N-methyl-D-aspartate receptor (NMDAR)

当慢速Ca2+螯合剂EGTA存在于细胞内溶液时，Rapastinel/RAP在浓度为1 μmol/l时显著增强nmda -门通电流，在浓度为10 μmol/l时显著降低电流。与此相反，当使用40-500倍动力学速度更快、选择性更强的Ca2+螯合剂BAPTA记录时，随着BAPTA进入细胞，NMDAR电流增加了84%，并且1 μmol/l RAP对NMDAR电流的增强被完全阻断。有趣的是，记录移液管中BAPTA的存在不影响NMDAR电流从10 μmol/l RAP的降低，这表明这种影响是由不同的机制介导的。 结论：RAP与NMDAR的细胞外结合产生了一种新的、远程的NMDAR c端Ca2+失活位点的亲和力降低，可进入细胞内空间。这种作用是由RAP引起的nmda门控电导增强的基础。[2]

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当EGTA（而不是BAPTA）是细胞内Ca2+螯合剂时，1微摩尔/升Rapastinel可增强n -甲基- d -天冬氨酸受体的电导。[2]
在CA1锥体神经元中，最初测量了药理学分离的nmda门控电流的全细胞膜片钳记录，其中细胞内记录溶液含有0.5 mmol/l的EGTA，包括一种缓慢的Ca2+螯合剂，以防止细胞内[Ca2+]过量增加。如图2a-c所示，1µmol/l RAP浸泡30 min显著增加了−30 mV时Schaffer侧刺激诱发的nmda门控电流强度{+76±31.9%；重复测量的双向方差分析[F(1,9) = 7.723；P = 0.0214]}。这一结果证实了我们之前在海马皮层CA1[3]和内侧前额皮质[4]神经元切片上的发现。正如我们之前在海马体[3]的Schaffer侧侧- ca1突触中所显示的那样，这种效应在药物洗脱后被逆转。

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当EGTA或BAPTA存在于细胞内记录溶液中时，10微摩尔/升的Rapastinel可抑制n -甲基- d -天冬氨酸受体的电导。[2]
在CA1锥体神经元中，最初测量了药理学分离的nmda门控电流的全细胞膜片钳记录，其中细胞内记录溶液含有0.5 mmol/l的EGTA，包括一种缓慢的Ca2+螯合剂，以防止细胞内[Ca2+]过量增加。如图3a-c所示，10µmol/l RAP浸泡30 min，显著降低了Schaffer侧刺激引起的nmda门控制电流的大小（−23.1±5.8%,−30mV）；重复测量的双向方差分析[F(1,12) = 15.19；P = 0.0021]。这一结果也证实了我们之前在海马切片中对海马CA1[3]和内侧前额皮质[4]神经元的发现，当细胞内使用EGTA时，相似浓度的神经元对nmda门控电导产生可逆性抑制。

Rapastinel (GLYX-13)是一种n -甲基-d-天冬氨酸受体（NMDAR）调节剂，具有甘氨酸位点部分激动剂的特性。Rapastinel是一种强大的认知增强剂，促进海马突触传递的长期增强（LTP）。在人体临床试验中，Rapastinel已被证明产生显著的抗抑郁特性，单次服用后至少持续一周。采用Porsolt法、开野法和超声发声法观察大鼠单剂量（3mg/kg IV）雷帕替尼的长效抗抑郁作用。认知增强测试采用莫里斯水迷宫、积极情绪学习和情境恐惧消退测试。海马切片评估LTP。在齿状回和内侧前额叶皮层测量树突棘形态。在每个模型中，观察到显著的抗抑郁样或认知增强效果持续至少一周。Rapastinel促进给药后1 -2周的LTP，而不是4周。每两周给药一次Rapastinel可维持至少8周的效果。单剂量Rapastinel在给药后1周增加了海马中含有nr2b的NMDAR贡献的全细胞NMDAR电流的比例，在给药后4周恢复到基线水平。NMDAR拮抗剂3-(2- carboxypperazin -4-yl)丙基-1-膦酸（CPP）在给药后1周阻断了Rapastinel的抗抑郁样作用。单次注射Rapastinel也增加了给药后24小时两个脑区的成熟脊柱密度。这些数据表明，Rapastinel通过触发nmdar依赖性过程产生持久的抗抑郁作用，导致对LTP的敏感性增加，持续长达两周。这些数据还表明，这些过程导致树突棘形态的改变，这些改变与学习和记忆相关的突触可塑性的长期变化的维持有关。[1]

