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Pyronine

别名: Pyronin Y; Pyronine 派洛宁Y; 派洛宁YPyroni;Xanthylium,3,6-bis(dimethylamino)-, chloride (1:1)吡啰红G; Xanthylium,3,6-bis(dimethylamino)-, chloride (1:1)派洛宁Y、;吡罗红G;焦宁Y;派洛宁Y (派洛宁G、吡罗红G);派洛宁Y ,Amresco;派洛宁Y, 高纯生物染料;3,6-双(二甲基氨基)占吨鎓氯化物;吡啰红G;吡啰红G,派洛宁Y;吡啰红Y; 派罗宁Y;派洛宁Y,高纯生物染色剂;3,6-双(二甲基氨基)呫吨鎓氯化物;派洛宁 Y
目录号: V5860
COA 产品数据 产品说明书 SDS
Pyronine 是一种呫吨类似物，用作染料以及细菌和生物染色剂。
Pyronine CAS号: 92-32-0
产品类别: DNA Stain
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
25mg
50mg
100mg
500mg
1g
2g
5g
10g
Other Sizes
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纯度: ≥98%

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产品说明书
产品描述

描述：吡罗宁是一种呫吨类似物，用作染料以及细菌和生物染色剂。它在电泳过程中会呈现红色条带，是一种能嵌入RNA的阳离子染料。研究还表明，它会在活细胞的线粒体中积累。吡罗宁Y是一种用于核酸的荧光鉴别染料，可与Nancy-520或甲基绿联合用于石蜡组织切片。


生物活性&实验参考方法
靶点
Pyronin Y (PY) is a fluorescent probe that binds to double-stranded RNA (dsRNA). Its targets within cells include various RNA subspecies such as messenger RNA (mRNA), transfer RNA (tRNA), and ribosomal RNA (rRNA). It is also known to localize to mitochondria and Cajal bodies. The binding is based on its interaction with RNA structures rather than a specific protein target.[4]
体外研究 (In Vitro)
为了评估福尔马林固定的EL4空白肿瘤、G蛋白转运腺癌细胞、刀豆蛋白刺激的小鼠脾细胞以及植物血凝素刺激的人外周血中细胞酶分散的R3327-RNA含量，吡咯宁Y与双链序列（特别是RNA）形成荧光复合物[1]。请解释基于吡咯宁Y的荧光染色技术。该方法已用于处理人网织红细胞，以对其RNA进行染色，为分选和过程分析做准备[2]。这种染料会聚集在活细胞的线粒体中。当吡咯宁Y浓度为1.7至3.3 μM时，几乎完全定位于培养细胞的线粒体中，并形成额外的线粒体。罗丹明123探针。在此剂量下，吡咯宁Y无害，但会抑制细胞分裂并诱导细胞凋亡[3]。长期以来，石蜡组织切片一直采用吡罗宁Y与其他染料（如甲基绿）联合染色进行差异染色。在甲基绿-吡罗宁Y染色切片中，细胞核不发荧光，而红细胞、弹性纤维、杏仁核腺泡细胞酶原颗粒、肝细胞表面膜和肾小管细胞均显示出强烈的绿色和/或红色荧光[4]。双链RNA（dsRNA），例如信使RNA（mRNA）、转移RNA（tRNA）和核糖体RNA（rRNA），均可与吡罗宁Y结合[5]。在活的NIH3T3细胞中，使用吡罗宁Y（12 µM）标记RNA。对荧光发射光谱（激发波长 514 nm）进行相量分析，揭示了至少四种不同的 PY 标记物质，它们具有不同的光谱特性和空间分布：1）核仁内的转录本，推测为核糖体 RNA (rRNA)；2）胞质内聚集的转录本，推测为信使核糖核蛋白 (mRNP) 复合物；3）由点状结构组成的丝状胞质结构，定位于线粒体周围；4）核仁附近的核结构，推测为卡哈尔体。[4]
对不同 PY 标记物质的平均发射波长和宽度进行了定量分析：核仁物质的波长为 559.6 ± 2.9 nm，宽度为 31.6 ± 1.4 nm；胞质物质的平均波长为 555.2 ± 1.7 nm，宽度为 30.2 ± 1.0 nm；核内RNA的平均波长为554.8 ± 1.7 nm，宽度为36.3 ± 3.1 nm。这些光谱差异虽然很小（相差<5 nm），但可以通过光谱相量分析进行区分。[4]
使用吡咯宁Y（红色）和线粒体标记物mito-eGFP（绿色）进行的双重标记实验表明，胞质中被吡咯宁Y标记的RNA斑点沿着线粒体轨道移动，表明其与线粒体基质存在相互作用，但两种信号的共定位非常少。[4]
细胞实验
活细胞成像和光谱相量分析：NIH3T3细胞培养于添加10%胎牛血清（FBS）和青霉素/链霉素的DMEM培养基中。在成像前24小时，将细胞接种于预先包被纤连蛋白（3 µg/mL）的35 mm培养皿中。接种时，细胞暴露于浓度为12 µM的吡罗宁Y。接种后5小时内进行成像，成像过程中细胞维持在37°C、5% CO₂的条件下。使用Lambda模式的共聚焦显微镜采集荧光图像，激发光源为514 nm激光（最大功率9%）。使用40倍水浸物镜，通过32个通道收集416 nm至728 nm的发射光。图像尺寸为256 x 256像素，像素停留时间为177.85 µs。 Z轴堆叠图像的采集步长约为1 µm。使用自定义软件（SimFCS）对λ堆叠图像进行光谱相量分析。每个像素的发射光谱经过傅里叶变换，生成光谱相量图中的坐标。在相量图中手动选择具有相似光谱特性的像素簇，并将其映射回细胞图像中的空间位置，以识别不同的RNA亚种及其与细胞结构（核仁、细胞质、细胞核、卡哈尔小体）的关联。[4]
与线粒体的共定位：NIH3T3细胞用mito-eGFP（一种线粒体靶向的增强型绿色荧光蛋白）和吡咯宁Y（12 µM）进行共标记。采集延时图像（512 x 512像素）以可视化红色PY标记的RNA斑点与绿色线粒体网络之间的空间关系和动态变化。图像以 6 秒的间隔拍摄。[4]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
本文引用了之前的研究（文中参考文献1-4），这些研究表明吡罗宁Y可能具有细胞毒性和细胞抑制特性，这与其线粒体定位和与RNA的相互作用有关。然而，本研究[4]本身并未提供在实验条件下（12 µM，暴露5小时）吡罗宁Y的新的定量毒性数据（例如IC50、LD50）。该研究指出，在他们的实验中，细胞在暴露5小时内进行了成像。[4]
参考文献

