| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MET (wild-type IC50 = 1 nM; D1246N IC50 = 8 nM; Y1248C IC50 = 16 nM; D1246H IC50 = 11 nM; Y1248D IC50 = 17 nM; Y1248H IC50 = 1 nM; M1268T IC50 = 1 nM) [1];
AXL (IC50 = 7 nM) [1]; MER (IC50 = 2 nM) [1]; FGFR1 (wild-type IC50 = 18 nM; V561M IC50 = 23 nM) [1]; FGFR2 (wild-type IC50 = 17 nM; N549H IC50 = 19 nM) [1]; FGFR3 (IC50 = 15 nM) [1]; Binding affinity to MET: KD = 1.26 × 10^{-9} mol/L (ka = 1.27 × 10^6 M^{-1}s^{-1}, kd = 1.62 × 10^{-3} s^{-1}) measured by SPR [1]. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
本研究描述了新型强效MET、AXL/MER和FGFR1/2/3抑制剂S49076的临床前特性。S49076能有效阻断MET、AXL和FGFRs的细胞磷酸化，并在体外和体内抑制下游信号传导。在细胞模型中，S49076抑制MET和FGFR2依赖性胃癌细胞的增殖，阻断MET驱动的肺癌细胞迁移，并抑制表达FGFR1/2和AXL的肝癌细胞的克隆形成。[1]
S49076能有效抑制H441非小细胞肺癌细胞（组成型活性）中MET的自磷酸化，密度分析显示，10 nM即可完全抑制，IC50 = 2 nM；研究还观察到GAB1在Tyr627位点的磷酸化受到抑制[1]。在GTL-16胃癌细胞中，S49076通过ELISA检测，以IC50 = 3 nM和IC90 = 10 nM的浓度抑制MET在Tyr1349位点的磷酸化[1]。在表达人AXL的MEF细胞中，S49076通过ELISA检测，以IC50 = 56 nM的浓度抑制AXL的磷酸化[1]。在SNU-16胃癌细胞（FGFR2扩增）中，S49076在300 nM浓度下完全抑制FGFR2的自身磷酸化[1]。 S49076抑制下游信号通路：在GTL-16细胞中，抑制AKT（Ser473）和p70S6K（Thr421/Ser424）的磷酸化，其IC50值与MET抑制一致；在SNU-16细胞中，抑制衔接蛋白FRS2（Tyr436）的磷酸化[1]。 在细胞活力测定中，S49076抑制MET依赖性GTL-16细胞（IC50 = 3 nM）和FGFR2依赖性SNU-16细胞（IC50 = 167 nM）的增殖，但对EGFR依赖性MKN-7细胞无影响（IC50 > 10 μM）[1]。在A549肺癌细胞中，S49076以IC50 = 14 nM的浓度抑制HGF驱动的细胞迁移（划痕实验）[1]。在软琼脂克隆形成实验中，S49076以浓度依赖的方式抑制肝癌细胞系HLE、JHH2、JHH4和JHH6（过表达活化AXL和FGFR2）的非锚定依赖性生长，而对AXL低表达的细胞系几乎没有影响[1]。在MDA-MB-231乳腺癌细胞中，siRNA敲低实验证实，S49076特异性抑制GAS6刺激后AXL介导的AKT磷酸化[1]。 S49076在细胞试验（用VEGF刺激的HUVEC）中不抑制VEGFR2磷酸化，显示出对VEGFR2的选择性[1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在肿瘤异种移植模型中，口服S49076后，MET和FGFR2抑制作用表现出良好的药代动力学/药效学关系，且与肿瘤生长抑制效果密切相关。MET、AXL和FGFR均与VEGF/VEGFR抑制剂（如贝伐珠单抗）的耐药性有关。因此，在结肠癌异种移植模型中，S49076与贝伐珠单抗联合用药可近乎完全抑制肿瘤生长。此外，S49076单药治疗可使贝伐珠单抗耐药肿瘤的生长停滞。基于这些临床前研究显示S49076具有良好的新型药理学特性，目前正在对晚期实体瘤患者进行I期研究。