全细胞膜片钳记录[2]
使用标准技术从CA1锥体神经元获得兴奋性突触后电流（EPSCs）的全细胞膜片钳记录。采用红外照明与数字图像校正光学耦合的63x水浸物镜，对海马皮层锥体层CA1锥体神经元的细胞体进行可视化，从而在视觉引导下评估细胞的健康状况并记录已识别的锥体神经元。用P-97 Flaming/Brown微移液器从标准壁硼硅酸盐玻璃中取出膜片移液器，当填充内液（以mmol/l计）：125 cs -甲基硫酸钠，8 NaCl， 5 na -磷酸肌酸，5 MgCl2, 2 Na-ATP, 0.3 Na-GTP， 0.5 EGTA或5 BAPTA， 40 HEPES和5 QX314 （pH = 7.3，用CsOH调节，285 mOsm）时，其顶端阻力为4-5 MΩ。在记录期间定期测量通路电阻（通常小于20 MΩ），特别是Rapastinel/RAP浴前和浴后，任何变化超过10%的细胞被排除在进一步分析之外。CA1锥体神经元的突触EPSCs是通过放置在辐射层的双极钨刺激电极（记录细胞侧约100-300µmol/l，锥体层50-100µmol/l）刺激引起的。用Multipatch 700B扩增单次刺激（80µs, 20-50 mA）诱发的nmdar依赖性EPSCs，在3 kHz滤波，在10 kHz模数板上数字化，并使用Clampfit离线分析。在细胞外aCSF中加入6-硝基-2,3-二氧基-1,2,3,4-四氢苯并[f]喹啉-7-磺酰胺（10µmol/l）和双库兰（20µmol/l），分别阻断2-氨基-3-（3-羟基-5-甲基异恶唑-4-基）丙酸和γ-氨基丁酸受体，从药理学上分离NMDAR电流。为了生成电流-电压（I/V）关系，记录了NMDAR在保持膜电位从- 90到10 mV时的电流，间隔为10 mV。

Rapastinel以1 ml/kg的0.9%无菌生理盐水为溶剂进行给药。选择3 mg/kg静脉注射Rapastinel的剂量，是因为根据先前一项剂量反应研究（1–56 mg/kg，静脉注射）的结果，该剂量是Porsolt测试中最佳的抗抑郁剂量（Burgdorf等人，2013）。[1]

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\n\n动物在给药后1周接受Rapastinel（3 mg/kg，静脉注射）或0.9%无菌生理盐水（1 ml/kg）（图1A）的测试，或在1周测试点前1小时接受CPP（10 mg/kg，腹腔注射）的测试（图4B）。或者，动物在给予Rapastinel前1小时接受CPP（10 mg/kg，腹腔注射）的预处理，并在给予Rapastinel后1小时进行测试（结果部分）。本研究选择广谱NMDAR谷氨酸位点拮抗剂CPP，是因为与氯胺酮、MK-801或NR2B特异性拮抗剂Ro25-6981等NMDAR通道阻滞剂不同，CPP在Porsolt测试中不会产生抗抑郁反应（Zhang et al., 2013）（Maeng et al., 2008; Burgdorf et al., 2013）。[1]

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\n\n旷场测试：旷场测试按先前描述的方法进行（Burgdorf et al., 2009）。研究表明，某些类型的抗焦虑/抗抑郁化合物可以增加动物在旷场中停留的时间（Prut and Belzung, 2003）。测试方法是将动物放入一个 40 厘米 × 40 厘米 × 20 厘米高的不透明有机玻璃开放式笼中，该笼被分成 9 个大小相等的 13.3 厘米 × 13.3 厘米的小隔间，并在红光照射下进行 10 分钟的测试。每测试完一只动物，都要从装置中取出食物残渣和尿液。动物被录像，由一位不知情的实验人员离线记录动物穿越线路的次数和在中心房间停留的时间，评分者间信度很高（Pearson's r > .9）。\n\n动物在接受Rapastinel（3 mg/kg 静脉注射）或0.9%无菌生理盐水（1 ml/kg）给药1周后进行测试。\n\n

