- AMPK (AMP-activated protein kinase) [1]
- MAPK (mitogen-activated protein kinase, including ERK, JNK, p38) [1]
- ACC (acetyl-CoA carboxylase) – downstream target of AMPK [1]
- PPARγ, C/EBPα, C/EBPβ – transcription factors involved in adipogenesis [1]

黑芥子苷（100 μg/mL；24 h）可使细胞停滞于细胞周期的 G0/G1 期，并上调 p21 和 p27 的表达 [1]。EBPα、PPARγ、瘦素和 aP2 的表达显著抑制了脂滴的积累和脂肪的形成。在脂肪细胞增殖早期，芥子苷可增加 AMPK、MAPK 和辅酶 A 磷酸化酶 (ACC) 的磷酸化水平。这表明芥子苷通过激活 AMPK、MAPK 和 ACC 发挥抗脂肪生成作用 [1]。黑芥子（1-100 μg/mL；8 天）可抑制 TNF-α、IL-6、IL-1β 和 IL-18 等促炎细胞因子。

---

- 芥子苷（1、10、100 μg/mL）显著且呈浓度依赖性地降低了 3T3-L1 细胞脂肪分化过程中的脂质积累，油红 O 染色结果显示其降低（p < 0.05）。[1]
- 芥子苷（1、10、100 μg/mL）下调了脂肪细胞分化标志物（包括 PPARγ、C/EBPα、SREBP1、aP2、Fas 和瘦素）的蛋白和 mRNA 表达。Western blot 和 qRT-PCR 分析显示，与 MDI 处理的对照组相比，这些标志物的表达均降低。 [1]
- 流式细胞术分析显示，芥子苷（100 μg/mL）可使 3T3-L1 细胞在有丝分裂克隆扩增过程中停滞于细胞周期的 G0/G1 期。[1]
- 芥子苷可增加 MDI 诱导的脂肪细胞中 p21 和 p27 的表达，并抑制 CDK2 和 c/EBPβ 的表达（Western blot）。[1]
- 芥子苷（1、10、100 μg/mL）可在脂肪细胞分化早期（2 天）增加 AMPK 及其下游靶标 ACC 的磷酸化水平，而不改变 AMPK 或 ACC 的总蛋白水平（Western blot）。 [1]
- 芥子苷（1、10、100 μg/mL）显著抑制了MDI诱导的ERK、JNK和p38 MAPK的磷酸化（Western blot）。[1]
- 芥子苷（1、10、100 μg/mL）降低了促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18在蛋白（Western blot）、mRNA（qRT-PCR）水平以及培养基（ELISA）中的表达和产生。[1]
- siRNA敲低AMPK逆转了芥子苷对AMPK和ACC磷酸化的影响，并增加了包括PPARγ在内的脂肪生成相关基因的表达。[1]

通过增强抗氧化酶活性并调节 MAPK 缓冲抑制标志物级联反应，黑芥子（15–30 mg/kg；血管壁；持续 12 天）对 DSS 感觉血管炎具有预防和治疗作用 [2]。

细胞周期分析[1]
细胞类型： 3T3-L1 脂肪细胞
测试浓度： 100 μg/mL
孵育时间： 24 小时
实验结果： 细胞周期 G0/G1 期阻滞，p21 和 p27 表达增加。

---

蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： 3T3-L1 脂肪细胞
测试浓度： 1、10 和 100 μg/mL
孵育时间： 8 天
实验结果： 通过下调 CCAAT 增强子结合蛋白 α (C/EBPα)、PPARγ、瘦素和 aP2 的表达，显著抑制脂滴积累和脂肪生成。

---

RT-PCR[1]
细胞类型： 3T3-L1 脂肪细胞
测试浓度： 1、10 和 100 μg/mL
孵育时间： 8 天
实验结果： 抑制促炎细胞因子（包括 TNF-α、IL-6、IL-1β 和 IL-18）的产生。