在携带皮下GTL-16胃癌异种移植瘤（MET驱动）的雌性balb/c nu/nu小鼠中，每周5天、每天一次口服S49076，持续4周，可观察到剂量依赖性的肿瘤生长抑制（TGI）：3.125 mg/kg时为69%，6.25 mg/kg时为82%，12.5 mg/kg时为91%，25 mg/kg时为95%，50 mg/kg时为103%（肿瘤停滞/消退）[1]。 在 U87-MG 胶质母细胞瘤异种移植瘤（HGF-MET 自分泌环路）中，S49076 每日一次，每周 5 天，持续 2 周，在 6.25 mg/kg 剂量下肿瘤生长抑制率 (TGI) 为 90%，在 12.5 mg/kg 剂量下为 78%，在 25 mg/kg 剂量下为 103%，在 50 mg/kg 剂量下肿瘤消退率为 68% [1]。 在 SNU-16 胃异种移植瘤（FGFR2 驱动）中，S49076 每日一次 (QD)，每周 5 天，最多持续 4 周，在 50 mg/kg 剂量下肿瘤生长抑制率 (TGI) 为 61%，在 75 mg/kg 剂量下为 91%，在 100 mg/kg 剂量下为 100%；每日两次（BID）给药方案在 37.5 mg/kg 剂量下肿瘤生长抑制率（TGI）为 102%，在 50 mg/kg 剂量下为 103% [1]。在 HT-29 结肠癌异种移植模型中，单独使用 S49076（100 mg/kg，每日一次）可诱导 65% 的 TGI，单独使用贝伐珠单抗（10 mg/kg，每周两次，腹腔注射）可诱导 71% 的 TGI，而 S49076（100 mg/kg，每日一次）与贝伐珠单抗（10 mg/kg，每周两次）联合使用可几乎完全抑制肿瘤生长 [1]。在贝伐珠单抗耐药的LS-174T结肠癌异种移植模型中（肿瘤在2-3周后对贝伐珠单抗不再产生反应），随后使用S49076（50 mg/kg，每日两次）治疗可完全抑制肿瘤生长[1]。在药效学研究中，口服S49076在2小时和6小时时，剂量从3.125 mg/kg起，可抑制GTL-16肿瘤中MET的磷酸化80%以上；剂量为6.25 mg/kg时，6小时和16小时的抑制率分别为95%和58%。此外，在6小时时还观察到AKT和p70S6K磷酸化的剂量依赖性抑制。对于 SNU-16 肿瘤中的 FGFR2，12.5 mg/kg 的 S49076 在 2 小时内抑制了 93% 的 FGFR2 磷酸化，50 mg/kg 的剂量在 6 和 16 小时内维持了 >80% 的抑制；FRS2 磷酸化的平行抑制也得到了证实 [1]。 |
| 酶活实验 |
通过X射线衍射分析MET C端片段（aa1038-1346）与类似物形成的共晶复合物，推断出S49076在MET的ATP结合口袋中的结合模式。利用NTA芯片，在pH 7.4、25°C的条件下，以10 mmol/L HEPES、150 mmol/L NaCl、0.05% P20、50 μmol/L EDTA和5% DMSO为缓冲液，通过His6标签捕获MET的C端片段（aa956-1390），进行实时无标记相互作用分析（SPR）。一个典型的循环包括：200 秒 MET 捕获（5 μL/min）、90 秒样品注入（30 μL/min）、600 秒缓冲液流动（解离）和 180 秒 EDTA（350 mmol/L）再生。GluR2 用作对照。测定了结合速率 (ka = 1.27 × 10^6 M^{-1}s^{-1})、解离速率 (kd = 1.62 × 10^{-3} s^{-1}) 和解离常数 (KD = 1.26 × 10^{-9} mol/L) [1]。
采用放射性生化分析法测定了 AXL、MER 以及 MET 和 FGFR 的野生型和突变型亚型的抑制情况（Millipore）。 IC50 值由剂量反应曲线计算得出 [1]。 S49076 的激酶结合选择性在包含 442 种人类野生型和突变型激酶的 KINOMEScan 数据库中测定（DiscoverRx）。在 100 nmol/L 的浓度下，除 MET、AXL/MER 和 FGFR 外，仅有 6% 的激酶被鉴定为活性激酶 [1]。 |
| 细胞实验 |
为进行细胞活力检测，将GTL-16和SNU-16细胞接种于含10%胎牛血清（FCS）的96孔板中，48小时后加入系列稀释的S49076。96小时（GTL-16）或120小时（SNU-16）后，加入MTT（5 mg/mL），于37℃孵育4小时；用SDS（SNU-16）或DMSO（GTL-16）溶解生成的甲臜，并测定540 nm处的吸光度值。对于 MKN-7 细胞，采用改良的碘化丙啶 (PI) 检测方法：处理 96 小时后，加入 PI 溶液 (7 μg/mL)，于 20°C 孵育 2 小时，并测量荧光强度（激发波长 530 nm，发射波长 620 nm）[1]。
