Sedanolide   中文名称: 瑟丹酸内酯

- Sedanolide modulates the following targets/pathways :
- PI3K-I/Akt/mTOR pathway (decreases protein levels of PI3K-I, Akt, and mTOR). [2]
- Beclin-1/PI3K-III/LC3-II pathway (increases protein levels of Beclin-1, PI3K-III, and LC3-II). [2]
- p53 signaling (increases nuclear p53 and DRAM; decreases cytosolic p53 and TIGAR). [2]
- NF-κB activation (increases phosphorylation of IκB, nuclear translocation of p65, and NF-κB-DNA binding activity). [2]

塞达诺内酯可激活人肝癌细胞中的PI3K、p53和NF-κB信号通路，从而诱导自噬[2]。在HepG2和CaCo-2细胞中，浓度范围为7至500 μM的塞达诺内酯处理24小时后，MTT法检测显示细胞活力未受影响。然而，当细胞在不含塞达诺内酯的培养基中继续培养72小时（两个细胞周期）后，先前暴露于500 μM塞达诺内酯的HepG2细胞的活力出现下降（HepG2细胞的IC₅₀值为431.4 ± 37.0 μM；CaCo-2细胞的IC₅₀值>500 μM）。 [1]
- 用 100 μM 塞达诺内酯预处理 HepG2 或 CaCo-2 细胞 24 小时，然后暴露于 H₂O₂ 或 tBOOH（7-500 μM，30 分钟），与对照组相比，细胞活力没有统计学上的显著差异。单独使用 H₂O₂ 的 IC₅₀ 值：CaCo-2 233.7 ± 60.3 μM，HepG2 300.8 ± 45.8 μM；单独使用 tBOOH 的 IC₅₀ 值：CaCo-2 46.6 ± 21.6 μM，HepG2 126.1 ± 10.9 μM；100 μM 塞达诺内酯 + H₂O₂：两种细胞系的 IC₅₀ 值均 >500 μM；对于 100 μM 塞达诺内酯 + tBOOH：CaCo-2 细胞的 DNA 断裂率为 122.6 ± 77.8 μM，HepG2 细胞的 DNA 断裂率为 221.5 ± 110.6 μM。[1]
- 在彗星试验中，用 500 μM 塞达诺内酯孵育 24 小时后，HepG2 细胞的 DNA 断裂显著增加（p < 0.05，以任意单位表示），而 CaCo-2 细胞则未观察到此现象。较低浓度（10-250 μM）未观察到 DNA 断裂增加。FDA/EtBr 检测显示，裂解前细胞活力超过 80%。塞达诺内酯（100 μM，预处理 24 小时）对两种细胞系中 H₂O₂ 或 tBOOH 诱导的 DNA 断裂均无保护作用。 [1] 在人肝癌 J5 细胞中，Sedanolide（100、250 或 500 μM，处理 24 小时）抑制了细胞活力，MTT 法检测结果显示细胞活力分别为 101±8%、96±7% 和 71±7%，其中 500 μM 处理组的细胞活力显著低于对照组（100%）（p < 0.05）。500 μM 处理组观察到细胞形态学变化。[2] 通过单丹酰尸胺 (MDC) 染色评估自噬诱导情况。经 100、250 或 500 μM Sedanolide 处理 24 小时后，MDC 荧光强度（指示自噬体）显著增加，分别达到 35±5%、46±8% 和 83±9%，而对照组仅为 6±3%（p < 0.05）。 [2]
- 对用Sedanolide（250 或 500 μM，24 小时）处理的 J5 细胞进行免疫印迹分析显示，PI3K-I 蛋白水平（对照组的 89±7% 和 78±4%）、Akt（86±5% 和 62±3%）和 mTOR（100、250 和 500 μM 分别为 75±4%、65±3% 和 53±4%）显著降低（p < 0.05）。 [2] - 在 J5 细胞中，Sedanolide（250 或 500 μM，24 小时）显著增加了 Beclin-1（500 μM 时为 144±14%）、PI3K-III（250 μM 时为 124±12%，500 μM 时为 164±18%）和 LC3-II（250 μM 时为 167±13%，500 μM 时为 185±15%）的蛋白水平，与对照组（100%）相比（p < 0.05）。 [2]
- Sedanolide（500 μM，24 小时）显著增加核内 p53 (183±17%) 和 DRAM (168±14%) 蛋白水平，同时降低胞质 p53 (45±13%) 和 TIGAR (56±13%) 蛋白水平（与对照组 (100%) 相比）（p < 0.05）。[2]
- Sedanolide（250 或 500 μM，24 小时）增加 p-IκB 蛋白水平（分别为对照组的 256% 和 278%），降低核内 p65 蛋白水平（分别为对照组的 334% 和 345%），并增强 NF-κB-DNA 结合活性（p < 0.05）。[2]

