Pyronine B

别名: 派洛宁B; Xanthylium,3,6-bis(diethylamino)-, chloride (1:1)、吡啰红B; 吡罗红B; 派洛宁B (吡罗红B);派洛宁B,Amresco;派洛宁B,BS;派洛宁Y;吡啰红B;哌罗宁B;派洛宁 B
目录号: V5480 纯度: ≥98%
Pyronin B 是一种有机阳离子染料,可用于细菌、霉菌和核糖核酸的染色。
Pyronine B CAS号: 2150-48-3
产品类别: New15
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
Pyronin B 是一种有机阳离子染料,可用于细菌、霉菌和核糖核酸的染色。 Pyronin B 还可以作为小疏水 (SH) 蛋白通道的抑制剂(阻断剂/拮抗剂)。
生物活性&实验参考方法
靶点
Human Respiratory Syncytial Virus (hRSV) Small Hydrophobic (SH) protein ion channel. Pyronin B is a small-molecule inhibitor of this pentameric viroporin. The dissociation constant (Kd) for inhibition was determined to be approximately 6.8 µM.[1]
体外研究 (In Vitro)
浓度为 10 μM 时,Pyronin B (0-15 μM) 可抑制小疏水 (SH) 蛋白的通道活性约 60%,Kd 值为 6.8 μM [1]。 Pyronin B (0-0.25 μM) 对 Vero 细胞中 RSV 复制具有剂量依赖性影响,0.25 μM 时 TCID50(50% 组织培养感染剂量)= 0 [1]。当添加微量的 Ti (IV) 时,Pyronin B (10 μM) 可以与溴酸盐氧化,反应速率大大加快,具有 555 nm 的独特吸收光谱[2]。
派若宁 B 被用作动力学分光光度法测定痕量钛(IV)的比色指示剂。在0.02 mol/L硫酸溶液中,派若宁 B 与过氧化氢发生缓慢的氧化反应。加入痕量Ti(IV)可急剧加速(催化)该反应速率。在固定时间间隔(1.0–8.0分钟)内,派若宁 B 在其特征波长555 nm处吸光度的降低与催化剂Ti(IV)的浓度成正比。该反应在受控温度(40°C)下的水溶液中进行研究。[2]
派若宁 B 抑制了在平面脂双层(黑脂膜,BLM)中重构的 hRSV SH 蛋白的离子通道活性。在 10 µM 浓度下,派若宁 B 导致通道活性抑制约 60%,将单通道电导从 300 ± 70 pS(对照)降低至 120 ± 60 pS。[1]
使用 派若宁 B 浓度为 0、2.5、3、5、7、10 和 15 µM 构建了剂量反应曲线。将数据拟合至标准 S 型剂量反应曲线,得出有效 Kd(解离常数)约为 6.8 µM。[1]
在空斑实验中,派若宁 B 降低了人呼吸道合胞病毒(RSV 株 VR-1580)在 Vero 细胞中的复制。在 派若宁 B 浓度为 0.25 µM 时,RSV 的 50% 组织培养感染剂量(TCID50)降为零。[1]
通过溶液 NMR,使用在十二烷基磷酸胆碱(DPC)胶束中均匀 15N 标记的 SH 蛋白,监测了 派若宁 B 与 SH 蛋白的结合。用 派若宁 B(高达 4.8 mM)滴定引起了特定残基(主要在跨膜(TM)结构域两端,例如 N 端的 Ile-6、Ile-21;C 端的 Ile-38、Ala-39、Ile-40、Leu-41、Lys-43)骨架共振信号的显著化学位移扰动(CSP)。这将可能的结合位点定位在 SH 五聚体的一个保守表面。[1]
分子对接研究预测了 派若宁 B 在 SH 五聚体表面的两个可能结合位点,分别位于 TM 结构域的 N 端和 C 端,与 NMR CSP 数据一致。[1]
测试了 派若宁 B(10 µM)对 SH 蛋白突变体的抑制效果。对于位于提议的 C 端结合位点的 A39S 突变体,抑制几乎被取消(~10% 抑制)。位于 N 端的突变体(I21F, I21Y, H22F)也对抑制表现出敏感性降低(~20% 抑制),表明 TM 结构域两端之间存在潜在的串扰。[1]
细胞实验
抗病毒空斑实验: 将 Vero 细胞接种于 12 孔板中,培养过夜至约 90% 汇合度。以约 1 的感染复数(MOI)感染 RSV 株 VR-1580。感染后 2 小时,移除病毒接种物,更换为含有 2% 胎牛血清(FBS)和 1 µL 二甲基亚砜(DMSO)的新鲜 DMEM 培养基,其中含有或不含不同浓度的 派若宁 B。感染后 90 小时,收集培养上清液,使用 Reed-Muench 法计算 RSV 的 50% 组织培养感染剂量(TCID50)。实验重复三次,每个样品滴定两次。[1]
全细胞膜片钳(尝试): 用表达全长 hRSV SH 蛋白的质粒转染 HEK293 Phoenix 细胞。选择表达绿色荧光蛋白(AcGFP)标记的单个细胞进行全细胞膜片钳记录,试图在细胞环境中测量 SH 通道活性。然而,在 pH 7.4 或 5.5 条件下均未检测到 SH 蛋白依赖性的电流。测得的电流归因于内源性钾通道,并且本研究中无法重复先前报道的 SH 蛋白在低 pH 下的膜片钳激活。[1]
参考文献