对于迁移实验，将 A549 细胞接种于 96 孔板中，培养至汇合，然后刮取细胞形成 1 mm 的间隙。将培养物与 80 ng/mL HGF 和系列稀释的 S49076 一起孵育 40 小时。使用高内涵细胞分析仪测量间隙宽度[1]。 对于集落形成试验，将 5-10 × 10^3 个细胞接种在 24 孔板的琼脂中，并在添加了 40 ng/mL HGF、20% FCS 和 S49076 系列稀释液的 Iscove 改良 Dulbecco 培养基中培养 8-18 天。在评估前24小时，用2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基氯化四唑对活菌落进行染色，并使用自动图像分析系统进行菌落计数[1]。 对于Western blotting和ELISA实验，细胞在0.1% FCS培养基中饥饿培养24小时，然后用S49076处理2小时，并在最后10-20分钟加入生长因子（HGF 20 ng/mL、FGF2 50 ng/mL、GAS6 400 ng/mL、EGF 80 ng/mL、VEGF 30 ng/mL）。用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解缓冲液裂解细胞。将蛋白提取物进行SDS-PAGE电泳分离，转移至硝酸纤维素膜，并用特异性抗体进行检测。通过密度扫描法检测和定量化学发光信号。使用 Meso Scale Discovery 方案 [1] 进行磷酸化蛋白的 ELISA 检测。 |
| 动物实验 |
本研究使用雌性 balb/c nu/nu 或 swiss nu/nu 小鼠（Charles River 公司）。S49076 盐酸盐溶于 1% (w/v) 羟乙基纤维素的 pH 4.5 乙酸铵缓冲液中，以每 20 g 体重 200 μL 的剂量进行口服给药。最大耐受剂量确定为 100 mg/kg/天（每周 5 天，至少持续 3 周）。贝伐珠单抗溶于 PBS 中，以每 20 g 体重 200 μL 的剂量进行腹腔注射，剂量为 10 mg/kg，每周两次 [1]。
在药效学研究中，将 10^7 个 GTL-16 细胞或 5×10^6 个 SNU-16 细胞皮下注射到雌性裸鼠 balb/c nu/nu 中。当肿瘤体积达到约 150 mm³ 时，将小鼠随机分组（每组 n=3），并单次口服给予 S49076（0.78 至 50 mg/kg）。分别于治疗后 2、6 和 16 小时切除肿瘤并裂解，用于 Western blot 或 ELISA 分析。采用 LC/MS-MS 分析测定血液和肿瘤中 S49076 的浓度 [1]。 在疗效研究中，将 GTL-16 (10⁷ 个细胞)、SNU-16 (5×10⁶ 个细胞)、U87-MG (10⁶ 个细胞悬浮于 Matrigel 中)、HT-29 (10⁷ 个细胞) 或 LS-174T (10⁷ 个细胞) 皮下注射到小鼠体内。当肿瘤体积达到约 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为 8-12 只一组，并口服 S49076（3.125 至 100 mg/kg），每日一次或两次，每周 5 天，持续 4 周。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤大小，并记录体重。肿瘤生长指数 (TGI) 的计算公式为 [1 - RTV(治疗组)/RTV(对照组)] × 100。统计分析采用重复测量双因素方差分析，并对肿瘤体积的对数进行 Dunnett 检验。所有组的体重减轻均小于 5% [1]。 在与贝伐单抗联合用药的研究中，HT-29 肿瘤分别接受 S49076（50 或 100 mg/kg，每日一次）和/或贝伐单抗（10 mg/kg，腹腔注射，每周两次）治疗，持续 3 周。对于贝伐单抗耐药的 LS-174T 模型，小鼠每周接受两次贝伐单抗治疗 2 周，然后随机分为继续接受贝伐单抗治疗或改用 S49076（50 mg/kg BID）治疗 3 周 [1]。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在裸鼠中，S49076在剂量高达 50 mg/kg 时表现出线性药代动力学。给药后 2 小时，血药浓度分别为：0.78 mg/kg ~10 nM，1.56 mg/kg ~20 nM，3.125 mg/kg ~100 nM，6.25 mg/kg ~200 nM，12.5 mg/kg ~400 nM，25 mg/kg ~1 μM，50 mg/kg ~3 μM，100 mg/kg ~7 μM（100 mg/kg 时吸收饱和，可能消除也饱和）。游离的S49076比例估计为20% [1]。