[1]. Flow cytometric analysis of RNA content in different cell populations using pyronin Yand methyl green. Cytometry. 1982 Jul;3(1):28-35.

[2]. Flow cytometry of human reticulocytes based on RNA fluorescence. Cytometry. 1981 Mar;1(5):313-20.

[3]. Cytostatic and cytotoxic properties of pyronin Y: relation to mitochondrial localization of the dye and its interaction with RNA. Cancer Res. 1986 Nov;46(11):5760-6.

[4]. Pyronin Y as a fluorescent stain for paraffin sections. Histochem J. 2002 Jun-Jul;34(6-7):299-303.

[5]. Spectral phasor analysis of Pyronin Y labeled RNA microenvironments in living cells. Biomed Opt Express. 2013 Jan 1;4(1):171-7.
其他信息
吡罗宁Y是一种有机氯盐，其阳离子为6-(二甲氨基)-N,N-二甲基-3H-呫吨-3-亚胺。当与甲基绿联用时，它能选择性地显示RNA（红色），而不显示DNA（绿色），这可以通过Unna-Pappenheim法实现。它是一种组织学染料。它是一种含有吡罗宁Y阳离子的亚胺和有机氯盐。呫吨类染料常用作细菌和生物过程的染色剂。同义词：吡罗宁；吡罗宁G；吡罗宁Y。它也可以指吡罗宁B，其阳离子为二乙基而非二甲氨基。
吡罗宁Y是一种环境敏感型荧光染料。在此，它被用作双链RNA的通用标记物，无需对特定RNA种类进行特异性标记，即可在活细胞中可视化RNA的总体丰度和分布。该研究展示了光谱相量分析在区分不同RNA-蛋白质复合物方面的新应用，该方法基于PY发射光谱的微小偏移，即使偏移小于5 nm也能有效区分。此方法无需预先了解各个光谱成分。这项工作表明，PY可以作为特定RNA探针的补充工具，用于研究生物系统中的RNA生物学。[4]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C17H19CLN2O
分子量
302.7986
精确质量
302.118
元素分析
C, 67.43; H, 6.32; Cl, 11.71; N, 9.25; O, 5.28
CAS号
92-32-0
PubChem CID
7085
外观&性状
Light brown to black solid powder
熔点
250-260ºC(lit.)
tPSA
19.39
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
3
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
21
分子复杂度/Complexity
480
定义原子立体中心数目
0
SMILES
[Cl-].[O+]1C2C(=CC=C(N(C)C)C=2)C=C2C=1C=C(N(C)C)C=C2
InChi Key
INCIMLINXXICKS-UHFFFAOYSA-M
InChi Code
InChI=1S/C17H19N2O.ClH/c1-18(2)14-7-5-12-9-13-6-8-15(19(3)4)11-17(13)20-16(12)10-14;/h5-11H,1-4H3;1H/q+1;/p-1
化学名
[6-(dimethylamino)xanthen-3-ylidene]-dimethylazanium;chloride
别名
Pyronin Y; Pyronine
HS Tariff Code
2934.99.03.00
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~25 mg/mL (~82.56 mM)
H2O : ~4 mg/mL (~13.21 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.3025 mL 16.5125 mL 33.0251 mL
5 mM 0.6605 mL 3.3025 mL 6.6050 mL
10 mM 0.3303 mL 1.6513 mL 3.3025 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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