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Rhodamine 800

目录号: V33048 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
罗丹明染料是膜渗透/穿透的阳离子荧光探针，可以特异性识别线粒体膜电位，从而附着在线粒体上并产生明亮的荧光。
Rhodamine 800 CAS号: 137993-41-0
产品类别: New2
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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InvivoChem产品被CNS等顶刊论文引用
产品描述
罗丹明染料是膜渗透/穿透的阳离子荧光探针，可以特异性识别线粒体膜电位，从而附着在线粒体上并产生明亮的荧光。在一定浓度下，罗丹明染料对细胞的毒性较低。毒性，因此广泛用于检测动物细胞、植物细胞、微生物中的线粒体。
生物活性&实验参考方法
靶点
The literature describes Rhodamine 800 as a potential near-infrared (NIR)-active contrast agent responsive to cellular energy states, specifically the mitochondrial membrane potential.Its “target” is the physicochemical environment (e.g., membrane potential, solvent polarity) within energized mitochondria.[1]
体外研究 (In Vitro)
1、罗丹明800工作液的组成 1.1 配制储备液。除去 5 mM 库存溶液，并将 1 mg 罗丹明 800 与 525 μL 无水 DMSO 混合。 1.2 工作液的成分 配制1-20 μM罗丹明800工作液时，使用预先配制好的无细胞骨髓或PBS储存液。注：请根据实际情况调整罗丹明800工作液的浓度来配制使用。 2.悬浮细胞染色（2.1）：离心细胞，加入PBS，洗涤两次，每次5分钟。细胞密度为1×106/mL。 2.2 加入1 mL罗丹明800工作液，离心30～60分钟。 2.3 400 g 离心三至四分钟后，除去上清液。 2.4 用PBS洗涤细胞两次，每次5分钟。 2.5 将细胞重悬于1 mL PBS或无血清细胞中，使用流式细胞仪或荧光显微镜观察。 3. 3.1 培养贴壁细胞 3.2 将盖玻片从细胞上取下，吸收细胞染色过程中所有的碘（贴壁）。 3.3 加入100 μL染料工作液，轻轻摇晃覆盖细胞，并保持无菌5至30分钟。 3.4吸出染料工作液，用培养基冲洗2～3次，每次5分钟，用流式细胞仪或荧光显微镜观察。
在分离的大鼠肝线粒体中，Rhodamine 800的吸收光谱在能量化状态（状态4）下发生红移，峰值为706 nm和648 nm。加入解偶联剂CCCP导致光谱蓝移至690 nm和628 nm，与其在水性缓冲液中的光谱相似。[1]
Rhodamine 800的荧光强度在能量化线粒体（状态4）中被强烈淬灭，降至其在水性缓冲液中强度的22%，而在解偶联后恢复至约70%。[1]
Rhodamine 800的吸光度变化（在730-685 nm或730-800 nm测量）和荧光强度变化（在692 nm测量）与缬氨霉素诱导的跨线粒体膜钾扩散电位（ΔψK+）呈线性关系。荧光淬灭对膜电位的敏感性约为每10 mV变化2.3%。[1]
在常氧条件下的分离大鼠肝细胞中，Rhodamine 800表现出与能量化线粒体相似的光谱特性。在诱导缺氧（细胞色素氧化酶完全还原）后，这些特性保持约5分钟不变，表明细胞仍处于能量化状态。随后加入CCCP导致吸光度和荧光迅速转变为类似去能量化/解偶联状态。[1]
Rhodamine 800在能量化线粒体中的摄取是浓度依赖性的。在浓度低于5 µM时，摄取与游离染料的比例约为5-6，对应于线粒体内浓度约为介质中的8000倍。该比例在添加染料约15 µM时达到最大值（~20）。在解偶联线粒体中，摄取比例保持恒定在约1。[1]
腺嘌呤核苷酸（ADP和ATP）在溶液中能静态淬灭Rhodamine 800的荧光，但此效应与膜电位变化引起的淬灭相比是轻微的。[1]
在浓度低于5 µM时，Rhodamine 800对分离线粒体的呼吸控制比（RCR）或耗氧速率（状态3或状态4）没有显著影响。[1]
细胞实验
用于分离肝细胞光学测量的肝细胞通过胶原酶灌注法从大鼠肝脏中分离。使用台盼蓝排斥法评估细胞活力，使用完整性大于90%的制备物。[1]
将肝细胞与Rhodamine 800（例如3.3 µM）在37°C的生理缓冲液中孵育。将细胞悬浮液置于分光光度计/荧光计内的石英比色皿中。[1]
在从有氧到无氧条件的转变过程中，同时测量氧浓度（使用克拉克型电极）、细胞色素氧化酶的氧化还原状态（通过620-605 nm的吸光度）和Rhodamine 800的信号（730-685 nm的吸光度或荧光）。在缺氧后加入解偶联剂（CCCP, 2 µM）以消除膜电位。[1]
使用660 nm激发光，并采用截止滤光片阻挡激发光，记录Rhodamine 800在肝细胞中的荧光发射光谱。比较添加CCCP前后的光谱。[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
浓度高达 5 µM 时，罗丹明 800 不影响线粒体呼吸控制率或速率，表明在用于探测的浓度下，其对线粒体功能的毒性较低。[1]
文献中没有提供 罗丹明 800 的其他毒性数据（例如，LD50、器官毒性、蛋白质结合）。[1]
参考文献