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\n使用由蝙蝠探测器（D980，Pettersson Elektronik，瑞典）放大的电容式麦克风采集超声波发声的高频录音，并使用Fostex FR2现场录音机（192 kHz采样率，24位）将录音以.wav文件的形式保存到CF卡中，如前所述（Burgdorf等人，2008）。超声波发声由一位不知情的实验人员手动评分。享乐性50 kHz超声波发声（定义为峰值频率大于40 kHz且带宽大于18 kHz）与20 kHz超声波发声（峰值频率20–25 kHz，持续时间大于100 ms）一起进行评分，具体方法见(Burgdorf et al., 2008)。该方法已证实具有较高的评分者间和评分者内信度（Pearson相关系数r>0.90）(Burgdorf et al., 2008)。记录刺激间隔期间享乐性50 kHz超声波发声的发生率。\n\n动物在接受Rapastinel（3 mg/kg，静脉注射）或0.9%无菌生理盐水（1 ml/kg）给药1周后进行测试。 [1]\n\n

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\n情境恐惧条件反射测试\n情境恐惧条件反射和消退测试按先前描述的方法进行（Akirav等人，2009），首次消退测试在给药后1小时进行。在情境恐惧训练日（D0），将动物放入Coulbourn仪器电击箱（40 × 40 × 40 cm）中400秒，并在90、210和330秒时间点接受三次0.5 mA、持续1秒的足底电击。在消退阶段，训练后连续6天，每天对大鼠进行5分钟的非强化（无电击）消退试验。使用FreezeFrame软件量化冻结行为；在D0的基线期（30-60秒）以及每次消退试验的最后3分钟进行检测。\n\n动物在首次消退训练前24小时接受单次注射Rapastinel（3 mg/kg，静脉注射）或0.9%无菌生理盐水（1 ml/kg）。[1]\n\n

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\n动物在脑片记录前24小时、1周、2周或4周接受单次注射Rapastinel（3 mg/kg，静脉注射）或0.9%无菌生理盐水（1 ml/kg）。或者，动物每2周重复注射一次Rapastinel，并在最后一次给药后24小时或4周进行测试。[1]\n\n

[1]. The long-lasting antidepressant effects of rapastinel (GLYX-13) are associated with a metaplasticity process in the medial prefrontal cortex and hippocampus. Neuroscience. 2015 Nov 12;308:202-11.

[2]. Extracellular application of the N-methyl-D-aspartate receptor allosteric modulator rapastinel acts remotely to regulate Ca2+ inactivation at an intracellular locus. Neuroreport. 2022 May 4;33(7):312-319.

