| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 100mg |
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| 500mg |
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| 靶点 |
RA-9's primary targets are proteasome-associated deubiquitinating enzymes (DUBs), specifically the 19S regulatory particle (19S RP)-associated DUBs including USP14 and UCHL5. It also inhibits other 19S RP-associated DUBs such as USP8, UCH-L1, and UCH-L3. By inhibiting these DUBs, RA-9 blocks the removal of ubiquitin chains from proteasome substrates, thereby preventing ubiquitin-dependent protein degradation. Importantly, RA-9 does not affect the 20S proteasome's catalytic core activity, distinguishing it from bortezomib and other classical proteasome inhibitors.
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| 体外研究 (In Vitro) |
RA-9（10-30 μM；48 小时）可抑制卵巢癌原代培养细胞和细胞系的生长[1]。在卵巢癌细胞中，RA-9（1.25-5 μM；18 小时）可诱导 caspase 介导的细胞凋亡和细胞周期阻滞[1]。在卵巢癌细胞中，RA-9（5 μM；0-24 小时）可引起内质网应激[1]。RA-9（5 μM；24 小时以上）处理 8 小时后即可引起 PARP 裂解产物的时效性积累[1]。体外实验表明，RA-9 在 20 μM 浓度下可抑制蛋白酶体去泛素化酶（DUB）活性，同时不影响所有三种 20S 蛋白酶体的催化活性。它能选择性地诱导卵巢癌细胞系和供体来源的原代培养细胞的凋亡。 RA-9 可诱导卵巢癌细胞发生内质网应激反应并激活未折叠蛋白反应 (UPR)。它已证实对硼替佐米耐药的多发性骨髓瘤细胞有效，从而能够进行耐药机制研究。该化合物具有良好的毒性特征和强大的抗癌活性。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在卵巢癌小鼠模型中，RA-9（5 mg/kg；腹腔注射；给药一天，停药两天）可延长体内生存期并抑制人卵巢癌细胞的增殖[1]。
在体内，RA-9已在ES-2卵巢癌异种移植模型中得到验证，其给药方案为腹腔注射5 mg/kg，给药一天，停药两天。该化合物在临床前研究中显示出治疗卵巢癌的潜力。其作用机制包括通过抑制19S RP相关DUB活性并随后激活内质网应激反应，选择性地诱导癌细胞凋亡。 |
| 酶活实验 |
RA-9 的体外活性采用无细胞 DUB 酶活性测定法进行评估。在这些测定中，将纯化的 19S 蛋白酶体相关 DUB（例如 USP14 或 UCHL5）与泛素-AMC（7-氨基-4-甲基香豆素）底物在不同浓度的 RA-9 存在下孵育。DUB 对泛素-AMC 底物的切割释放出游离的 AMC，其产生可在 380/460 nm 激发/发射波长下测量的荧光信号。IC50 定义为抑制 50% DUB 活性所需的 RA-9 浓度。重要的是，RA-9 对 DUBs 的选择性高于 20S 蛋白酶体的催化活性，这一结论是通过平行测定，在化合物存在下使用荧光肽底物（例如 Suc-LLVY-AMC、Boc-LRR-AMC 和 Z-LLE-AMC）测量胰凝乳蛋白酶样、胰蛋白酶样和半胱天冬酶样活性而得出的。
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| 细胞实验 |
细胞活力检测[1]
细胞类型： 顺铂敏感型卵巢癌细胞系 TOV-21G 和 ES-2，顺铂耐药型卵巢癌细胞系 HEY 和 OVCAR-3，原代卵巢癌细胞 测试浓度： 10、20、30 μM 孵育时间： 48 小时 实验结果： 以剂量依赖的方式损害卵巢癌细胞的活力。 细胞周期分析[1] 细胞类型： ES-2 细胞 测试浓度： 1.25、5 μM 孵育时间： 18 小时 实验结果： 导致 ES-2 细胞处于 G2-M 细胞周期阶段的比例呈剂量依赖性增加。 蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： ES-2、SKOV-3 和 TOV-21G 卵巢癌细胞 测试浓度： 5 μM 孵育时间： 0-24 小时 实验结果： 导致早期内质网应激标志物 GRP-78 以及晚期内质网应激标志物 IRE1-α 和 Ero1L-α 的稳态水平随时间推移而增加。 