| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
CYP3A4
Hepatitis B virus (HBV) capsid formation inhibitor [1] . |
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| 体外研究 (In Vitro) |
HBV抗原减少：在HBV感染的HepatoPac共培养物（使用患者来源的HBV，40 vge/细胞，D基因型）中，给予RO6889678处理。采用化学发光免疫分析法（CLIA）检测培养基中分泌的HBsAg和HBeAg水平。然而，该实验方案的原始文献[1]并未详细说明HBsAg/HBeAg的特异性减少值或IC50值。
细胞内富集：RO6889678在人HepatoPac肝细胞共培养物中显示出显著的细胞内积累。单次给药后，细胞内浓度显著高于细胞外浓度，导致肝细胞富集比（组织分配系数，Kp）为 78 ± 6。这表明肝细胞主动摄取了该药物[1]。代谢物鉴定 (MetID)：在与 10 μM RO6889678 共培养 96 小时的 HepatoPac 人肝细胞共培养体系中，未代谢的母体药物是最丰富的成分（约占药物相关物质的 24%）。主要代谢途径是葡萄糖醛酸化（约占药物相关物质的 60%），由于酰基迁移，形成多种酰基葡萄糖醛酸苷结合物异构体。还检测到少量氧化代谢物和酯水解代谢物的葡萄糖醛酸苷[1]。 CYP450酶诱导：在HepatoPac进行的一项多剂量研究（每隔一天给药一次，持续10天）中，RO6889678诱导了多种细胞色素P450酶的mRNA表达和活性。治疗10天后，最大诱导倍数（Emax）和半数最大诱导浓度（EC50，单位为μM）分别为：CYP3A4（Emax：mRNA为9.1±0.4，活性为4.7±0.1；EC50：mRNA为0.05±0.01，活性为0.023±0.003）； CYP2B6（mRNA Emax：13±0.5，活性 Emax：16±1.1；mRNA EC50：0.23±0.05，活性 EC50：0.22±0.10）；CYP2C8（mRNA Emax：3.9±0.4，活性 Emax：4.8±0.1；mRNA EC50：0.06±0.03，活性 EC50：0.13±0.03）；CYP2C9（mRNA Emax：4.8±0.3，活性 Emax：2.5±0.2；mRNA EC50：0.06±0.03，活性 EC50：0.06±0.047）； CYP1A2（mRNA 的 Emax 为 2.7±0.1，活性的 Emax 为 3.8±0.2；mRNA 的 EC50 为 1.7±0.5，活性的 EC50 为 0.05±0.03）。在这些条件下，CYP2D6、UGT1A1 和 UGT1A3 的 mRNA 未观察到显著诱导（<2 倍）[1]。 转运蛋白诱导：在 HepatoPac 中连续 10 天给予 RO6889678 后，转运蛋白的 mRNA 水平也受到诱导。 OATP1B1（Emax：3.6±0.2；EC50：0.06±0.03 μM）、OATP1B3（Emax：2.8±0.1；EC50：0.16±0.02 μM）和ABCG2（BCRP）（Emax：2.9±0.2；EC50：0.09±0.04 μM）的Emax和EC50值分别为：未观察到NTCP和ABCB1（P-gp）的诱导作用[1]。 疾病状态ADME：在感染HBV（约30%肝细胞感染）的HepatoPac培养物中，将RO6889678的ADME特征与健康对照组进行了比较。肝细胞富集度（76±14 vs. 健康组 78±6）或表观固有清除率（5.5±0.3 vs. 健康组 5.2±0.2 μL/min/mg 蛋白）均未发现显著差异。此外，RO6889678 对代谢酶和转运蛋白的诱导潜力在疾病状态下也未发生改变[1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
人体药代动力学：在空腹状态下，健康志愿者单次口服RO6889678（片剂，剂量为30–2000 mg）后，测定血浆药物浓度。在100 mg的低剂量下，观察到的口服清除率为90 L/h。然而，在2000 mg的最高剂量下，观察到的口服清除率降至12 L/h，表明药物暴露量随剂量呈非线性增加，且增加幅度大于剂量比例。在300 mg及以上剂量下，观察到的最大浓度（Cmax）高于根据低剂量数据预测的浓度，最高剂量下的暴露量约为预测值的17倍[1]
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| 酶活实验 |
代谢稳定性及代谢物鉴定：将RO6889678 (10 μM) 在 96 孔人肝细胞共培养板中于 37°C、5% CO2 气氛下孵育长达 96 小时，以评估其代谢情况。采用高效液相色谱-串联质谱 (LC-MS/MS) 联用技术，使用 Q-Exactive Orbitrap 质谱仪分析样品。代谢物在 C18 色谱柱上分离，流动相为含 0.1% 甲酸的水/乙腈梯度。通过比较产物离子谱与母体化合物的谱图，并结合产物离子元素组成与预期碎片结构的匹配，对代谢物进行鉴定。代谢物的半定量丰度基于提取离子色谱图的峰面积进行评估 [1]
