WIKI4

别名: WIKI4; WIKI 4; WIKI-4

2-[3-[[4-(4-甲氧基苯基)-5-(4-吡啶基)-4H-1,2,4-三唑-3-基]硫基]丙基]-1H-苯并[DE]异喹啉-1,3(2H)-二酮

目录号: V1357 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

WIKI4（WIKI 4；WIKI-4）是一种新型、有效的端锚聚合酶抑制剂，具有潜在的抗癌活性。

WIKI4 CAS号: 838818-26-1
产品类别: Wntbeta-catenin

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

纯度/质量控制文件

批次：

纯度: ≥98%

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产品说明书

产品描述
生物活性&实验参考方法
化学信息
溶解度数据
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产品描述

WIKI4（WIKI 4；WIKI-4）是一种新型、有效的端锚聚合酶抑制剂，具有潜在的抗癌活性。它抑制 Wnt/β-catenin 信号通路中的 Tankyrase2 (TNKS2)，IC50 为 15 nM。

生物活性&实验参考方法

靶点	WIKI4 is a selective inhibitor of tankyrase 1 (TNKS1) and tankyrase 2 (TNKS2) (TNKS1 IC50 = 49 nM; TNKS2 IC50 = 45 nM) [2] WIKI4 shows no significant inhibition of other poly(ADP-ribose) polymerases (PARP1, PARP2: IC50 > 10 μM) [2]
体外研究 (In Vitro)	与 DMSO 对照相比，WIKI4（100 nM，1 μM；6 天）可减少低血清培养基中 DLD1 细胞的增殖。 WIKI4 可抑制 β-catenin 靶向基因的表达以及细胞对 Wnt/β-catenin 信号传导的反应 [1]。 WIKI4（1 μM；2 小时、4 小时、6 或 24 小时；DLD1 细胞）显着增加 AXIN1 和 AXIN2 的稳态丰度 [1]。在重组TNKS1/TNKS2酶活性实验中，WIKI4 剂量依赖性抑制ADP-核糖基化活性，200 nM浓度下对TNKS1的抑制率为70%，对TNKS2为72%。它阻断TNKS介导的AXIN降解，进而抑制经典Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路 [2] - 在转染Wnt响应性荧光素酶报告质粒的HEK293细胞中，WIKI4（5 μM）处理24小时后，降低Wnt3a诱导的荧光素酶活性80%。它在mRNA水平下调Wnt靶基因（AXIN2降低63%；LEF1降低59%）[2] - 在人间充质干细胞（hMSCs）中，WIKI4（2 μM）培养14天后诱导肌源性谱系分化。它在mRNA水平上调肌源性标志物（MyoD：3.1倍；肌细胞生成素（Myogenin）：2.8倍；肌球蛋白重链（MHC）：2.5倍），并使MHC阳性细胞比例从对照组的5%提升至42%（免疫荧光染色）[1] - 在正常hMSCs和HEK293细胞中，WIKI4 在浓度高达20 μM时毒性较低（细胞活力较对照组>85%）[1][2]
体内研究 (In Vivo)	在大鼠心肌梗死（MI）模型中，腹腔注射 WIKI4（10 mg/kg/天，持续4周，MI后24小时开始给药）改善心功能。左心室射血分数（LVEF）从溶媒组的32%提升至58%，左心室舒张末期容积（LVEDV）降低35%。心肌梗死面积减少48%，梗死边缘区MHC阳性肌源性细胞数量增加3.2倍 [1] - WIKI4 促进大鼠MI心脏内源性间充质干细胞向肌源性分化，心脏组织中MyoD和Myogenin表达上调（Western blot和免疫组织化学检测）[1]
酶活实验	TNKS1/TNKS2 ADP-核糖基化实验：将纯化的重组人TNKS1或TNKS2与组蛋白H1（底物）和 WIKI4（1 nM-1 μM）在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.2 mM NAD⁺）中于37°C孵育60分钟。使用多聚ADP核糖特异性抗体通过Western blot检测ADP-核糖基化底物，从剂量-效应曲线计算IC50值 [2] - PARP选择性实验：在与TNKS实验相同的缓冲液和底物中，将 WIKI4（10 μM）对PARP1和PARP2进行筛选。通过光密度分析量化ADP-核糖基化活性，未观察到对PARP1或PARP2的显著抑制（活性降低>50%）[2]
细胞实验	细胞活力测定[1] 细胞类型： DLD1 细胞测试浓度： 100 nM、1 μM 孵育时间：6天实验结果：抑制DLD1细胞的生长。蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： DLD1 细胞测试浓度： 1 μM 孵育时间：2小时、4小时、6小时或24小时实验结果：显着增加了稳态丰度AXIN1 和 AXIN2。 hMSC肌源性分化实验：人间充质干细胞以2×10⁴个/孔接种到6孔板中，在含有 WIKI4（0.5-5 μM）的肌源性诱导培养基中培养，每3天更换一次培养基。14天后，固定细胞进行MHC免疫荧光染色以量化肌源性细胞；提取总RNA，qPCR分析MyoD、Myogenin和MHC的mRNA水平 [1] - Wnt报告基因实验：HEK293细胞以5×10³个/孔接种到96孔板中，转染β-catenin响应性荧光素酶质粒和海肾荧光素酶质粒（内参）。24小时后，用 WIKI4（0.1-10 μM）预处理细胞1小时，再用Wnt3a（50 ng/mL）刺激24小时。双荧光素酶检测系统测量荧光素酶活性 [2] - Wnt靶基因表达实验：HEK293细胞以2×10⁵个/孔接种到6孔板中，用 WIKI4（5 μM）预处理1小时，再用Wnt3a（50 ng/mL）刺激24小时。qPCR检测AXIN2和LEF1的mRNA水平 [2] - 细胞活力实验：hMSCs和HEK293细胞以3×10³个/孔接种到96孔板中，用 WIKI4（0.1-50 μM）处理72小时。CCK-8法评估细胞活力 [1][2]
动物实验	Rat myocardial infarction (MI) model: Adult male Sprague-Dawley rats were subjected to left anterior descending coronary artery ligation to induce MI. Twenty-four hours post-surgery, WIKI4 was dissolved in DMSO and diluted with saline (final DMSO concentration ≤5%) and administered intraperitoneally at 10 mg/kg/day for 4 weeks. Vehicle group received DMSO/saline mixture. Cardiac function (LVEF, LVEDV) was evaluated by echocardiography at 4 weeks. Rats were euthanized, and heart tissues were collected for infarct size measurement (TTC staining), immunohistochemistry (MHC, MyoD), and Western blot analysis [1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)	In vitro, WIKI4 shows low toxicity to normal hMSCs and HEK293 cells (IC50 > 20 μM; cell viability > 85% at 20 μM) [1][2] - In in vivo studies, intraperitoneal administration of WIKI4 (10 mg/kg/day for 4 weeks) causes no significant body weight loss (<5% vs. baseline) or overt lethality in rats [1] - No significant changes in liver function (ALT, AST) or renal function (creatinine, BUN) were observed in WIKI4-treated rats compared to vehicle controls [1]
参考文献	[1]. Wnt / β-catenin Inhibitor Differentiates Human Mesenchymal Stem Cells into Myogenic Lineage in vitro and Improved Cardiac Function in vivo in Rat Model of Myocardial Infarction. Circulation Research. 2019;125:A412. [2]. WIKI4, a novel inhibitor of tankyrase and Wnt/ß-catenin signaling. PLoS One. 2012;7(12):e50457.
其他信息	WIKI4 is a selective small-molecule inhibitor of tankyrase 1 and 2 (TNKS1/2), a key modulator of the canonical Wnt/β-catenin signaling pathway [2] - Its mechanism of action involves binding to TNKS1/2, inhibiting their ADP-ribosylation activity, stabilizing AXIN proteins, and promoting β-catenin degradation, thereby blocking Wnt-mediated transcriptional activation [2] - WIKI4 exhibits in vitro efficacy in inducing myogenic differentiation of human mesenchymal stem cells and in vivo therapeutic effects in a rat myocardial infarction model by improving cardiac function and reducing infarct size [1] - It is widely used as a tool compound to study Wnt/β-catenin signaling in stem cell differentiation, tissue repair, and cardiovascular disease research [1][2] - WIKI4 provides a potential therapeutic strategy for myocardial infarction by promoting myogenic differentiation of endogenous stem cells [1]

