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Rhodamine 123 (RH-123; R-22420)

别名: Rhodamine 123 R 22420 R 302 RH 123. 罗丹明 123;Rhodamine 罗丹明123;罗丹明123 Rhodamine123;罗丹明123荧光染料;若丹明123;罗丹明123
目录号: V6079 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
罗丹明染料是膜渗透/穿透的阳离子荧光探针，可以特异性识别线粒体膜电位，从而附着在线粒体上并产生明亮的荧光。
Rhodamine 123 (RH-123; R-22420) CAS号: 62669-70-9
产品类别: ATPase
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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产品说明书
产品描述
罗丹明染料是可透过细胞膜的阳离子荧光探针，能够特异性地识别线粒体膜电位，从而与线粒体结合并产生明亮的荧光。在一定浓度下，罗丹明染料对细胞毒性较低，因此被广泛用于检测动物细胞、植物细胞和微生物中的线粒体。
生物活性&实验参考方法
靶点
Rhodamine 123 is a fluorescent, monovalent cationic dye that serves as an indicator of mitochondrial membrane potential (ΔΨ). Its target is the mitochondrial inner membrane, across which it distributes in response to the membrane potential. It does not have a specific protein target with an associated IC50 or Ki value in this context [2].
体外研究 (In Vitro)
罗丹明123工作液的制备。1.1 配制储备液 取1毫克罗丹明123，溶于525 μL DMSO中，配制成5 mM的储备液。1.2 配制罗丹明123工作液 配制浓度范围为1～20 μM的工作液时，可使用无血清细胞培养基或PBS储备液。注意：罗丹明123工作液的浓度应根据具体情况进行调整。2. 细胞染色 在6孔板中，2.1 悬浮细胞 a. 4℃下以1000 g离心3～5分钟，弃去上清液。c. 加入1 mL工作液后，观察1～3小时。c. 4℃下以400 g离心3～4分钟，弃去上清液。d.用PBS洗涤两次，每次5分钟。每毫升含1×10⁶个细胞。每次洗涤5分钟，共两次。e. 将细胞重悬于PBS或无血清培养基中。用于流式细胞仪监测或荧光显微镜观察。2.2 贴壁细胞 贴壁细胞应培养在无菌玻璃载玻片上(a)。a. 从培养基中取下盖玻片，并用吸液器吸去多余的培养基。c. 加入100 μL工作液，轻轻摇晃使细胞完全浸没，静置30至60分钟。d. 用培养基洗涤两次，每次约5分钟。用于流式细胞仪监测或荧光显微镜观察。注意：如果使用流式细胞仪进行检测，染色前必须重悬细胞。
自猝灭特性：在水溶液中，罗丹明123的荧光强度与其浓度并非呈线性关系。其荧光强度随浓度增加而增大，直至达到峰值，之后由于自猝灭而下降。校正内滤效应（零光程）后，峰值强度出现在浓度约为 50 μM 处。这种自猝灭行为对于其在线粒体中的应用至关重要，因为浓缩在基质中的染料会发生猝灭 [2]。