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| 细胞实验 |
HBV感染和治疗：将人肝细胞共培养物（24孔板）以40个病毒基因组当量（vge）/细胞的剂量感染患者来源的HBV（D基因型）。感染在添加10%胎牛血清的维持培养基中进行过夜。次日，移除病毒接种物并加入新鲜培养基。再过24小时后，分别于第0、2和4天用RO6889678处理培养物。在第10天，使用化学发光免疫分析法（CLIA）和定量标准品定量上清液中分泌的HBV抗原（HBsAg和HBeAg）的水平。通过测量白蛋白生成量来监测细胞活力[1]。
细胞摄取实验：为测定主动摄取，将不同浓度的RO6889678在96孔人肝细胞共培养板中于37°C、5% CO2气氛下孵育，分别加入或不加入2 μM利福霉素（一种OATP抑制剂）。在长达60分钟的时间点，裂解细胞，并通过LC-MS/MS定量化合物浓度。摄取率（pmol/min/mg 蛋白）由浓度-时间曲线的初始线性部分得出，并已使用仅含成纤维细胞的对照板校正了非特异性结合[1]。 胆汁外排测定：为评估胆汁外排，将 HepatoPac 共培养物在含 Ca²⁺/Mg²⁺ 的缓冲液（HBSS+/+，可维持胆小管完整）或不含 Ca²⁺/Mg²⁺ 的缓冲液（HBSS-/-，可破坏紧密连接并打开胆汁囊）中预孵育 10 分钟。用 HBSS+/+ 洗涤后，加入 RO6889678（1、3 和 10 μM）。在 20 分钟内的不同时间点取样，并通过 LC-MS/MS 定量化合物浓度。胆汁外排率计算为 HBSS+/+ 和 HBSS-/- 条件下的摄取率之差 [1] 。 CYP450 酶活性测定：在用 RO6889678 处理后，测定 HepatoPac 培养物中特定 CYP450 酶的活性。培养物与探针底物孵育：咪达唑仑（1 μM，用于 CYP3A4）、安非他酮（1 μM，用于 CYP2B6）、双氯芬酸（1 μM，用于 CYP2C9）、他克林（1 μM，用于 CYP1A2）、阿莫地喹（20 μM，用于 CYP2C8）和 SN-38（50 μM，用于 UGT1A1）。通过 LC-MS/MS 对代谢物（例如 1'-羟基咪达唑仑、羟基安非他酮、4-羟基双氯芬酸、羟基他克林、N-去乙基阿莫地喹和 SN-38 葡萄糖醛酸苷）的生成进行定量分析。代谢物生成速率（pmol/min/mg 蛋白）由浓度-时间曲线的初始线性速率得出 [1] 。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
一般性质：RO6889678是一种高溶解度（>1 mg/mL）且被动渗透性低（0.2 x 10⁻⁶ cm/s）的化合物。其logD7.4为0.07，pKa值分别为2.3（酸性）和5.8（碱性）[1]
。 血浆蛋白结合及血液分布：RO6889678的血浆蛋白结合率为0.93（即93%结合），主要结合蛋白为白蛋白。血浆/血液比为0.7[1] 。 肝脏摄取：RO6889678是OATP1B1和OATP1B3有机阴离子转运多肽的底物，OATP1B1和OATP1B3介导其主动进入肝细胞。在 HepatoPac 中，测得的活性摄取清除率为 2.6 ± 0.1 μL/min/mg 蛋白 [1]。代谢：RO6889678 主要通过两条途径代谢：UGT1A1 和 UGT1A3 直接葡萄糖醛酸化（主要途径，约占代谢的 60%）和 CYP3A4 介导的氧化（次要途径）。葡萄糖醛酸苷代谢物表现出酰基迁移。合成的 RO6889678-葡萄糖醛酸苷在 pH 7.4 磷酸盐缓冲液中的半衰期为 6.6 小时，表明其临床反应性较低 [1]。胆汁排泄：RO6889678 是外排转运蛋白 ABCG2 (BCRP) 的底物，BCRP 促进其经胆汁排泄。在 HepatoPac 中，胆汁清除率测得为 1.6 ± 0.1 μL/min/mg 蛋白 [1] 。 固有清除率：在 HepatoPac 长期肝脏模型中，RO6889678 从细胞外介质中的表观固有清除率为 5.2 ± 0.2 μL/min/mg 蛋白。其在系统中的半衰期约为 1.9 天 [1] 。 人体药代动力学预测：整合了 HepatoPac 衍生的表观固有清除率和 78 倍肝细胞富集度 (Kp) 的 PBPK 模型预测，总肝脏血浆清除率为 7.4 mL/min/kg，分布容积 (Vss) 为 1 L/kg（相比之下，未考虑主动摄取时预测值为 0.15 L/kg）。该模型预测口服生物利用度为 41% [1] 。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
药物相互作用（DDI）作为诱发因素：RO6889678是人肝细胞中多种CYP酶（CYP3A4、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP1A2）和转运蛋白（OATP1B1、OATP1B3、BCRP）的强效诱导剂，表明当与这些蛋白的底物药物合用时，可能发生药物相互作用[1]
