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Thymosin β4 (human, bovine, horse, rat)

别名: 胸腺素 beta 4;醋酸胸腺素β4;醋酸胸腺素β4Thymosinβ4Acetate;醋酸胸腺肽beta4;醋酸胸腺肽β4;胸腺素β4;胸腺肽β4;TB500
目录号: V36672 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
胸腺素 β4（人、牛、马、大鼠）是一种天然存在的肽化合物和有效的肌动蛋白聚合调节剂。
Thymosin β4 (human, bovine, horse, rat) CAS号: 77591-33-4
产品类别: Peptides
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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产品说明书
产品描述

描述：胸腺素β4（人、牛、马、大鼠）是一种天然存在的肽化合物，也是一种强效的肌动蛋白聚合调节剂。它是一种天然存在的强效肌动蛋白聚合调节剂，存在于人血小板中，浓度为200-500μM。胸腺素β4（人、牛、马、大鼠）（CAS号：77591-33-4）以1:1的比例螯合G-肌动蛋白单体（Kd = 0.7 - 1.0 μM），并在profilin存在下促进肌动蛋白丝的快速聚合。它参与伤口愈合、MMPs的诱导、趋化性、血管生成、炎症过程和肿瘤进展。胸腺素β4是β-胸腺素家族的成员，该家族是一组高度保守的极性5 kDa肽，最初从胸腺中分离得到。它是大多数细胞类型中最丰富的β-胸腺素，浓度高达0.4 mM，主要功能是作为一种细胞内G-肌动蛋白单体螯合蛋白。胸腺素β4（人、牛、马、大鼠）（CAS号：77591-33-4）与G-肌动蛋白形成1:1复合物，解离常数（Kd）在0.5–2.5 μM范围内，从而维持大量未聚合的肌动蛋白，这些肌动蛋白可被动员用于快速的丝状组装。除了与肌动蛋白结合外，它还参与多种生物学过程，包括血管生成、伤口愈合、细胞凋亡、炎症和肿瘤进展。它可以从细胞分泌并发挥旁分泌作用，其N端四肽AcSDKP（N-乙酰-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸）由蛋白水解产生，具有独立的促血管生成和抗纤维化活性。[1][2][3]

生物活性&实验参考方法
靶点
Actin (G-actin). Thymosin β4 (human, bovine, horse, rat) (CAS#: 77591-33-4) binds monomeric actin with a dissociation constant (Kd) of 0.7–1 μM for rabbit skeletal muscle actin [1]; Kd values between 0.5 and 2.5 μM are reported for various β-thymosins [2]; the sulfoxide form (oxidation at Met6) has ~20-fold higher Kd [2].
体外研究 (In Vitro)
胸腺素β4（人、牛、马、大鼠）（CAS号：77591-33-4）（重组，44个氨基酸残基，起始甲硫氨酸未被切割）在大肠杆菌中表达，经热处理（80℃，10分钟）和离子交换色谱（Mono Q、Mono S）纯化后，仍保留肌动蛋白结合活性。平衡沉降实验表明其主要以单体形式存在（单体含量为91%），分子量为5,889 Da（理论值为5,057 Da）。凝胶过滤实验表明，由于其伸展构象，表观分子量约为20 kDa。在非变性凝胶电泳中，Tβ4的迁移速度慢于肌动蛋白，并与肌动蛋白形成复合物，该复合物的迁移速度快于肌动蛋白。 Tβ4 以剂量依赖的方式抑制肌动蛋白聚合：当 Tβ4 浓度为 2.3 μM 时，芘标记肌动蛋白的表观临界浓度从 0.2 μM 增加到 0.53 μM，解离常数 (Kd) 为 1.19 μM。