线粒体摄取和荧光：在分离的、活化的线粒体悬浮液中，罗丹明 123 会被线粒体基质摄取，并分配到线粒体膜中。这种摄取和结合会导致整体荧光信号下降，这是由于基质中染料的局部浓度较高，从而导致染料自猝灭，以及膜结合染料可能发生猝灭。当线粒体去极化时（例如，通过添加 ADP 或解偶联剂 CCCP），染料会释放回缓冲液中，从而导致荧光强度增加 [2]。
细胞实验
分离线粒体膜电位测定：本文详细介绍的罗丹明123的主要用途是监测分离线粒体悬液中线粒体膜电位（ΔΨ）的变化。将豚鼠心肌线粒体（0.5 mg蛋白/mL）悬浮于含有10 mM丙酮酸的呼吸缓冲液中。加入罗丹明123至终浓度为0.05 μM。将样品置于分光光度计中，激发波长为503 nm，发射波长为527 nm，并持续搅拌。加入线粒体后荧光强度的降低表明染料被吸收。加入ADP（启动状态3呼吸）会导致瞬时线粒体去极化，表现为荧光强度的瞬时增加。最后，加入解偶联剂CCCP（4 μM）可完全消除ΔΨ，导致荧光强度最大程度增加，作为ΔΨ = 0的阳性对照。需要对荧光曲线进行基于模型的分析，以估算实际的ΔΨ瞬态变化[2]。
动物实验
豚鼠心脏线粒体的分离：** 将豚鼠（250-300 g）用氯胺酮麻醉。切取心室，用冰冷的线粒体分离缓冲液（200 mM 甘露醇、50 mM 蔗糖、5 mM KH₂PO₄、5 mM MOPS、0.1% 无脂肪酸 BSA、1 mM EGTA，pH 7.15）冲洗。将组织切碎并匀浆。匀浆液进行差速离心：首先以 8000×g 离心 10 分钟，冲洗沉淀物，然后以 750×g 再次离心 10 分钟，收集上清液，并以 8000×g 离心。将最终的线粒体沉淀物重悬于分离缓冲液中（约 10 mg 蛋白/mL），并置于冰上。所有操作均在 0-4°C 下进行。线粒体蛋白定量采用以牛血清白蛋白 (BSA) 为标准的蛋白测定法 [2]。
豚鼠心脏线粒体的分离：将 250-300 g 的豚鼠用氯胺酮麻醉。切除心室，并在冰冷的线粒体分离缓冲液（200 mM 甘露醇、50 mM 蔗糖、5 mM KH₂PO₄、5 mM MOPS、0.1% 无脂肪酸 BSA、1 mM EGTA，pH 7.15）中冲洗。将组织切碎并匀浆。将匀浆液进行差速离心：首先以 8000×g 离心 10 分钟，洗涤沉淀后以 750×g 再次离心 10 分钟，然后收集上清液并以 8000×g 离心。将最终的线粒体沉淀重悬于分离缓冲液（约 10 mg 蛋白/mL）中，并置于冰上。所有操作均在 0-4°C 下进行。使用以牛血清白蛋白 (BSA) 为标准的蛋白质测定法对线粒体蛋白进行定量 [2]。
药代性质 (ADME/PK)
转运动力学：罗丹明 123 跨线粒体内膜的分布受其被动通量控制，可用 Goldman-Hodgkin-Katz 方程建模。其在豚鼠心脏线粒体中的渗透系数 (ρ) 估计为 6.88 ± 0.39 mol (升线粒体体积)⁻¹ s⁻¹ M⁻¹ [2]。膜分配：罗丹明 123 会分配到线粒体膜中，其分配情况可用无量纲分配系数 (α) 描述。豚鼠心脏线粒体的α估计值为4.49 ± 0.21 [2]。
响应时间：R123的荧光信号对线粒体膜电位的快速变化响应的时间常数约为6秒，这明显慢于ΔΨ的实际变化（添加ADP后ΔΨ的变化时间常数<0.1秒）。这是因为该信号是缓冲液、基质和膜中染料贡献的综合，并受转运动力学的限制[2]。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
罗丹明 123 因其在用于探测的浓度下对潜在代谢过程的干扰较小而著称。然而，本研究采用较低的总染料浓度（0.05 μM）以最大程度地减少 R123 电流本身对内膜电生理的影响 [2]。
参考文献

