Tris-NTA

目录号: V47669 纯度: ≥98%
Tris-NTA 是一种 His 标记蛋白配体,可用于结合 His 标记蛋白。
Tris-NTA CAS号: 862778-60-7
产品类别: New3
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
10mg
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Other Forms of Tris-NTA:

  • (Rac)-Tris-NTA
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InvivoChem产品被CNS等顶刊论文引用
产品描述
Tris-NTA 是一种 His 标签蛋白配体,可用于结合 His 标签蛋白。
Tris-NTA (862778-60-7) 是一种高亲和力金属螯合剂,由三个次氮基三乙酸 (NTA) 基团通过三羟甲基氨基甲烷 (Tris) 骨架连接而成。它是一种组氨酸标签蛋白配体,能够以远高于标准 Ni-NTA 的亲和力结合多组氨酸 (His) 标签蛋白,从而实现重组蛋白的纯化和固定。
生物活性&实验参考方法
靶点
Target: His-tagged proteins (polyhistidine tag, typically 6xHis or 10xHis). Tris-NTA contains three NTA groups that coordinate Ni2+ ions. When Ni2+ is loaded, Tris-NTA forms a trivalent chelating platform that interacts with the His-tag on recombinant proteins with dramatically increased avidity (picomolar KD) compared to monovalent NTA (micromolar KD). This enables purification, immobilization, and detection of His-tagged proteins.
体外研究 (In Vitro)
His标签蛋白可与His标签蛋白配体Tris-NTA结合[1][2]。
在体外,Tris-NTA 是一种组氨酸标签蛋白配体,用于结合和捕获细胞裂解液或条件培养基中的组氨酸标签蛋白。该化合物可用于亲和层析、蛋白下拉实验、表面等离子共振 (SPR) 生物传感器和蛋白标记。与单价 Ni-NTA(KD 值约为 10-20 uM)相比,Tris-NTA 对组氨酸标签蛋白的亲和力和选择性显著提高(KD 值在皮摩尔范围内)。目前尚未报道其具有直接的药理活性。
体内研究 (In Vivo)
尚未进行Tris-NTA的体内研究。该化合物不适用于体内给药;它是一种用于体外蛋白质纯化和分析的生化试剂。它仅用于实验室蛋白质生物化学和分子生物学研究。尚未有动物研究的报道。
酶活实验
对于无细胞检测(蛋白质纯化):将 Tris-NTA 树脂或磁珠与裂解缓冲液(50 mM Tris-HCl,pH 8.0,300 mM NaCl,10 mM 咪唑,0.1% Triton X-100)平衡。将含有 His 标签蛋白的细胞裂解液加入树脂中,并在 4℃ 下旋转孵育 30-60 分钟。用洗涤缓冲液(20-40 mM 咪唑)洗涤磁珠以去除非特异性结合的蛋白质。用洗脱缓冲液(250-500 mM 咪唑,pH 8.0)洗脱结合的蛋白质。通过 SDS-PAGE 和 Western blot 分析纯化的组分。对于 SPR 固定化:将 Tris-NTA 通过巯基固定在金传感器芯片上,负载 Ni2⁺,用于捕获 His 标签蛋白进行动力学分析。
细胞实验
Tris-NTA试剂不用于任何基于细胞的检测。该试剂用于从细胞裂解液中纯化蛋白质,而非直接添加到活细胞中。使用Tris-NTA纯化的His标签蛋白可以随后添加到细胞中进行功能研究,但Tris-NTA试剂本身不用于基于细胞的检测。
动物实验
Tris-NTA未进行任何动物实验。该化合物仅用于体外蛋白质生物化学研究,不用于动物疗效或安全性研究,其用途仅限于实验室实验。
药代性质 (ADME/PK)
由于Tris-NTA并非候选药物,且不用于全身给药,因此其药代动力学特性不适用。它是一种体外研究试剂。尚未进行吸收、分布、代谢或排泄研究。该化合物仅供研究使用。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
目前尚无Tris-NTA的毒性数据。作为一种用于蛋白质纯化的生化试剂,它不适用于人类食用。该化合物含有NTA基团,可螯合金属离子,摄入后可能具有轻微毒性。然而,尚未进行正式的毒性研究。该化合物仅供研究使用,操作时应采取适当的实验室安全防护措施。
参考文献

[1]. Identifying and quantifying two ligand-binding sites while imaging native human membrane receptors by AFM. Nat Commun. 2015 Nov 12;6:8857.

[2]. Rapid and regenerable surface plasmon resonance determinations of biomarker concentration and biomolecular interaction based on tris-nitrilotriacetic acid chips. Anal Chim Acta. 2021 Jul 25;1170:338625.

其他信息
Tris-NTA是一种研究试剂,而非药物。它未获得FDA批准用于临床。Tris-NTA广泛应用于分子生物学、蛋白质生物化学和生物物理学领域,用于纯化、固定和分析His标签重组蛋白。其应用包括亲和层析、蛋白质相互作用研究(SPR、BLI)、蛋白质标记(荧光标签)和生物传感器开发。高亲和力的Tris-NTA平台即使在复杂的生物样品中也能实现对His标签蛋白的稳健而灵敏的检测。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C43H68N8O22
分子量
1049.04043292999
精确质量
1048.44
CAS号
862778-60-7
相关CAS号
(Rac)-Tris-NTA;1146592-99-5
PubChem CID
124202503
外观&性状
White to light yellow solid powder
LogP
-12.9
tPSA
452.68
氢键供体(HBD)数目
10
氢键受体(HBA)数目
26
可旋转键数目(RBC)
32
重原子数目
73
分子复杂度/Complexity
1910
定义原子立体中心数目
3
SMILES
C1CN(CCN(CCCN(CCN(C1)C(=O)CC[C@@H](C(=O)O)N(CC(=O)O)CC(=O)O)C(=O)CC[C@@H](C(=O)O)N(CC(=O)O)CC(=O)O)C(=O)CC[C@@H](C(=O)O)N(CC(=O)O)CC(=O)O)C(=O)CCCCCN
InChi Key
SRHQOOQNBLZULK-DTXPUJKBSA-N
InChi Code
InChI=1S/C43H68N8O22/c44-13-3-1-2-6-31(52)45-14-4-15-47(33(54)11-8-29(42(70)71)50(24-37(60)61)25-38(62)63)20-21-48(34(55)12-9-30(43(72)73)51(26-39(64)65)27-40(66)67)17-5-16-46(19-18-45)32(53)10-7-28(41(68)69)49(22-35(56)57)23-36(58)59/h28-30H,1-27,44H2,(H,56,57)(H,58,59)(H,60,61)(H,62,63)(H,64,65)(H,66,67)(H,68,69)(H,70,71)(H,72,73)/t28-,29-,30-/m0/s1
化学名
(2S)-5-[11-(6-aminohexanoyl)-4,8-bis[(4S)-4-[bis(carboxymethyl)amino]-4-carboxybutanoyl]-1,4,8,11-tetrazacyclotetradec-1-yl]-2-[bis(carboxymethyl)amino]-5-oxopentanoic acid
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~50 mg/mL (~47.66 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.9533 mL 4.7663 mL 9.5325 mL
5 mM 0.1907 mL 0.9533 mL 1.9065 mL
10 mM 0.0953 mL 0.4766 mL 0.9533 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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