芘-肌动蛋白荧光测定表明，浓度为 0.77–3.08 μM 的 Tβ4 会降低肌动蛋白带刺端的延伸速率；观察到的速率略高于根据稳态 Kd 预测的速率，尤其是在 Tβ4/肌动蛋白比例较低时。Tβ4 不与多磷酸肌醇（PIP2，浓度高达 128 μM）结合，其活性不受 PIP2 的影响。在高浓度 (>100 μM) 下，Tβ4 可以与 F-肌动蛋白交联并整合到肌动蛋白丝中。Met6 氧化为亚砜（H2O2 处理）可使 Kd 增加约 20 倍，并降低肌动蛋白结合亲和力。 N端截短（去除1-6或1-12位氨基酸残基）也会增加Kd值，而截短1-23或26-43位氨基酸残基则会消除结合。Tβ4是转谷氨酰胺酶的谷氨酰胺底物，可与细胞外基质蛋白交联。[1][2]
在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中，胸腺素β4（人、牛、马、大鼠）（CAS号：77591-33-4）（0.1 μg/ml）可促进细胞在Matrigel基质胶上的黏附、铺展和管状结构形成。在冠状动脉环实验中，Tβ4（0.1 μg/ml）可诱导毛细血管萌芽并增加血管面积（通过分支使血管面积增加一倍）。在Boyden小室实验中，Tβ4可作为内皮细胞（HUVEC和人冠状动脉内皮细胞）的趋化因子（其趋化能力是单独培养基的4～6倍），但不能吸引成纤维细胞、平滑肌细胞、中性粒细胞、单核细胞或HT1080细胞。肌动蛋白结合基序LKKTET是血管生成活性的必要且充分条件。Tβ4可上调B16-F10肺癌细胞和发育中心脏的VEGF表达；敲低Tβ4则可降低VEGF表达。Tβ4还能增加细胞骨架蛋白（肌球蛋白IIA、α-辅肌动蛋白、原肌球蛋白、肌动蛋白、α5整合素、黏着斑蛋白、黏着斑蛋白）、细胞外基质成分（层粘连蛋白-5）和基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9、MT6-MMP）的表达。在成年小鼠心脏心外膜组织块培养中，Tβ4 刺激心外膜衍生细胞 (EPDC) 的增殖，这些细胞可分化为平滑肌细胞（SMαA 阳性）和内皮细胞（Tie2 阳性）。添加 Tβ4 可显著增加 SMαA 阳性和 Tie2 阳性细胞的数量；VEGF 和 FGF7 可进一步增强这种作用。Tβ4 存在于细胞核中，提示其可能具有转录调控功能。[2][3]
体内研究 (In Vivo)
在体内，内源性胸腺素β4（人、牛、马、大鼠）（CAS号：77591-33-4）是小鼠胚胎发育过程中冠状动脉血管生成、血管形成和动脉生成所必需的。条件性心肌Tβ4敲低（使用Nkx2.5Cre驱动的Tβ4shRNA）会导致心肌变薄且致密，心外膜脱离并伴有表面结节，冠状动脉血管缺陷（Tie2阳性微血管缺失），平滑肌细胞募集不足（SMαA阳性细胞滞留在心外膜中），胸部大血管出血，以及右锁骨下动脉缺失。Tβ4敲低胚胎还表现出心肌AcSDKP水平降低（降低40%）。给妊娠雌鼠注射AcSDKP可恢复四肽水平，但无法挽救表型。成年小鼠发生心肌梗死后，心脏内源性Tβ4和AcSDKP水平上调。局部或腹腔注射Tβ4可加速大鼠全层皮肤创伤模型的伤口愈合（上皮化增加、胶原沉积、血管生成和伤口收缩）。在老年和糖尿病啮齿动物中，Tβ4也能促进伤口修复。在角膜损伤模型中，局部应用Tβ4可促进角膜上皮细胞迁移，增加细胞间和细胞-基质接触，抑制细胞凋亡，抑制MMP-2/MMP-9/MT6-MMP，并通过NFκB/TNF-α通路减轻炎症。在鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）实验中，Tβ4可增强血管生成（血管面积增加一倍），其效果与阳性对照β-PMA相当。在B16-F10细胞中过表达Tβ4可增加肿瘤血管生成和VEGF表达。 [2][3]
酶活实验