[1]. Emaus, R. K., Grunwald, R., & Lemasters, J. J. (1986). Rhodamine 123 as a probe of transmembrane potential in isolated rat-liver mitochondria: spectral and metabolic properties. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics, 850(3), 436–448.

[2]. Mitochondrial Inner Membrane Electrophysiology Assessed by Rhodamine-123 Transport and Fluorescence. Ann Biomed Eng. 2007 Jul; 35(7): 1276–1285.
其他信息
一种低毒性荧光探针是ATP结合盒转运蛋白B亚家族成员1和细菌多药外排转运蛋白的有效底物。它可用于评估活细胞的线粒体生物能量学，并测量正常细胞和恶性细胞中ATP结合盒转运蛋白B亚家族成员1的外排活性。(Leukemia 1997;11(7):1124-30)
罗丹明123是一种广泛用于监测线粒体膜电位(ΔΨ)的荧光染料，因为它具有高灵敏度（高量子产率）、特异性和非侵入性。它会在能量充足的细胞的线粒体基质中积聚，以响应负的内电位。其应用依赖于其在高浓度下发生的自猝灭特性，这使得其分布（以及荧光）的变化与ΔΨ的变化相关联。重要的是，测得的荧光强度与 ΔΨ 之间的关系并非线性关系，而是 S 形曲线，并且对染料和线粒体浓度等实验条件高度敏感。由于荧光响应比实际的生物能量事件慢一个数量级 [2]，因此通常需要建立定量模型才能从原始荧光数据中准确地解卷积出 ΔΨ 瞬态信号。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
精确质量
380.092
CAS号
62669-70-9
PubChem CID
9929799
外观&性状
Pink to red solid powder
熔点
235 °C
LogP
5.535
tPSA
89.31
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
5
可旋转键数目(RBC)
3
重原子数目
27
分子复杂度/Complexity
706
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O1C2=C([H])/C(/C([H])=C([H])C2=C(C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2C(=O)OC([H])([H])[H])C2C([H])=C([H])C(=C([H])C1=2)N([H])[H])=N/[H]
InChi Key
TUFFYSFVSYUHPA-UHFFFAOYSA-M
InChi Code
InChI=1S/C21H17N2O3.ClH/c1-25-21(24)15-5-3-2-4-14(15)20-16-8-6-12(22)10-18(16)26-19-11-13(23)7-9-17(19)20/h2-11H,22-23H2,1H31H/q+1/p-1
化学名
Xanthylium, 3,6-diamino-9-(2-(methoxycarbonyl)phenyl)-, chloride
别名
Rhodamine 123 R 22420 R 302 RH 123.
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~62.5 mg/mL (~164.12 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
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计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
NCT Number Recruitment interventions Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases
NCT00972205 COMPLETEDWITH RESULTS Drug: paclitaxel
Drug: CBT-1(Registered Trademark)
Radiation: Tc 99m sestamibi		 Breast
Cervical
Lung
Ovarian
Renal		 National Cancer Institute (NCI) 2007-12 Not Applicable
NCT05206058 COMPLETED Procedure: venipuncture Neutrophil
Phyllanthus Abnormis Poisoning		 Chang Gung Memorial Hospital 2022-01-01
生物数据图片

  • Relationship between fluorescence and concentration of R123 in aqueous solution. Normalized fluorescence intensity is plotted against R123 concentration in the absence of mitochondria. Open circles correspond to data collected using a 10 × 10 mm cuvette, with mean excitation and emission path lengths of dex = 5 mm and dem = 5 mm; squares correspond to data collected using a 4 × 10 mm cuvette, with mean excitation and emission path lengths of dex = 2 mm and dem = 5 mm. Solid curves represent fits to Eqs. (1)–(3), which correct for the observed inner filter effect. The curve indicated for d = 0 is the prediction of Equation (3), with parameter values k0 = 8.15 × 104 M−1, k1 = 5.16 × 104 M−1, k2 = 1.01 × 106 M−2, and k3 = 3.909 × 1012 M−3. Aqueous solution is identical to that used for mitochondrial respiration buffer with the exception that R123 concentration is varied.[2]. M. Huang, et al. Mitochondrial Inner Membrane Electrophysiology Assessed by Rhodamine-123 Transport and Fluorescence. Ann Biomed Eng. 2007 Jul; 35(7): 1276–1285

  • Comparison of model-predicted and experimentally measured fluorescence time courses for state-2, -3, and -4 respiration. (A) Fluorescence measurement on suspensions of isolated mitochondria (gray circles) overlaid with model prediction (solid black line). Mitochondria isolated from guinea pig heart (described in Methods) were added at time 0 to the cuvette containing respiration buffer with R123 and pyruvate substrate. Accumulation and self-quenching of dye inside the matrix and quenching of membrane-bound dye cause a drop of fluorescence signal of over 50%. Addition of ADP results in transient and reversible activation of respiration as well as transient depolarization of the mitochondrial membrane potential. CCCP was added at the end of the experiment to collapse the membrane potential as a positive control for ΔΨ = 0.[2]. M. Huang, et al. Mitochondrial Inner Membrane Electrophysiology Assessed by Rhodamine-123 Transport and Fluorescence. Ann Biomed Eng. 2007 Jul; 35(7): 1276–1285

  • Predicted steady-state R123 fluorescence intensity versus ΔΨ. (A) Predicted fluorescence signal as a function of ΔΨ at total dye concentrations of [R123]o = 0.05, 0.50, and 25 μM at the mitochondrial concentration of 0.5 mg protein mL−1. Data points represented by circles are extracted from Ref. 13. (B) The predicted sensitivity ∣∣ΔΨI∂I∂ΔΨ∣∣ of the fluorescence measurement of membrane potential evaluated at ΔΨ = 180 mV is plotted as a function of the [R123]o The sensitivity curves are plotted for three different values of mitochondrial concentration, as indicated in the figure. Model predictions for (A) and (B) are obtained for α = 4.49, and β = 0.33.[2]. M. Huang, et al. Mitochondrial Inner Membrane Electrophysiology Assessed by Rhodamine-123 Transport and Fluorescence. Ann Biomed Eng. 2007 Jul; 35(7): 1276–1285
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