Tigogenin

别名: Tigogenin; 77-60-1; (25R)-5alpha-Spirostan-3beta-ol; 5-alpha-Spirostan-3-beta-ol; (5alpha,25R)-Spirostan-3beta-ol; UNII-4SMU15RR44; 5-epi-sarsasapogenin; TICOGENIN; 剑麻皂素;剑麻皂苷元; 提果皂甙元; 替告皂甙元; 剑麻皂甙元;剑麻皂苷元对照品;(25R)-5α-螺甾(烷)-3β-醇;(3β,5α,25R)-3-羟基-螺甾(烷);剑麻皂苷元(剑麻皂甙元,剑麻皂素,惕告吉宁,替告吉宁,替柯吉宁);替柯吉宁
目录号: V34480 纯度: ≥98%
Tigogenin 是一种甾体皂苷,广泛用于甾体活性分子的制备/合成。
Tigogenin CAS号: 77-60-1
产品类别: Natural Products
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
5mg
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产品描述
Tigogenin 是一种甾体皂苷,广泛用于甾体活性分子的制备/合成。 Tigogenin 抑制脂肪细胞分化并诱导小鼠骨髓基质细胞的成骨细胞分化。
生物活性&实验参考方法
靶点
Steroidal saponin
体外研究 (In Vitro)
研究人员研究了Tigogenin对小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)脂肪细胞和成骨细胞分化的影响Tigogenin显著增强BMSCs的增殖Tigogenin治疗降低了脂质积累的脂肪生成诱导、内脂素分泌以及过氧化物酶体增殖激活受体(PPAR)γ2和脂肪细胞脂肪酸结合蛋白(ap)2的表达。此外,Tigogenin对有丝分裂克隆扩增没有影响。另一方面,tigogenin显著提高了BMSCs中碱性磷酸酶(ALP)的活性、Cbfa1、I型胶原(COL I)和骨钙素(OCN)的表达以及基质钙的含量。此外,SB-203580拮抗了虎原素促进的成骨作用。这些观察表明,虎毒原可能调节BMSCs的分化,导致谱系从脂肪细胞向成骨细胞转移,这至少是通过抑制PPARγ和p38 MAPK通路介导的,是预防骨质疏松症和相关疾病发展的潜在药物[1]。
细胞实验
原代骨髓间充质干细胞增殖和有丝分裂克隆扩增的评估[1]
将BMSCs置于96孔培养板中,培养6天Tigogenin[(25R)-5α-螺甾烷-3β-ol]用DMSO稀释以制备储备溶液(10 mmol/L),然后以10、30或90μmol/L的终浓度加入孔中。细胞孵育72小时。孵育完成后,向每个孔中加入MTT染料溶液(20μL,5 g/L,Sangon,China)。孵育4小时后,去除上清液,加入100μL DMSO以溶解MTT。在微孔板分光光度计上以570nm的波长测量每个孔的光密度。为了测定脂肪生成中的有丝分裂克隆扩增,在脂肪细胞分化的第0至第3天,用tiogenin(10、30或90μmol/L)处理BMSCs后进行MTT试验。
油红O染色和测量[1]
BMSCs在脂肪生成诱导剂和浓度为10、30或90μmol/L的Tigogenin存在下培养18天。使用油红O染色法观察BMSCs分化的脂肪细胞内的脂肪滴。将细胞单层在4%甲醛中固定20分钟,用水洗涤,并在37°C下用0.6%(w/v)油红O溶液(60%异丙醇,40%水)染色45分钟。为了定量,然后用水广泛洗涤细胞单层以去除未结合的染料,然后向染色的培养板中加入1ml异丙醇。5分钟后,用分光光度计在510nm处测定提取物的吸光度。油红O染色的定量标准化为细胞数。
分泌性内脂素蛋白的ELISA检测[1]
在用脂肪生成补充剂和Tigogenin(10、30或90μmol/L)处理18天后,收集BMSCs的培养基。根据试剂盒的用户手册,使用EIA试剂盒测定培养基中细胞外内脂素蛋白的水平。
碱性磷酸酶(ALP)活性测定[1]
BMSCs增殖至融合,2天后,细胞分别用10、30和90μmol/L的Tigogenin处理5天,然后用冰冷的PBS洗涤细胞两次,并通过两个冻融循环裂解。分别使用ALP检测试剂盒和微型Bradford检测试剂盒对上清液的等分试样进行ALP活性和蛋白质含量测量。在探索信号通路的实验中,细胞用50μmol/L的ERK1/2通路抑制剂PD-98059或10μmol/L的p38 MAPK通路抑制剂SB-203580预处理60分钟,然后用30μmol/L的tigogenin刺激5天。收集细胞并测定ALP活性。 蛋白质印迹分析[1]