---

- 细胞增殖实验 (MTT)：将 3T3-L1 细胞以 1×10^5 个细胞/孔的密度接种于 96 孔板中，并用不同浓度 (0–200 μg/mL) 的芥子苷处理 48 小时。去除上清液后，将细胞与 MTT 溶液孵育 2 小时。由活细胞形成的甲臜晶体溶解于DMSO中，并使用微孔板读数仪在550 nm处测量吸光度。细胞增殖以未处理对照组的百分比表示。芥子苷在浓度高达200 μg/mL时未显示细胞毒性。[1]
- 油红O染色检测脂质积累：在有或无芥子苷（1、10、100 μg/mL）存在的情况下，脂肪细胞分化8天后，用PBS洗涤细胞，用3.7%甲醛在室温下固定10分钟，然后用过滤后的油红O溶液在室温下染色2小时。染色后，用PBS洗涤细胞四次，并使用光学显微镜采集脂滴图像。用异丙醇洗脱保留的染料，并通过分光光度计在490 nm处进行定量。 [1]
- Western blot 分析：将 3T3-L1 细胞以 2×10⁵ 个细胞/孔的密度接种于 6 孔板中，并在含有芥子苷（1、10、100 μg/mL）的培养基中，用 MDI 或胰岛素处理 8 天（或指定时间点）。用含有 SDS、脱氧胆酸钠、NP-40、蛋白酶抑制剂和 NaCl 的 Tris 缓冲液（pH 8.0）裂解细胞。在 4°C 下以 13,000×g 离心 10 分钟后，采用 Bradford 法测定蛋白浓度。将全细胞裂解液进行 6–15% SDS-PAGE 电泳分离，然后转移至 PVDF 膜上，用 5% 脱脂奶粉 TBST 溶液在室温下封闭 1 小时，并用相应的抗体进行孵育。使用 ECL 试剂盒进行显色。使用 Image Gauge Ver 4.0 软件进行密度分析，并将相对强度值以 β-肌动蛋白进行标准化。[1]
- 定量实时 PCR (qRT-PCR)：将 3T3-L1 细胞以 2×10^5 个细胞/mL 的密度接种于 6 孔板中，培养 4 天，然后在含有芥子苷 (1、10、100 μg/mL) 的条件下，分别用 MDI 或胰岛素处理 8 天。使用 Trizol 试剂提取总 RNA。在实时 PCR 系统中，以 20 μL PCR 反应体系（8 μL cDNA、1 μL 正向引物和 1 μL 反向引物、10 μL SYBR Green Master Mix）扩增 cDNA。基因表达以 GAPDH 为内参基因进行标准化。本研究使用了针对 PPARγ、C/EBPα、瘦素、aP2、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18 和 GAPDH 的引物序列。[1]
- 流式细胞术细胞周期分析：将汇合后的 3T3-L1 细胞在有或无芥子苷的情况下用 MDI 处理 24 小时。收集细胞，并在 4°C 下用 70% 乙醇固定过夜。去除乙醇后，将细胞在黑暗中用含 RNase (10 μg/mL) 的碘化丙啶溶液 (50 μg/mL) 染色 30 分钟。进行荧光激活细胞分选 (FACS) 分析，并使用流式细胞术软件分析数据。 [1] - RNA干扰（siRNA）：将3T3-L1细胞接种于6孔板中，并按照制造商的说明，用与siRNA转染试剂混合的AMPK和ACC短干扰RNA（siRNA）进行瞬时转染。为了敲低内源性AMPK和ACC，将细胞用浓度为100 mM的siRNA转染24小时。[1]

动物/疾病模型：葡聚糖硫酸钠 (DSS) 诱导的小鼠模型 [2]
剂量： 15 mg/kg 或 30 mg/kg
给药途径： 灌胃给药 (po)，持续 12 天
实验结果： 显著减轻了 DSS 诱导的体重减轻和结肠长度缩短，并改善了疾病指数评分。成功消除了 DSS 诱导的 IL-17 水平，并改善了结肠组织屏障功能。

---

- MTT 检测结果显示，浓度高达 200 μg/mL 的芥子苷对 3T3-L1 细胞没有细胞毒性。[1]

[1]. Inhibitory effect of sinigrin on adipocyte differentiation in 3T3-L1 cells: Involvement of AMPK and MAPK pathways. Biomed Pharmacother. 2018 Jun;102:670-680.

[2]. Sinigrin Attenuates the Dextran Sulfate Sodium-induced Colitis in Mice by Modulating the MAPK Pathway. Inflammation. 2023 Jun;46(3):787-807.

肥胖的特征是分化脂肪细胞的数量和体积增加。芥子苷通过AMPK和MAPK信号通路抑制3T3-L1脂肪细胞的早期脂肪生成，并减少促炎细胞因子的产生。[1]
- 芥子苷通过减弱脂肪生成早期阶段的有丝分裂克隆扩增（MCE）来抑制脂肪细胞分化，这与细胞周期停滞于G0/G1期以及细胞周期调节因子（p21、p27、CDK2、c/EBPβ）表达的改变有关。[1]
- 芥子苷的抗脂肪生成作用是通过下调主要脂肪生成转录因子PPARγ和C/EBPα以及脂肪细胞特异性基因SREBP1、aP2、Fas和瘦素的表达来实现的。 [1]
- 芥子苷治疗可减少脂肪细胞中促炎细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18）的产生，这些细胞因子在肥胖症中升高，并与炎症相关。[1]

C10H16KNO9S2

397.4636

415

3952-98-5

534-69-0 (Parent);64550-88-5 (monohydrate salt/solvate)

23684362

White to off-white solid

125 - 127 °C

202.62

4

11

7

23

509

5

[K+].S(/C(/C([H])([H])C([H])=C([H])[H])=N\OS(=O)(=O)[O-])[C@@]1([H])[C@@]([H])([C@]([H])([C@@]([H])([C@@]([H])(C([H])([H])O[H])O1)O[H])O[H])O[H]

QKFAFSGJTMHRRY-FVDOMRANSA-M

InChI=1S/C10H17NO9S2.K/c1-2-3-6(11-20-22(16,17)18)21-10-9(15)8(14)7(13)5(4-12)19-10;/h2,5,7-10,12-15H,1,3-4H2,(H,16,17,18);/q;+1/p-1/b11-6-;/t5-,7-,8+,9-,10+;/m1./s1

potassium;[(Z)-1-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]sulfanylbut-3-enylideneamino] sulfate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~12.5 mg/mL (~31.45 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。