平衡沉降：胸腺素β4（人、牛、马、大鼠）（CAS#: 77591-33-4）（11.5 μM，溶于20 mM Tris-HCl缓冲液，pH 7.4）在An60-Ti转子中于277 K下以40,000 rpm离心。在平衡状态下进行220 nm处的吸光度扫描；使用0.7149 cm³/g的偏比容计算分子量，得到浮力分子量为1,608 Da，计算分子量为5,889 Da，表明单体含量约为91%。 [1]芘-肌动蛋白聚合测定：将用N-(1-芘基)碘乙酰胺标记的兔肌肉肌动蛋白（比例为1:10或1:6.7）与未标记的肌动蛋白混合于G缓冲液（0.5 mM ATP、0.5 mM β-巯基乙醇、0.2 mM KCl、10 mM Tris-HCl，pH 7.5）中。加入F缓冲液（0.1 M KCl、1.3 mM MgCl2、0.5 mM ATP、0.5 mM β-巯基乙醇、0.2 mM CaCl2、10 mM Tris-HCl，pH 7.5）启动聚合反应。分别在12小时和24小时测量荧光强度。在带刺端延伸测定中，将预先形成的gCap39加帽的肌动蛋白种子加入到Mg2+-肌动蛋白（1.5 μM）中，并加入Tβ4（0–3.08 μM）；通过加入盐和5 mM EGTA引发聚合反应，并记录初始线性斜率。[1]
非变性凝胶电泳：使用含有25 mM Tris、0.4 M甘氨酸和0.2 mM ATP的7.5%丙烯酰胺、0.2%双丙烯酰胺凝胶。将Tβ4（0.6–1.2 μg）与兔肌肉肌动蛋白单体（2.2 μg）在G缓冲液中混合，室温孵育10分钟，然后加入含溴酚蓝的甘油，并在10°C、20–25 V/cm下进行电泳。 [1]
肌动蛋白沉降实验：将 2.6 μM 肌动蛋白（0–100% 芘标记）与 0–4 μM Tβ4 在 F 缓冲液中于室温孵育 24 小时，然后在 20 psi 的离心机中离心 30 分钟。沉淀和上清液通过 SDS-PAGE 进行分析。[1]
紫外吸收光谱：通过氨基酸分析确定 Tβ4 浓度；205 nm 处的消光系数为 350 mM⁻¹ cm⁻¹。[1]
交联：使用零长度交联剂 EDC（1-乙基-3-[3-(二甲氨基)丙基]碳二亚胺）来定位相互作用位点：Tβ4 的 Lys3 与肌动蛋白的 Glu167 交联；Lys18 与 N 端酸性残基之一 (DEDE) 交联； Lys38 通过转谷氨酰胺酶与肌动蛋白的 Gln41 交联。[2]
DNase I 抑制试验：通过测量 DNase I 活性的抑制来评估 G-肌动蛋白的结合。[2]
超滤测定 Kd 值：将 Tβ4 和 G-肌动蛋白的混合物孵育，并通过超滤分离游离肌动蛋白；定量结合的复合物。[2]
心外膜组织块培养：解剖成年小鼠心脏，剥离心外膜，切成小块，置于涂有 Matrigel 的盖玻片上，并置于培养基中。加入 Tβ4，3-5 天后观察心外膜来源细胞的生长。通过 SMαA（平滑肌）、Tie2（内皮细胞）和 I 型前胶原（成纤维细胞）的免疫染色来鉴定分化细胞。[3]
细胞实验
HL60细胞分化：DMSO处理的HL60细胞显示胸腺素β4（人、牛、马、大鼠）（CAS号：77591-33-4）mRNA水平以及β-肌动蛋白mRNA水平升高。[2]
PC12细胞：神经生长因子（NGF）或成纤维细胞生长因子（FGF）可使Tβ4 mRNA水平升高十倍。[2]
大鼠胸腺细胞刺激：伴刀豆球蛋白A可在1小时内诱导Tβ4肽水平瞬时升高六倍，而mRNA水平未升高；在S期，Tβ4水平升高2.5倍，同时伴有相应的mRNA水平升高。[2]
NIH 3T3细胞：胸腺素β10（而非Tβ4）的过表达导致肌动蛋白丝增粗、细胞运动性增强、细胞铺展速度加快以及趋化性和伤口愈合活性增强。 Tβ4 的稳定过表达导致 G-肌动蛋白和 F-肌动蛋白增加，G/F 比值不变，以及细胞骨架相关蛋白（肌球蛋白 IIA、α-辅肌动蛋白、原肌球蛋白、爪蛋白、α5-整合素、黏着斑蛋白）水平升高，而 profilin 或 ADF 水平不变。[2]
HUVEC 迁移实验：将胶原蛋白包被在聚碳酸酯膜（孔径 8 μm）的 Boyden 小室中；将 HUVEC 置于上室，下室中的 Tβ4（1–100 nM）作为趋化因子。4–6 小时后，对下室膜表面的迁移细胞进行染色和计数。Tβ4 可使定向迁移率比对照组提高 4 至 6 倍。 [3] 冠状动脉环试验：从成年大鼠心脏中分离出冠状动脉，切成 1-2 mm 的环状组织，包埋于 Matrigel 基质胶中，并在含或不含 Tβ4 (0.1 μg/ml) 的培养基中培养。7-10 天后对血管萌芽情况进行定量分析。[3] 心外膜组织块培养（详见酶活性测定）：使用针对 SMαA、Tie2、Flk1 和 I 型前胶原的抗体，通过免疫细胞化学方法对生长细胞进行表征。[3] 细胞活力/增殖：这些参考文献中未直接评估；然而，Tβ4 可刺激 Matrigel 基质胶上的内皮细胞增殖和分化。[3]