Rapastinel 已被用于研究抑郁症、重度抑郁症和强迫症 (OCD) 治疗的临床试验。

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本文介绍的研究旨在进一步阐明单次服用 Rapastinel 后在人体中观察到的持久抗抑郁作用的机制。在七种不同的测试范式中，均发现 Rapastinel 具有显著的疗效，且疗效至少持续一周。这些范式包括与抑郁/焦虑相关的测试，例如强迫游泳、旷场实验和超声波发声测试，在这些测试中，Rapastinel 均表现出显著的抗抑郁样和/或抗焦虑样作用；以及与学习相关的测试，例如交替迷宫、积极情绪学习、莫里斯水迷宫和情境恐惧消退实验。有趣的是，研究发现，能产生最佳抗抑郁/抗焦虑样作用的拉帕斯汀剂量（3 mg/kg 静脉注射）也能产生最佳的认知增强效果。这表明拉帕斯汀的持久抗抑郁样作用与其认知增强作用之间存在机制联系，并支持了拉帕斯汀的抗抑郁/抗焦虑样作用是通过与学习和记忆相关的机制共享的机制发挥作用的观点。
由于拉帕斯汀是一种 NMDA 受体调节剂，因此也可以合理地假设其持久的抗抑郁/抗焦虑样作用涉及类似于 LTP 的 NMDAR 介导过程；尤其值得注意的是，我们此前已报道，拉帕斯汀确实能增强大鼠海马切片中长时程增强（LTP）的幅度（Zhang et al., 2008），并且NMDAR特异性谷氨酸位点拮抗剂CPP也能阻止拉帕斯汀的抗抑郁样作用。此外，还应指出，齿状回和内侧前额叶皮层V层中成熟树突棘比例和短突树突棘密度的增加，以及24小时时观察到的NMDA受体表达的增加，均已被证实与LTP的形成存在因果关系（Bosch and Hayashi, 2012; Burgdorf et al., 2013; Bosch et al., 2014）。蘑菇状棘突和短粗状棘突在功能上均被归类为大型成熟棘突，它们表达NMDAR依赖性Ca2+电导和活动依赖性结构稳定性，其中短粗状棘突产生的NMDAR依赖性Ca2+净流入量最大（Noguchi et al., 2005; Hasegawa et al., 2015）。
因此，将这些数据整体概括为元可塑性（Abraham and Bear, 1996）框架下的内容，是最吸引人的解释。这是唯一一个假设已建立的神经回路中诱导突触可塑性的能力会受到先前刺激的影响，并且通常通过LTP或LTD诱导阈值的变化来衡量的模型（Abraham, 2008）。元可塑性如今已成为一种公认的现象，已在多种脑区得到证实，并可由多种刺激诱发（Wexler和Stanton，1993；Stanton，1995；Abraham，2008；Hulme等人，2013）。尤其值得关注的是，Richter-Levin和Maroun（Richter-Levin和Maroun，2010）在内侧前额叶皮层中发现了一种NMDA受体依赖性的、情绪调节的元可塑性形式。这与本文报道的研究结果非常吻合，即Rapastinel治疗在许多与突触可塑性相关的模型中均显示出持久的行为效应，生理学研究也表明，单次给予Rapastinel可显著增强亚最大刺激诱发的长时程增强（LTP）的幅度，且该效应至少持续两周，重复给药则至少持续八周。拉帕斯汀已被证实能长期促进内侧前额叶皮层（MPFC）的长时程增强作用（LTP）（Burgdorf等，2015）。除了能长期选择性地增加NR2B亚基NMDAR对总NMDA电流的贡献外，拉帕斯汀还能长期增加NR2B NMDAR和GLUR1 AMPAR的细胞表面表达，这两种受体对于拉帕斯汀的长期行为效应都是必需的（Burgdorf等，2013）。相反，Hall等（2007）的一项研究在体外培养的胚胎皮层神经元中发现，NR2B NMDAR激活增强反而会抑制LTP。如果他们的观察结果也适用于完整的成年突触，这表明 GLYX-13 通过不同的机制增加 NR2B 和 AMPAR 的表达，这可以解释为什么需要重复给药才能最大限度地增强 LTP 的幅度。
现在已经很清楚，受体水平（例如，通过改变通道动力学、受体数量和类型以及转运）和生物化学水平（晚期以及因此持续存在的转录和翻译依赖性元可塑性）的元可塑性调控可以对与学习和记忆相关的突触活动产生显著影响。因此，Rapastinel 在人类中表现出长期抗抑郁特性的一个合理假设是，它诱导 NMDA 受体触发的、AMPA 受体依赖的、与 LTP 样机制相关的元可塑性过程的促进作用（Moskal 等人，2005 年，Zhang 等人，2008 年，Burgdorf 等人，2013 年，Moskal 等人，2014 年）。这与 NMDA 受体拮抗剂引起的抗抑郁作用不同，并提示了谷氨酸能调节剂抗抑郁作用机制基础的一个新方面。[1]

