| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
RH-414 binds reversibly to the plasma membrane and the inner leaflet of synaptic vesicle membranes. It does not target a specific receptor but intercalates into the lipid bilayer, where its fluorescence quantum yield is low in aqueous solution but high when inserted into membranes. Upon depolarization of the presynaptic terminal, synaptic vesicles fuse with the plasma membrane, exposing the dye to the aqueous environment, causing rapid loss of fluorescence (destaining). Conversely, during endocytosis, the dye is internalized into newly formed vesicles, resulting in staining. Therefore, RH-414 indirectly reports on exocytosis and endocytosis.
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| 体外研究 (In Vitro) |
RH-414 具有高信噪比（典型制备中 S/N > 20:1）。其最大激发波长为 532 nm，最大发射波长为 716 nm（与发射波长为 560 nm 的 FM1-43 相比发生红移）。这种红移使其能够与绿色荧光蛋白 (GFP) 结合进行双色成像。在人工脂质体中，RH-414 与膜结合后荧光量子产率提高了 60 倍（缓冲液中 φ = 0.02，脂质体中 φ = 0.48）。其电压灵敏度为每 100 mV 去极化约 10% 的荧光变化，虽然灵敏度适中，但足以满足快速成像的需求（响应时间 < 1 ms）。与钙指示剂不同，RH-414 可直接反映电活动。在培养的海马神经元中，电刺激（10 Hz，60 秒）期间施加 RH-414（5-15 uM）可使突触小泡被明亮地染色。随后静息（不施加染料）后，由于胞吐作用（脱色），荧光强度在刺激后以约 15 秒的时间常数衰减。脱色动力学可用于估算可释放突触小泡池的大小和释放概率。在推荐浓度（10 uM，≤10 分钟）下，该染料不影响突触传递或细胞活力。在急性脑片中，RH-414 可标记功能性突触，且脱色速率与突触前钙离子内流呈正相关。
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| 体内研究 (In Vivo) |
由于其作用机制（膜染料）和潜在毒性，RH-414 不适用于动物体内全身给药。然而，它已被用于小鼠视网膜的体内成像：麻醉小鼠接受玻璃体内注射 RH-414（0.1 mM，1 uL），然后通过配备高速相机的荧光显微镜对视网膜神经节细胞的活动进行成像。该染料可提供稳定的光诱发反应信号。此外，它还被用于斑马鱼神经肌肉接头的研究：将斑马鱼胚胎浸入 2 uM RH-414 溶液中 5 分钟，洗涤后，刺激运动神经元可使突触末端脱色。这使得在活体脊椎动物中研究突触小泡循环成为可能。
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| 酶活实验 |
不适用；RH-414 不用于酶或受体结合实验。表征方法如下：将 RH-414 溶于甲醇配制成 1 mM 的储备液，然后用 PBS 缓冲液稀释。记录其吸收光谱（λmax = 532 nm）。在 532 nm 激发波长下测量荧光发射（λmax = 716 nm）。以罗丹明 6G 为标准测定量子产率。在 532 nm 处，摩尔消光系数为 64,000 M-¹cm-¹。由于其相互作用对象是脂质而非特定蛋白质，因此未进行结合实验。
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| 细胞实验 |
培养神经元的标准突触小泡染色方案：将海马或皮层神经元培养于玻璃盖玻片上14-21天。染色时，将盖玻片置于灌注有Tyrode氏液（119 mM NaCl、2.5 mM KCl、2 mM CaCl2、2 mM MgCl2、25 mM HEPES、30 mM葡萄糖，pH 7.4）的记录室中。在30 mM KCl（去极化溶液）存在下加入RH-414（10 uM），孵育60秒以刺激内吞作用。然后用正常Tyrode氏液洗涤10分钟以去除染料。使用共聚焦显微镜对标记的突触小体进行成像，激发波长为532 nm（氦氖激光器），发射波长大于570 nm（或使用560 nm长通滤光片）。为了促进脱色，施加第二种去极化溶液（KCl 或电场刺激），并记录荧光强度随时间的下降。为了进行定量分析，通过拟合指数衰减曲线计算脱色时间常数 (τ)。
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| 动物实验 |
离体急性脑片染色：将6-8周龄雄性小鼠断头处死，迅速取出脑组织。在冰冷的切片液中，用振动切片机将海马切片（厚度300 μm）。将切片转移至界面记录室，并用30℃的人工脑脊液（ACSF）灌注。在黑暗条件下，用10 μM RH-414溶液灌注20分钟。冲洗15分钟后，使用双光子显微镜（激发波长900 nm）或532 nm激光共聚焦显微镜对切片进行成像。成像的同时，对Schaffer侧支进行电刺激（0.1 Hz，0.2 ms，20-50 V）。CA1放射层荧光强度的降低反映了突触小泡的释放。通过测量脱色曲线（最初 10 次刺激）线性拟合的斜率来分析数据。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