对于细胞实验，将包括卵巢癌细胞（例如 ES-2、Caov-3、A2780）和硼替佐米耐药的多发性骨髓瘤细胞在内的各种癌细胞系培养在合适的培养基（例如含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 或 DMEM）中。将细胞用不同浓度的RA-9（通常为0.1至50 μM）处理不同时间（例如24-72小时）。采用MTT或CellTiter-Glo法评估细胞活力。通过检测caspase-3/7活性、Annexin V/PI染色流式细胞术或Western blotting检测裂解型caspase和PARP来评估细胞凋亡。使用抗泛素抗体通过Western blotting检测泛素化蛋白的积累。通过Western blotting分析内质网应激标志物，例如BiP、CHOP和磷酸化eIF2α。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 六周龄雌性免疫缺陷（NCr nu/nu）小鼠[1]
剂量： 5 mg/kg 给药途径： 腹腔注射；给药一天，停药两天 实验结果： 第12天肿瘤负荷显著降低。 在体内，RA-9通常通过腹腔注射给药于携带人源肿瘤异种移植瘤的小鼠。该化合物配制于合适的溶剂（例如，DMSO或DMSO与生理盐水的混合物）中，并以5 mg/kg的剂量，采用给药一天、停药两天的方案给药。通过测量肿瘤体积随时间的变化来监测肿瘤生长。在研究结束时，切除肿瘤并分析泛素化蛋白积累、细胞凋亡标志物和内质网应激标志物，以确认靶点结合和作用机制。可以通过在给药后不同时间点收集肿瘤组织来进行药效学研究。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
RA-9 的分子量为 741.49 g/mol，分子式为 C32H37Cl4N7O5。它可溶于 DMSO，短期储存（数天至数周）应置于 0-4°C 的干燥避光处，长期储存（数月至数年）应置于 -20°C 的低温环境中。该化合物为固体粉末。用于体内给药时，可将其配制成合适的载体。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
RA-9在临床前研究中表现出良好的毒性特征。与直接靶向20S蛋白酶体催化活性并可能导致显著毒性的硼替佐米和其他经典蛋白酶体抑制剂不同，RA-9选择性抑制19S核糖体蛋白相关去泛素化酶（DUBs），同时保留20S蛋白酶体的蛋白水解活性。这种选择性可能有助于其获得更佳的安全性。体外研究表明，RA-9选择性地诱导癌细胞凋亡，而对正常细胞无害。但仍需进行全面的毒理学研究以确定其完整的安全性。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
RA-9 是一种研究化合物，被开发为一种选择性抑制 19S 蛋白酶体相关去泛素化酶 (DUB) 的抑制剂。其独特的作用机制——阻断泛素依赖性蛋白降解而不影响 20S 蛋白酶体的催化活性——使其区别于经典的蛋白酶体抑制剂（例如硼替佐米）和广谱 DUB 抑制剂。RA-9 已展现出治疗卵巢癌的潜力，并对硼替佐米耐药的多发性骨髓瘤细胞显示出疗效。目前，RA-9 尚未获准用于临床，仅供研究用途。RA-9 的研发为深入了解 19S RP 相关 DUB 在癌症生物学中的作用以及靶向这些酶进行癌症治疗的潜力提供了宝贵的见解。
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| 分子式 |
C32H37CL4N7O5
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|---|---|
| 分子量 |
741.492083311081
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| 精确质量 |
739.161
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| CAS号 |
1262295-74-8
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| SMILES |
ClC1=C(C=CC(=C1)/C=C1/C(/C(=C/C2C=CC(=C(C=2)Cl)Cl)/CN(C(N[C@H](C(N[C@H](C(=O)O)CCCCN)=O)CCC/N=C(\N)/N)=O)C/1)=O)Cl
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| 别名 |
RA9; RA 9; RA-9
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.3486 mL | 6.7432 mL | 13.4864 mL | |
| 5 mM | 0.2697 mL | 1.3486 mL | 2.6973 mL | |
| 10 mM | 0.1349 mL | 0.6743 mL | 1.3486 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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