动物实验
转基因小鼠的构建：利用受floxed转录终止子控制的Tβ4特异性短发夹RNA（shRNA）构建条件性Tβ4敲低小鼠品系。将这些小鼠与Nkx2.5Cre转基因小鼠杂交，以实现心肌特异性敲除。向妊娠雌鼠腹腔注射AcSDKP（未指定剂量）以恢复敲低表型。在胚胎发育第14.5天（E14.5）收集胚胎，固定、石蜡包埋、切片，并用苏木精-伊红染色或进行免疫组织化学染色，使用针对Tie2、SMαA和其他标记物的抗体。[3]
大鼠全层皮肤伤口愈合模型：在大鼠背部制造一个6 mm的全层皮肤伤口。胸腺素β4（人、牛、马、大鼠）（CAS号：77591-33-4）可局部（凝胶或溶液）或腹腔注射（文献中未明确剂量）。伤口愈合情况在7-10天内进行评估；组织学分析评估上皮化、胶原沉积和血管生成。[2] 角膜损伤模型：小鼠角膜被磨损（碱烧伤或机械清创），局部应用Tβ4（浓度未明确）。通过荧光素染色监测角膜上皮愈合情况；通过免疫印迹或ELISA检测炎症介质（NFκB、TNF-α）。 [2]
鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM) 试验：将受精鸡卵进行孵化，在蛋壳上开窗，并将含有胸腺素β4（人、牛、马、大鼠）（CAS号：77591-33-4）（剂量未指定）的滤膜片置于CAM上。48-72小时后，通过计数血管分支或测量血管面积来量化血管生成。[2]
心肌梗死模型（本文引用但未实际操作）：成年小鼠冠状动脉结扎；Tβ4治疗（剂量未指定）通过激活Akt改善心脏功能并减少瘢痕体积。[3]
参考文献

Yuet al(1993) Thymosin u03b210 and thymosin u03b24 are both actin monomer sequestering proteins. J.Biol.Chem. 268502 PMID:8416954

Huffet al(2001) u03b2-thymosins, small acidic peptides with multiple functions. Int.J.Biochem.Cell Biol. 33205 PMID:11311852

Smartet al(2007) Thymosin u03b24 and angiogenesis: modes of action and therapeutic potential. Angiogenesis 10229 PMID:17632766

其他信息
胸腺素β4（人、牛、马、大鼠）（CAS号：77591-33-4）是一种酸性肽（等电点4.7-5.0），由43-44个氨基酸残基组成。它广泛表达于哺乳动物组织中，在血小板（200-500 μM）、多形核白细胞（269-564 fg/细胞）和单核白细胞（183-380 fg/细胞）中浓度较高；在红细胞中检测不到。该肽在水中主要呈无序结构，但在氟化醇中形成α螺旋结构（残基4-16和30-40）。它不与信号肽分离。然而，它可以分泌并存在于血浆（0.026–0.387 mg/L）和伤口渗出液（13 μM）中。N端四肽AcSDKP（N-乙酰-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸）由脯氨酰寡肽酶或AspN样蛋白酶切割产生，是造血干细胞增殖的强效抑制剂和血管生成诱导剂。AcSDKP仅由血管紧张素转换酶（ACE）降解。Tβ4亚砜（Met6位点氧化）的肌动蛋白结合亲和力降低，但可通过抑制中性粒细胞的迁移和分散发挥抗炎活性。肌动蛋白结合位点位于基序¹⁷LKKTETQEK²⁵；LKKTET序列对于肌动蛋白结合和血管生成活性是必需且充分的。 Tβ4 以延伸构象与 G-肌动蛋白结合，并与肌动蛋白的亚结构域 1、2 和 3 接触（交联：K3 与 E167，K18 与 DEDE，K38 与 Q41）。