在脂肪生成诱导的第5天,用Tigogenin(30μmol/L)处理的BMSC用NETN缓冲液(20 mM Tris-HCl,pH 7.8,1 mM EDTA,50 mM氯化钠和0.5%NP-40)裂解,裂解物在4°C下以12000 rpm离心10分钟。收集上清液,用BCA检测试剂盒测定蛋白质浓度。根据制造商的方案进行蛋白质印迹分析。使用了针对PPARγ、COL I、β-肌动蛋白、磷酸化p38和非磷酸化p38的抗体。用辣根过氧化物酶偶联的二抗和增强的化学发光显示蛋白质表达。
基质钙沉积的定量[1]
用不同浓度的Tigogenin处理BMSCs,培养持续18天。钙化通过之前描述的方法(Wada等人,1999)进行评估,并进行了修改。简而言之,用0.6 mol/L HCl将BMSCs脱钙24小时,并使用钙C-测试Wako试剂盒测定上清液中的钙含量。脱钙后,用PBS洗涤细胞三次,并用0.1mol/L NaOH/0.1%SDS溶解。通过BCA检测试剂盒测定总蛋白浓度。细胞的钙含量被标准化为蛋白质含量。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
大鼠腹腔注射 10 mg/kg LDLo 动物和植物源毒素,第二届国际研讨会论文集,1970 年,de Vries A. 和 E. Kochva 编辑,3 卷,纽约,Gordon and Breach Science Pub.,1971-73 年,2(597),1972 年
参考文献

[1]. Tigogenin inhibits adipocytic differentiation and induces osteoblastic differentiation in mouse bone marrow stromal cells. Mol Cell Endocrinol. 2007 May 30;270(1-2):17-22.

其他信息
替戈苷元是一种广泛使用的甾体皂苷元,从多种植物中分离得到,用于合成甾体类药物。它具有抑制痛风的作用,也是一种植物代谢产物。
据报道,替戈苷元存在于单花伊菲翁(Ipheion uniflorum)、胡芦巴(Trigonella foenum-graecum)和其他一些有相关数据的生物体中。
为了探究替戈苷元是否对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的成骨作用产生相应影响,我们检测了暴露于替戈苷元的BMSCs的碱性磷酸酶(ALP)活性、Cbfa1、I型胶原(COL I)和骨钙素(OCN)的表达水平以及基质钙含量。我们曾在之前的研究中比较过在有或无替戈宁的情况下,成骨诱导剂对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨能力的影响,发现替戈宁处理并未显著促进成骨诱导剂诱导的BMSCs的成骨作用,而单独使用替戈宁处理则可使BMSCs的成骨作用略有但显著增强。我们推测,成骨诱导剂对BMSCs成骨作用的强效作用可能掩盖了替戈宁的微弱作用。因此,在本研究中,我们采用了未添加成骨诱导剂的BMSCs。结果发现,在替戈宁存在的情况下,碱性磷酸酶(ALP)活性显著升高。同样,其他成骨细胞表型(如Cbfa1、COL I和OCN)的mRNA表达水平在添加替戈宁后也升高。这些成骨细胞分化的结果表明,替戈宁无需添加任何成骨因子即可诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为成骨细胞谱系,尽管其效果似乎较为温和。替戈宁能轻微但显著地增加BMSCs的基质钙沉积,进一步强化了这一结论。为了阐明替戈宁刺激作用的机制,我们评估了MAPK在介导细胞对替戈宁反应中的作用。已有报道指出,ERK1/2和p38这两条关键的MAPK通路对于骨细胞的成骨分化至关重要(Lai et al., 2001; Lai and Cheng, 2002; Chen et al., 2004)。在本研究中,p38通路特异性抑制剂SB-203580显著阻断了替戈宁对骨髓间充质干细胞(BMSCs)碱性磷酸酶(ALP)活性的刺激作用,而ERK1/2抑制剂PD-98059对这种促进作用几乎没有影响。