[1]. Rhodamine 800 as a probe of energization of cells and tissues in the near-infrared region: a study with isolated rat liver mitochondria and hepatocytes. J Biochem. 1997 Jan;121(1):29-37.

[2]. Near-infrared fluorescence detection of acetylcholine in aqueous solution using a complex ofrhodamine 800 and p-sulfonatocalix[8]arene. Sensors (Basel). 2010;10(3):2438-49.
其他信息
罗丹明800是一种阳离子染料，其光学性质（吸收光谱、荧光光谱和荧光强度）对溶剂环境非常敏感。在极性更强的溶剂中，其吸收峰和荧光峰会向长波方向移动，荧光强度也会随溶剂类型发生显著变化。[1] 罗丹明800在生物系统中的主要作用机制是其在细胞膜电位依赖性条件下积累到线粒体基质中。在能量充足的线粒体中，罗丹明800会积累，导致吸收光谱红移和荧光猝灭。当去能（解偶联）时，染料被释放，光谱变化也随之逆转。[1]
该研究提出，罗丹明800是一种很有前景的对比剂，可用于近红外光谱法（NIRS）无创监测组织能量状态，因为它具有近红外活性波长，并且对线粒体膜电位敏感。[1]
作者指出，对于血液循环组织中的体内应用，可能需要对罗丹明800进行化学修饰（例如，添加羧酸酯基团）以提高其组织掺入率。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C26H26CLN3O5
分子量
495.9547
精确质量
495.156
CAS号
137993-41-0
PubChem CID
127750
外观&性状
Dark purple to black solid powder
tPSA
114
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
7
可旋转键数目(RBC)
0
重原子数目
35
分子复杂度/Complexity
1020
定义原子立体中心数目
0
InChi Key
HACOCUMLBPNDIN-UHFFFAOYSA-M
InChi Code
InChI=1S/C26H26N3O.ClHO4/c27-15-22-20-13-16-5-1-9-28-11-3-7-18(23(16)28)25(20)30-26-19-8-4-12-29-10-2-6-17(24(19)29)14-21(22)26;2-1(3,4)5/h13-14H,1-12H2;(H,2,3,4,5)/q+1;/p-1
化学名
3-oxa-23-aza-9-azoniaheptacyclo[17.7.1.15,9.02,17.04,15.023,27.013,28]octacosa-1(27),2(17),4,9(28),13,15,18-heptaene-16-carbonitrile;perchlorate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~83.33 mg/mL (~168.02 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.0163 mL 10.0817 mL 20.1633 mL
5 mM 0.4033 mL 2.0163 mL 4.0327 mL
10 mM 0.2016 mL 1.0082 mL 2.0163 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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