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背景：一种新型 N-甲基-D-天冬氨酸受体 (NMDAR) 变构调节剂 Rapastinel（RAP，以前称为 GLYX-13）通过增强突触传递的长期增强 (LTP) 来引起持久的抗抑郁样作用。 RAP通过与NMDAR复合物胞外区的一个独特位点结合，瞬时增强海马和内侧前额叶皮层锥体神经元中的NMDAR门控电流，从而产生这些效应。
方法：我们使用全细胞膜片钳记录，比较了RAP调节Schaffer侧支诱发的NMDAR电流的效力与细胞内溶液中Ca2+螯合剂动力学之间的关系。细胞内溶液中含有慢速 Ca2+ 螯合剂 EGTA [3,12-双(羧甲基)-6,9-二氧杂-3,12-二氮杂十四烷-1,14-二酸，0.5 mmol/l] 或动力学速度快 40-500 倍、选择性更高的 Ca2+ 螯合剂 BAPTA {2,2',2″,2‴-[乙烷-1,2-二基双(氧-2,1-亚苯基腈)]四乙酸，5 mmol/l}。通过在灌流中加入 2-氨基-3-(3-羟基-5-甲基异恶唑-4-基)丙酸受体拮抗剂 6-硝基-2,3-二氧代-1,2,3,4-四氢苯并[f]喹喔啉-7-磺酰胺 (10 μmol/l) 和 GABA 受体阻滞剂比库啉 (20 μmol/l)，可以药理学地分离出 NMDAR 门控电流。
结果：当细胞内液中存在慢速 Ca2+ 螯合剂 EGTA 时，Rapastinel/RAP 在 1 μmol/l 浓度下可显著增强 NMDAR 门控电流，而在 10 μmol/l 浓度下则可显著降低电流。相反，当使用动力学速度快40-500倍、选择性更高的Ca2+螯合剂BAPTA进行记录时，随着BAPTA被洗入细胞，NMDAR电流幅度增加了84%，而1 μmol/l RAP对NMDAR电流的增强作用被完全阻断。有趣的是，10 μmol/l RAP引起的NMDAR电流降低不受记录电极中BAPTA存在的影响，表明这种效应是由不同的机制介导的。
结论：Rapastinel/RAP与NMDAR的胞外结合导致NMDAR C端Ca2+失活位点亲和力的新型长程降低，该位点可与细胞内空间接触。这种作用是RAP诱导的NMDAR门控电导增强的基础。 [2]

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在本研究中，我们比较了NMDAR调节化合物Rapastinel/RAP（原名GLYX-13）在用慢速Ca2+螯合剂EGTA和40-500倍速螯合剂BAPTA填充的海马CA1锥体神经元中调节NMDAR门控全细胞电流的能力。我们发现，低浓度RAP可阻断BAP对NMDAR电流的增强作用，但不能阻止浓度高10倍的RAP对NMDAR电流的抑制作用。综上所述，这些数据支持RAP对NMDAR存在高亲和力和低亲和力的细胞外作用，分别介导通道电导的增强和抑制。此外，细胞内输注 BAPTA 对细胞外施加药物的活性的影响表明，RAP 通过长程下调通道孔附近细胞内 Ca2+ 结合位点的亲和力来增强 NMDAR 门控电流。[2]

413.4686

413.227

C, 52.29; H, 7.56; N, 16.94; O, 23.22

117928-94-6

Rapastinel Trifluoroacetate;1435786-04-1

14539800

White to off-white solid powder

-2.8

179.29

5

7

7

29

659

6

C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N)N)O

GIBQQARAXHVEGD-BSOLPCOYSA-N

InChI=1S/C18H31N5O6/c1-9(24)13(19)18(29)23-8-4-6-12(23)17(28)22-7-3-5-11(22)16(27)21-14(10(2)25)15(20)26/h9-14,24-25H,3-8,19H2,1-2H3,(H2,20,26)(H,21,27)/t9-,10-,11+,12+,13+,14+/m1/s1

(2S)-1-[(2S)-1-[(2S,3R)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]-N-[(2S,3R)-1-amino-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]pyrrolidine-2-carboxamide

Rapastinel; GLYX 13; GLYX-13; GLYX13; Rapastinelum; GLYX-13 peptide; UNII-6A1X56B95E; L-Threoninamide, L-threonyl-L-prolyl-L-prolyl-;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 32 mg/mL (~77.39 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。