[1]. Inhibition of the human respiratory syncytial virus small hydrophobic protein and structural variations in a bicelle environment. J Virol. 2014 Oct;88(20):11899-914.

[2]. Study of the Catalytic Effects of Trace Titanium on Oxidation of Pyronin B with Hydrogen Peroxide and Its Application[C]//Advanced Materials Research. Trans Tech Publications Ltd, 2013, 602: 1233-1237.

其他信息
吡罗宁B是一种有机氯化物盐,其阳离子为6-(二乙氨基)-N,N-二乙基-3H-呫吨-3-亚胺。根据制备方法的不同,吡罗宁B也可以FeCl3络合物的形式存在。它是一种组织学染料。它是一种有机氯化物盐和亚胺盐。它含有吡罗宁B(1+)离子。
在本研究中,吡罗宁B用作化学试剂(染料/指示剂)。在酸性介质中,过氧化氢可将其氧化,该反应由钛(IV)离子催化。[2]
所开发的方法用于分析测定岩石等样品中的痕量钛(IV),而非用于评估吡罗宁B作为治疗剂的疗效。[2]
确定了使用吡罗宁B进行催化反应的最佳条件:0.02 mol/L硫酸介质,1.0×10⁻⁵ mol/L吡罗宁B,0.08 mol/L过氧化氢,反应温度为40℃。在555 nm处监测吸光度。[2]
将0.0104 g吡罗宁B溶于100 mL容量瓶中的水中,配制成1.0×10⁻⁴ mol/L的吡罗宁B溶液。[2]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C21H27N2O+.CL-
分子量
358.90488
精确质量
358.181
CAS号
2150-48-3
相关CAS号
62669-69-6 (perchlorate)
PubChem CID
16524
外观&性状
Brown to black solid powder
熔点
174-176ºC
LogP
1.199
tPSA
19.39
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
3
可旋转键数目(RBC)
5
重原子数目
25
分子复杂度/Complexity
530
定义原子立体中心数目
0
InChi Key
CXZRDVVUVDYSCQ-UHFFFAOYSA-M
InChi Code
InChI=1S/C21H27N2O.ClH/c1-5-22(6-2)18-11-9-16-13-17-10-12-19(23(7-3)8-4)15-21(17)24-20(16)14-18;/h9-15H,5-8H2,1-4H3;1H/q+1;/p-1
化学名
[6-(diethylamino)xanthen-3-ylidene]-diethylazanium;chloride
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~20.83 mg/mL (~58.04 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.7863 mL 13.9315 mL 27.8629 mL
5 mM 0.5573 mL 2.7863 mL 5.5726 mL
10 mM 0.2786 mL 1.3931 mL 2.7863 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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