S49076在肿瘤中的半衰期约为7小时（剂量为3.125 mg/kg），而在血液中的半衰期不足2小时。在3.125 mg/kg剂量下，治疗后肿瘤内药物浓度至少在16小时内保持在100 nM以上 [1]。 为了在2小时内达到近乎完全的MET抑制（P-Tyr1349），需要3.125 mg/kg的剂量，相当于血液浓度为100 nM（游离浓度为20 nM），这与体外GTL-16细胞的IC90值为10 nM相符。对于 FGFR2 抑制，血液浓度约为 1 μM（游离浓度为 200 nM）时，2 小时可达到 93% 的抑制率，这与体外 300 nM 浓度下的完全抑制结果一致 [1]。 数值药代动力学参数（如 AUC、Cmax、t1/2、Vd、Cl）在补充表 S1 中提供，但未在正文中详细说明 [1]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在小鼠中，S49076 的最大耐受剂量 (MTD) 确定为 100 mg/kg/天（每周口服 5 天，至少 3 周）[1]。
在所有疗效研究中，所有组别、所有时间点的体重减轻均小于 5%，表明其耐受性良好[1]。 未报告其他毒性数据（例如，LD50、器官毒性、高钙血症）[1]。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
S49076是一种ATP竞争性酪氨酸激酶抑制剂，具有独特的选择性：它能有效抑制MET、AXL/MER和FGFR1/2/3，但在细胞实验中对VEGFR2的抑制作用不强，这可能避免与VEGFR2抑制相关的剂量限制性副作用[1]。
MET、AXL和FGFR与多种抗癌疗法的原发性或获得性耐药有关，包括EGFR抑制剂、BRAF抑制剂、化疗和抗血管生成药物。 S49076被认为对这些受体单独或联合激活的癌症以及耐药情况下具有潜在益处[1]。 该药物在结肠癌异种移植模型中与贝伐单抗显示出强烈的协同或叠加活性，并且在贝伐单抗耐药模型中也有效，提示其作用机制可能从VEGFR依赖性转变为MET/AXL/FGFR依赖性[1]。 基于这些临床前研究，目前正在对晚期实体瘤患者进行S49076的I期临床试验[1]。 化学名称：3-[(3-{[4-(4-吗啉基甲基)-1H-吡咯-2-基]亚甲基}-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)甲基]-1,3-噻唑烷-2,4-二酮。结合模式显示铰链区存在两种相互作用（吲哚酮部分与 Pro1158/Met1160），噻唑烷二酮的羰基与 Asp1222 的 NH 骨架之间存在第三种相互作用 [1]。 |
| 分子式 |
C22H23CLN4O4S
|
|---|---|
| 分子量 |
474.960422754288
|
| 精确质量 |
474.112
|
| CAS号 |
1265966-31-1
|
| PubChem CID |
101043621
|
| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
|
| tPSA |
120
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
32
|
| 分子复杂度/Complexity |
769
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
Cl.S1CC(N(C1=O)CC1C=CC2=C(C=1)/C(/C(N2)=O)=C/C1=CC(=CN1)CN1CCOCC1)=O
|
| InChi Key |
FPSAJUOIYZSJJA-NAIZSXBXSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C22H22N4O4S.ClH/c27-20-13-31-22(29)26(20)12-14-1-2-19-17(8-14)18(21(28)24-19)9-16-7-15(10-23-16)11-25-3-5-30-6-4-25;/h1-2,7-10,23H,3-6,11-13H2,(H,24,28);1H/b18-9-;
|
| 化学名 |
3-[[(3Z)-3-[[4-(morpholin-4-ylmethyl)-1H-pyrrol-2-yl]methylidene]-2-oxo-1H-indol-5-yl]methyl]-1,3-thiazolidine-2,4-dione;hydrochloride
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1054 mL | 10.5272 mL | 21.0544 mL | |
| 5 mM | 0.4211 mL | 2.1054 mL | 4.2109 mL | |
| 10 mM | 0.2105 mL | 1.0527 mL | 2.1054 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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