此外,我们发现替戈宁处理的BMSCs中磷酸化p38蛋白的含量增加。因此,提示替戈宁促进成骨细胞分化的作用至少部分是通过p38 MAPK通路介导的。以上结果表明,替戈宁对BMSCs具有双重作用,既抑制脂肪细胞分化,又促进成骨细胞分化。替戈宁促进BMSCs增殖这一事实进一步证实了上述结果。综上所述,我们的研究结果表明,替戈宁可能对骨骼具有保护作用,可通过抑制脂肪细胞形成和刺激骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞,帮助预防骨质疏松症的发生。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C27H44O3
分子量
416.6365
精确质量
416.329
CAS号
77-60-1
PubChem CID
99516
外观&性状
White to off-white solid
密度
1.1±0.1 g/cm3
沸点
516.6±20.0 °C at 760 mmHg
熔点
202-204ºC
闪点
266.2±21.8 °C
蒸汽压
0.0±3.0 mmHg at 25°C
折射率
1.552
LogP
6.21
tPSA
38.69
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
3
可旋转键数目(RBC)
0
重原子数目
30
分子复杂度/Complexity
694
定义原子立体中心数目
12
SMILES
O1[C@]2(C([H])([H])C([H])([H])[C@@]([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])O2)[C@@]([H])(C([H])([H])[H])[C@@]2([H])[C@]1([H])C([H])([H])[C@@]1([H])[C@]3([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]4([H])C([H])([H])[C@]([H])(C([H])([H])C([H])([H])[C@]4(C([H])([H])[H])[C@@]3([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]12C([H])([H])[H])O[H]
InChi Key
GMBQZIIUCVWOCD-MFRNJXNGSA-N
InChi Code
InChI=1S/C27H44O3/c1-16-7-12-27(29-15-16)17(2)24-23(30-27)14-22-20-6-5-18-13-19(28)8-10-25(18,3)21(20)9-11-26(22,24)4/h16-24,28H,5-15H2,1-4H3/t16-,17+,18+,19+,20-,21+,22+,23+,24+,25+,26+,27-/m1/s1
化学名
(1R,2S,4S,5'R,6R,7S,8R,9S,12S,13S,16S,18S)-5',7,9,13-tetramethylspiro[5-oxapentacyclo[10.8.0.02,9.04,8.013,18]icosane-6,2'-oxane]-16-ol
别名
Tigogenin; 77-60-1; (25R)-5alpha-Spirostan-3beta-ol; 5-alpha-Spirostan-3-beta-ol; (5alpha,25R)-Spirostan-3beta-ol; UNII-4SMU15RR44; 5-epi-sarsasapogenin; TICOGENIN;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
Ethanol : ~14.29 mg/mL (~34.30 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.4002 mL 12.0008 mL 24.0015 mL
5 mM 0.4800 mL 2.4002 mL 4.8003 mL
10 mM 0.2400 mL 1.2001 mL 2.4002 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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