在A/J小鼠的肝脏、小肠黏膜和前胃中，景天内酯可增强谷胱甘肽-S-转移酶（GST）的活性[1]。

MTT 细胞活力检测（第一项研究）：将 HepG2 和 CaCo-2 细胞接种于 96 孔微孔板中，并使其过夜贴壁。将细胞与浓度递增的 Sedanolide（7-500 μM）孵育 24 小时。用磷酸盐缓冲液 (PBS) 洗涤两次后，将细胞置于不含 Sedanolide 的完全培养基中继续培养两个细胞周期（约 72 小时）。通过监测 MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物）在 540 nm 处的还原情况来测定细胞存活率。加入 MTT（0.6 mg/mL），于 37°C 孵育 3 小时，然后移除培养基，并将染料溶解于异丙醇中。使用 96 孔微孔板读数仪读取吸光度值。计算了IC₅₀值。[1]
- 荧光素二乙酸酯/溴化乙锭 (FDA/EtBr) 细胞活力检测：将细胞与 FDA 和 EtBr 溶液按 1:1 (v/v) 的比例混合，在 37°C 下孵育 2-5 分钟，然后铺于载玻片上。活细胞发出绿色荧光，死细胞发出红色荧光，垂死细胞的胞质呈绿色，细胞核呈红色。使用蓝光 (450-490 nm) 荧光显微镜，在 400 倍放大倍率下观察样品。每张载玻片计数 200 个细胞。该检测用于在彗星试验的裂解步骤之前监测细胞活力。[1]
- 彗星试验（单细胞凝胶电泳）：将 HepG2 或 CaCo-2 细胞接种于 3.5 cm 组织培养皿中，并使其过夜贴壁。为了评估背景DNA损伤，细胞用Sedanolide（10-500 μM）处理24小时。为了评估保护作用，细胞先用100 μM Sedanolide预处理24小时，然后暴露于H₂O₂或tBOOH（1-100 μM，30分钟）。将细胞包埋于载玻片上的1%低熔点琼脂糖中，浸入裂解液（2.5 M NaCl、10 mM Tris、100 mM EDTA、1% Triton X-100、10% DMSO，pH 10）中，于4°C孵育90分钟。碱处理（40分钟，4°C）使DNA解旋。电泳在20 V电压下进行25分钟（300 mA）。载玻片经冲洗、中和后，用溴化乙锭染色。使用荧光显微镜对细胞核进行目测评分，每个样本计数100个细胞核，评分范围从0（未受损）到4（严重受损）。计算任意单位。[1]
- MTT细胞活力检测（第二项研究）：将J5人肝癌细胞以1×10⁶个细胞/3 cm培养皿的密度接种，培养24小时后，分别用100、250或500 μM的Sedanolide处理24小时。加入MTT试剂（5 mg/mL），通过测量570 nm处的吸光度值来确定细胞活力。使用相差显微镜观察细胞形态变化。 [2]
- 单丹酰尸胺 (MDC) 染色检测自噬：将生长在盖玻片上的 J5 细胞用 100、250 或 500 μM 的塞达诺内酯处理 24 小时。然后将细胞与 0.1 mM MDC 孵育 15 分钟。在倒置荧光显微镜下以 400 倍放大倍率采集显微照片。MDC 染色的细胞在激发波长 360 nm 和发射波长 530 nm 下进行荧光测定。[2]
- 蛋白质表达的免疫印迹分析：将 J5 细胞用塞达诺内酯（100、250 或 500 μM）处理 24 小时。收集总蛋白，并使用 NE-PER 提取试剂盒获得核提取物。采用SDS-PAGE和免疫印迹法检测PI3K-I、PI3K-III、Akt、mTOR、Beclin-1、LC3-II、p53、DRAM、TIGAR、p-IκB、IκB和NF-κB (p65)的细胞质和细胞核蛋白表达。使用过氧化氢/四盐酸盐二氨基联苯胺或增强型化学发光检测试剂盒显色，并用AlphaImager 2000进行定量分析。[2] - NF-κB-DNA结合活性测定：使用NE-PER提取试剂盒提取经Sedanolide（100、250或500 μM，处理24 h）处理的J5细胞的核提取物。根据制造商的说明，使用NF-κB (p65)转录因子活性检测试剂盒测定NF-κB-DNA结合活性。[2]

