RhoNox-1

目录号: V44424 纯度: ≥98%
RhoNox-1 是一种特异性检测二价铁离子的荧光探针。
RhoNox-1 CAS号: 1447815-38-4
产品类别: New3
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
RhoNox-1是一种特异性检测二价铁离子的荧光探针。当RhoNox-1与Fe²⁺反应时,可生成不可逆的橙色(红色)荧光产物(激发/发射波长:540/575 nm)。FeRhoNox-1易于进入细胞,适用于活细胞内Fe²⁺的检测,且倾向于定位于高尔基体。
RhoNox-1 (CAS 1447815-38-4) 是一种可透过细胞的特异性荧光探针,用于检测活细胞中的二价铁离子 (Fe2+),与 Fe2+ 反应后产生不可逆的橙红色荧光产物。
生物活性&实验参考方法
靶点
RhoNox-1 specifically targets labile ferrous iron (Fe2+) within live cells. Upon binding to Fe2+, it undergoes an irreversible chemical reaction, which converts the non-fluorescent or weakly fluorescent probe to a brightly fluorescent product, enabling visualization of Fe2+ distribution, particularly localized in the Golgi apparatus.
体外研究 (In Vitro)
1. RhoNox-1 功能溶液的组成 1.1 配制储备液:使用 110 μL 无水 DMSO。配制 1 mM 储备液:使用 50 μg RhoNox-1。1.2 功能溶液的组成:配制 1-10 μM RhoNox-1 工作液:使用已配制好的无血清骨髓细胞或 PBS 储存液。注意:请根据实际情况调整 RhoNox-1 工作液的浓度,以便立即使用。2. 用细胞染色悬浮细胞 2.1 悬浮细胞:离心收集细胞,然后加入 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。细胞浓度为 1×10⁶/mL。2.2 染色后,加入 1 mL 工作液,等待 5 至 30 分钟。 2.3 以 400 g 离心 3-4 分钟,然后去除上清液。2.4 加入 PBS 后,用 PBS 洗涤细胞两次,每次 5 分钟。2.5 将细胞重悬于 1 mL PBS 或无血浆溶液中,并使用流式细胞仪或荧光显微镜进行观察。3. 贴壁细胞染色 3.1 将染料涂抹于贴壁细胞上。3.2 吸除多余细胞,并从培养基中取出盖玻片。3.3 用 100 μL 染料工作液完全覆盖细胞,轻轻摇晃 5-30 分钟。3.4 吸除染料工作液,用 PBS 洗涤细胞 2-3 次,每次 5 分钟,并使用流式细胞仪或荧光显微镜进行观察。
RhoNox-1 对 Fe2⁺ 具有极高的选择性,优于其他二价金属离子(例如 Ca2⁺、Mg2⁺、Zn2⁺、Cu2⁺)。在活细胞中,它具有优异的膜渗透性,并倾向于定位于高尔基体。与 Fe2⁺ 反应后,生成一种具有较大斯托克斯位移的不可逆橙红色荧光产物。激发/发射波长:540/575 nm。
体内研究 (In Vivo)
RhoNox-1 不作为治疗药物用于全身体内给药。它是一种用于细胞成像研究的荧光探针。该化合物可用于离体组织切片成像,以检测 Fe2+ 水平。它还可用于探索氧化应激、炎症以及与铁代谢紊乱相关的疾病的机制。
酶活实验
不适用。RhoNox-1 是一种 Fe2⁺ 特异性化学探针,它发生的是化学反应,而非与靶蛋白的生物相互作用。为了测定反应动力学,将 RhoNox-1 (1-10 uM) 与 Fe2⁺ (0-100 uM) 在缓冲液(例如 HEPES,pH 7.4)中于 37℃ 孵育 0-30 分钟。测量荧光强度(激发/发射波长 540/575 nm)。
细胞实验
将活细胞(例如 HeLa 细胞、神经元细胞)接种于盖玻片或 96 孔板中。在含有 RhoNox-1 (1-10 uM) 的培养基中,于 37℃ 孵育细胞 30-60 分钟,然后洗涤。通过添加 Fe2+ 离子载体(例如吡硫翁)或将铁蛋白或 DMT1 转染至细胞来调节 Fe2+ 水平。使用共聚焦显微镜(激发/发射波长 540/575 nm)观察荧光,或使用流式细胞仪进行测量。
动物实验
RhoNox-1 不用于活体动物体内成像。对于离体研究,动物被安乐死后,迅速解剖、包埋并切片组织(例如脑、肝)。将组织切片与 RhoNox-1(5-20 μM)孵育 30-60 分钟,洗涤后进行荧光显微镜观察,以检测特定区域(例如帕金森病模型中的黑质)的 Fe2+ 水平。
药代性质 (ADME/PK)
RhoNox-1 是一种荧光探针,并非候选药物。溶解性:DMSO (25 mg/mL)。激发/发射波长最大值:540/575 nm。储存:粉末在 -20℃ 下可保存 3 年;溶剂在 -80℃ 下可保存 6 个月。避光保存。分子式:C28H30N2O4;分子量:458.55。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
化学探针的标准安全预防措施适用。RhoNox-1 仅供研究使用。避免吸入和接触。在通风良好的区域使用个人防护装备。该化合物对光敏感;处理和储存过程中请避光。
参考文献

[1]. Histological detection of catalytic ferrous iron with the selective turn-on fluorescent probe RhoNox-1 in a Fenton reaction-based rat renal carcinogenesis model. Free Radic Res. 2014 Sep;48(9):990-5.

[2]. Upregulation of transferrin receptor-1 induces cholangiocarcinoma progression via induction of labile iron pool. Tumour Biol. 2017 Jul;39(7):1010428317717655.

[3]. Contrasting intra- and extracellular distribution of catalytic ferrous iron in ovalbumin-induced peritonitis. Biochem Biophys Res Commun. 2016 Aug 5;476(4):600-606.

其他信息
这是一种仅供研究使用的荧光探针。它是一种细胞可渗透的Fe2+探针,也称为FeRhoNox-1。它可用于研究癌症、神经退行性疾病、心血管疾病等疾病中的铁代谢,并评估与活性氧(ROS)过度产生相关的疾病的治疗方法。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C28H31N2O4+
分子量
459.557
精确质量
458.22
CAS号
1447815-38-4
PubChem CID
168008618
外观&性状
Pink to red solid powder
LogP
4.2
tPSA
70.4
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
6
重原子数目
34
分子复杂度/Complexity
900
定义原子立体中心数目
0
SMILES
C(C1C=CC=CC=1C1=C2C=CC(N(CC)CC)=CC2=[O+]C2C=C(N(=O)(CC)CC)C=CC1=2)(=O)O
InChi Key
VBBOPWUGWHUQLA-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C28H30N2O4/c1-5-29(6-2)19-13-15-23-25(17-19)34-26-18-20(30(33,7-3)8-4)14-16-24(26)27(23)21-11-9-10-12-22(21)28(31)32/h9-18H,5-8H2,1-4H3
化学名
2-[3-diethylazaniumylidene-6-[diethyl(oxido)azaniumyl]xanthen-9-yl]benzoate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~100 mg/mL (~218.08 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.1760 mL 10.8800 mL 21.7599 mL
5 mM 0.4352 mL 2.1760 mL 4.3520 mL
10 mM 0.2176 mL 1.0880 mL 2.1760 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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