Tβ4 抑制 G-肌动蛋白上的核苷酸交换（与促进核苷酸交换的 profilin 不同）。该肽是转谷氨酰胺酶的底物（可与纤维蛋白和胶原蛋白交联）。Tβ4 的过表达与多种癌症（结直肠癌、黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌）的转移潜能增加相关。Tβ4 正在进行治疗大疱性表皮松解症和压疮的 II 期临床试验。[1][2][3]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C212H350N56O78S
分子量
4963.44085168839
CAS号
77591-33-4
PubChem CID
16132341
外观&性状
Typically exists as solid at room temperature
LogP
0
tPSA
2245.98
氢键供体(HBD)数目
72
氢键受体(HBA)数目
88
可旋转键数目(RBC)
180
重原子数目
347
分子复杂度/Complexity
12200
定义原子立体中心数目
47
SMILES
S(C)CC[C@@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(N[C@@H](CCCCN)C(N[C@@H](CC(C)C)C(N[C@@H](CCCCN)C(N[C@@H](CCCCN)C(N[C@@H]([C@@H](C)O)C(N[C@@H](CCC(=O)O)C(N[C@@H]([C@@H](C)O)C(N[C@@H](CCC(N)=O)C(N[C@@H](CCC(=O)O)C(N[C@@H](CCCCN)C(N[C@@H](CC(N)=O)C(N1CCC[C@H]1C(N[C@@H](CC(C)C)C(N1CCC[C@H]1C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(NCC(N[C@H](C(N[C@H](C(=O)O)CO)=O)CCC(=O)O)=O)=O)C)=O)CCC(N)=O)=O)CCCCN)=O)CCC(=O)O)=O)CCC(N)=O)=O)CCC(=O)O)=O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)O)=O)CCC(=O)O)=O)CCCCN)=O)CO)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)CCCCN)=O)CC(=O)O)=O)CC1C=CC=CC=1)=O)CCCCN)=O)CCC(=O)O)=O)[C@@H](C)CC)=O)CCC(=O)O)=O)C)=O)NC([C@H](CC(=O)O)NC([C@@H]1CCCN1C([C@H](CCCCN)NC([C@H](CC(=O)O)NC([C@H](CO)NC(C)=O)=O)=O)=O)=O)=O
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.2015 mL 1.0074 mL 2.0147 mL
5 mM 0.0403 mL 0.2015 mL 0.4029 mL
10 mM 0.0201 mL 0.1007 mL 0.2015 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
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计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
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计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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