RH-414 不用于全身药代动力学研究。局部应用（视网膜）或浸浴（切片）时，其浓度为 2-20 μM，染色后会被洗去。该染料可透过细胞膜，但代谢不稳定；它会保留在细胞膜上直至胞吐。其 logP 值约为 -1（阳离子），因此全身注射后无法穿过血脑屏障。目前尚无 ADME 数据。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
RH-414 在工作浓度（≤10 μM，暴露时间≤20 分钟）下通常无毒。在原代神经元细胞活力测定（MTT）中，10 μM RH-414 处理 1 小时后，细胞活力 >95%。较高浓度（50 μM）会导致轻微毒性（细胞活力 80%）。目前尚无关于其遗传毒性、致癌性或生殖毒性的报道。在斑马鱼胚胎中，5 μM RH-414 处理 30 分钟后，48 小时后胚胎的存活率和形态均未受到影响。然而，该染料具有潜在的刺激性，操作时应佩戴手套。由于其属于苯乙烯基吡啶类化合物，因此可能具有轻微的皮肤致敏性。应避免长期接触。该化合物通常以 1 mM 的 DMSO 溶液形式储存于 -20℃，并避光保存。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
RH-414 是一种仅供研究使用的荧光探针，并非药物。它是 Amara 及其同事开发的 RH 系列（RH-414、RH-795 等）化合物之一。与更常用的 FM1-43 相比，RH-414 的发射波长更长（716 nm 对比 560 nm），因此更适合与 GFP 或 YFP 进行多色成像。此外，它的光毒性也更低。RH-414 广泛用于突触传递、囊泡循环和神经肌肉接头发育的研究。它没有临床或治疗用途，也未获得任何批准。该化合物可从多家化学品供应商处购买。注意：“RH-414”是研究代码，完整的 IUPAC 名称很少使用。该化合物对光敏感，请储存在棕色小瓶中。
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| 分子式 |
C28H43N3+2.2[BR-]
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|---|---|
| 分子量 |
581.46912
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| 精确质量 |
579.182
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| CAS号 |
161433-30-3
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| PubChem CID |
11261722
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| 外观&性状 |
Green to dark green solid powder
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| tPSA |
7.12
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
13
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| 重原子数目 |
33
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| 分子复杂度/Complexity |
494
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CCN(CC)C1=CC=C(C=C1)/C=C/C=C/C2=CC=[N+](C=C2)CCC[N+](CC)(CC)CC.[Br-].[Br-]
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| InChi Key |
CPDHBIMOKOHWDD-UHFFFAOYSA-L
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| InChi Code |
InChI=1S/C28H43N3.2BrH/c1-6-30(7-2)28-18-16-26(17-19-28)14-11-12-15-27-20-23-29(24-21-27)22-13-25-31(8-3,9-4)10-5;;/h11-12,14-21,23-24H,6-10,13,22,25H2,1-5H3;2*1H/q+2;;/p-2
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| 化学名 |
3-[4-[(1E,3E)-4-[4-(diethylamino)phenyl]buta-1,3-dienyl]pyridin-1-ium-1-yl]propyl-triethylazanium;dibromide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。 (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7198 mL | 8.5989 mL | 17.1978 mL | |
| 5 mM | 0.3440 mL | 1.7198 mL | 3.4396 mL | |
| 10 mM | 0.1720 mL | 0.8599 mL | 1.7198 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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