在HepG2和CaCo-2细胞中，MTT实验表明，浓度高达500 μM的Sedanolide处理24小时后，HepG2细胞存活率为120±10%，CaCo-2细胞存活率为110±20%，未观察到毒性。然而，在不含Sedanolide的培养基中培养72小时后，HepG2细胞的活力显著下降，IC₅₀值为431.4 ± 37.0 μM；CaCo-2细胞的IC₅₀值大于500 μM。[1]
彗星试验表明，500 μM的Sedanolide（24小时）可显著增加HepG2细胞的DNA链断裂（p < 0.05），但对CaCo-2细胞无此作用。 MTT 或 FDA/EtBr 检测结果显示，这种增加并未伴随细胞活力的降低。[1]
- 在 J5 人肝癌细胞中，500 μM 的塞达诺内酯处理 24 小时后，MTT 检测结果显示细胞活力显著降低至 71±7% (p < 0.05)。[2]

[1]. Sedanolide, a Natural Phthalide From Celery Seed Oil: Effect on Hydrogen Peroxide and Tert-Butyl Hydroperoxide-Induced Toxicity in HepG2 and CaCo-2 Human Cell Lines. In Vitr Mol Toxicol. Fall 2001;14(3):233-40.

[2]. Sedanolide Induces Autophagy Through the PI3K, p53 and NF-κB Signaling Pathways in Human Liver Cancer Cells. Int J Oncol. 2015 Dec;47(6):2240-6.

芹菜内酯属于2-苯并呋喃类化合物。据报道，它存在于川芎、当归以及其他具有相关数据的生物体中。另见：新诺内德（注：已移至此处）。

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- 芹菜内酯是一种邻苯二甲酸酯类化合物（3-丁基-3a,4,5,6-四氢-1(3H)-异苯并呋喃酮），在芹菜（Apium graveolens L.）种子油中含量极低（1-3%）。它是芹菜特有香气和风味的来源。[2]
- 先前的研究（这些论文引用了相关研究，但并非原创）表明，芹菜内酯具有前列腺素H内过氧化物合酶（COX-I和COX-II）抑制活性以及拓扑异构酶I和II抑制活性。它还能提高小鼠肝脏、小肠黏膜和前胃中的谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性，并抑制苯并芘诱导的小鼠前胃肿瘤形成（肿瘤发生率降低57%，肿瘤数量减少83%）。[1][2]
- 在第二项研究中，作者提出了一个模型，其中Sedanolide通过抑制PI3K-I/Akt/mTOR表达并提高Beclin-1/PI3K-III/LC3-II蛋白水平以促进自噬体前体形成，以及通过降低胞质p53/TIGAR水平并增加核内p53/DRAM水平来促进自噬体形成，从而诱导J5细胞自噬。[2]

C12H18O2

194.27012

194.131

C, 74.19; H, 9.34; O, 16.47

6415-59-4

5018391

White to off-white solid powder

1.03

342.0±11.0 °C(Predicted)

120 °C

1.742

2.828

26.3

0

2

3

14

255

0

CCCCC1C2CCCC=C2C(=O)O1

UPJFTVFLSIQQAV-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C12H18O2/c1-2-3-8-11-9-6-4-5-7-10(9)12(13)14-11/h7,9,11H,2-6,8H2,1H3

3-butyl-3a,4,5,6-tetrahydro-3H-2-benzofuran-1-one

Neocnidilide; Sedanolide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~514.75 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。