。 药物相互作用（DDI）作为抑制因素：在HepatoPac中，RO6889678（1 μM）与强效CYP3A4抑制剂利托那韦（2 μM）共同孵育，可使RO6889678的固有清除率从5.2 ± 0.2降至0.9 ± 0.1 μL/min/mg 蛋白，表明存在显著的代谢药物相互作用，利托那韦抑制其清除。肝细胞富集因子保持不变（64 vs. 78）[1]。 与利托那韦的复杂药物相互作用：RO6889678 与利托那韦联合治疗揭示了一种复杂的相互作用。利托那韦抑制 CYP3A4 活性（降低 RO6889678 的清除率），同时诱导 UGT1A1 活性增加 2 倍，凸显了多种相互拮抗的药物相互作用机制的可能性[1]。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
候选药物背景：RO6889678（化学名称：(3S)-4-[(4R)-4-(2-氯-4-氟庚基)-5-甲氧羰基-2-噻唑-2-基-1,4-二氢嘧啶-6-基]甲基]吗啉-3-羧酸）是一种新型高效的乙型肝炎病毒 (HBV) 衣壳形成抑制剂。该药物旨在靶向肝脏，同时保持适度的外周暴露[1]。
生物药剂学分类：基于其高溶解度、低被动渗透性和主动肝脏摄取，RO6889678被归类为生物药剂学药物处置分类系统（BDDCS）3类药物[1]。 作用机制：作为一种HBV衣壳抑制剂，RO6889678可破坏病毒衣壳的形成，这是HBV复制周期中的关键步骤[1]。 研究系统：本研究广泛利用HepatoPac平台（一种人肝细胞与小鼠成纤维细胞的长期微图案化共培养系统），在单一的、生理相关的体外系统中评估RO6889678的多种ADME参数，包括在HBV感染模型中。 [1] |
| 分子式 |
C21H20CLFN4O5S
|
|---|---|
| 分子量 |
494.9237
|
| 精确质量 |
494.082
|
| 元素分析 |
C, 50.96; H, 4.07; Cl, 7.16; F, 3.84; N, 11.32; O, 16.16; S, 6.48
|
| CAS号 |
1578153-27-1
|
| PubChem CID |
89996234
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| 外观&性状 |
Solid powder
|
| LogP |
-0.5
|
| tPSA |
142
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
10
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
33
|
| 分子复杂度/Complexity |
831
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
|
| SMILES |
COC(=O)C1=C(NC(=N[C@H]1C2=C(C=C(C=C2)F)Cl)C3=NC=CS3)CN4CCOC[C@H]4C(=O)O
|
| InChi Key |
QJLRUAVQNXTCMO-RDJZCZTQSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C21H20ClFN4O5S/c1-31-21(30)16-14(9-27-5-6-32-10-15(27)20(28)29)25-18(19-24-4-7-33-19)26-17(16)12-3-2-11(23)8-13(12)22/h2-4,7-8,15,17H,5-6,9-10H2,1H3,(H,25,26)(H,28,29)/t15-,17-/m0/s1
|
| 化学名 |
(S)-4-(((R)-6-(2-Chloro-4-fluorophenyl)-5-(methoxycarbonyl)-2-(thiazol-2-yl)-3,6-dihydropyrimidin-4-yl)methyl)morpholine-3-carboxylic acid
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| 别名 |
RO-6889678; RO 6889678;RO6889678;
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| HS Tariff Code |
2934.99.03.00
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0205 mL | 10.1026 mL | 20.2053 mL | |
| 5 mM | 0.4041 mL | 2.0205 mL | 4.0411 mL | |
| 10 mM | 0.2021 mL | 1.0103 mL | 2.0205 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Link: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02321384
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