧的检测，将大肠杆菌 ATCC 25922 细胞悬液与 TMB (10-50 uM) 在 37°C 下孵育 30 分钟。通过测量蓝色显色 (A₆₅2) 来指示单线态氧的产生。
细胞实验
对于基于细胞的检测（例如，细胞 ELISA、ELISpot），细胞经固定、透化、封闭后，与 HRP 标记的抗体孵育。加入 TMB 底物后，在显微镜下观察蓝色显色，或在细胞裂解后定量分析溶液中的蓝色显色。对于细胞内 ROS 的检测，细胞在刺激（例如，LPS、H2O2）后，于 PBS 中与 TMB（10-100 uM）孵育 10-30 分钟，然后通过 A₆₅2 法测定细胞裂解液中的蓝色氧化产物。TMB 无细胞毒性，浓度高达 1 mM 时对细胞活力无影响。
动物实验
对于体内ROS/RNS检测，将TMB（10-100 μL，浓度为1-10 mg/mL，溶于PBS）瘤内或静脉注射到荷瘤小鼠体内。10-30分钟后，对动物进行光声成像（激发波长680-750 nm）。信号强度与组织中ROS/RNS水平相关。出于诊断目的，通常不使用动物。不适用于疗效评估。
药代性质 (ADME/PK)
该二盐酸盐极易溶于水（加热至45℃并超声处理后，在水中溶解度至少可达1 mg/mL）。储备液（0.1 mg/mL，溶于50%乙酸或磷酸-柠檬酸缓冲液）在4℃下密封保存（避光）可稳定数月。工作液需在使用前新鲜配制。TMB在体内清除迅速，不适用于全身给药。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
TMB二盐酸盐是一种无毒、无致突变性的显色剂，并非危险物质。但其粉末可能引起轻微的皮肤/眼睛刺激，使用时请佩戴个人防护装备。无致癌性，可安全用于常规实验室用途。
参考文献

[1]. Bresolí-Obach R, et al. Tetramethylbenzidine: An Acoustogenic Photoacoustic Probe for Reactive Oxygen Species Detection. Sensors (Basel). 2020 Oct 21;20(20):5952.

[2]. A stable and highly sensitive 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine-based substrate reagent for enzyme-linked immunosorbent assays. J Immunol Methods. 2000 Jan 13;233(1-2):47-56.
其他信息
TMB是ELISA、Western blotting和IHC中最常用的HRP底物。它是一种体外诊断试剂，并非获批药物。TMB于1979年研制成功，已取代了OPD和ABTS等致癌底物。仅供研究使用，不可用于人体治疗。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C16H22CL2N2.XH2O
分子量
313.2653
精确质量
330.127
CAS号
207738-08-7
PubChem CID
19083738
外观&性状
Light brown to brown solid powder
沸点
459.8ºC at 760 mmHg
熔点
>300ºC
闪点
231.9ºC
蒸汽压
3.01E-09mmHg at 25°C
LogP
6.518
tPSA
52.04
氢键供体(HBD)数目
5
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
21
分子复杂度/Complexity
226
定义原子立体中心数目
0
SMILES
Cl[H].Cl[H].N([H])([H])C1=C(C([H])([H])[H])C([H])=C(C([H])=C1C([H])([H])[H])C1C([H])=C(C([H])([H])[H])C(=C(C([H])([H])[H])C=1[H])N([H])[H]
InChi Key
KVCWTKDFVVSVSJ-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C16H20N2.2ClH.H2O/c1-9-5-13(6-10(2)15(9)17)14-7-11(3)16(18)12(4)8-14;;;/h5-8H,17-18H2,1-4H3;2*1H;1H2
化学名
4-(4-amino-3,5-dimethylphenyl)-2,6-dimethylaniline;hydrate;dihydrochloride
别名
Sure Blue TMB dihydrochloride x.hydrate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.1921 mL 15.9607 mL 31.9213 mL
5 mM 0.6384 mL 3.1921 mL 6.3843 mL
10 mM 0.3192 mL 1.5961 mL 3.1921 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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