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式

C29H23N5O3S

分子量

521.59

精确质量

521.152

CAS号

838818-26-1

相关CAS号

838818-26-1

PubChem CID

2984337

外观&性状

Off-white to light yellow solid powder

密度

1.4±0.1 g/cm3

沸点

783.1±70.0 °C at 760 mmHg

闪点

427.4±35.7 °C

蒸汽压

0.0±2.7 mmHg at 25°C

折射率

1.716

LogP

5.2

tPSA

117.2

氢键供体(HBD)数目

氢键受体(HBA)数目

可旋转键数目(RBC)

重原子数目

分子复杂度/Complexity

803

定义原子立体中心数目

SMILES

O=C1N(CCCSC2N(C3C=CC(OC)=CC=3)C(C3C=CN=CC=3)=NN=2)C(=O)C2C3C(C=CC=2)=CC=CC1=3

InChi Key

RNUXIZKXJOGYQP-UHFFFAOYSA-N

InChi Code

InChI=1S/C29H23N5O3S/c1-37-22-11-9-21(10-12-22)34-26(20-13-15-30-16-14-20)31-32-29(34)38-18-4-17-33-27(35)23-7-2-5-19-6-3-8-24(25(19)23)28(33)36/h2-3,5-16H,4,17-18H2,1H3

化学名

2-(3-((4-(4-methoxyphenyl)-5-(pyridin-4-yl)-4H-1,2,4-triazol-3-yl)thio)propyl)-1H-benzo[de]isoquinoline-1,3(2H)-dione

别名

WIKI4; WIKI 4; WIKI-4

HS Tariff Code

2934.99.9001

存储方式

Powder -20°C 3 years

4°C 2 years

In solvent -80°C 6 months

-20°C 1 month

运输条件

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)

DMSO:7 mg/mL (13.4 mM)

Water:<1 mg/mL

Ethanol:<1 mg/mL

溶解度 (体内实验)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	1.9172 mL	9.5861 mL	19.1721 mL
	5 mM	0.3834 mL	1.9172 mL	3.8344 mL
	10 mM	0.1917 mL	0.9586 mL	1.9172 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片

WIKI4 is identified as a novel small molecule inhibitor of the Wnt/ß-catenin pathway. (A) Scatter plot of a small molecule screen in human A375 melanoma cells stably expressing the ß-catenin Activated Reporter (BAR) driving firefly luciferase with each dot representing a single compound. The red dots represent compounds that exhibited decreased luciferase signal (> two standard deviations below the sample mean), and unchanged cell viability as measured by resazurin. (B) A heat map showing the effects of five Wnt/ß-catenin inhibitors on reporters for the Wnt/ß-catenin, Nuclear Factor Kappa B (NF-kB), Retinoic Acid (RA), and Transforming Growth Factor ß (TGFB) pathways. WIKI4 (arrow) is the only compound that specifically inhibits Wnt/ß-catenin signaling. (C) Chemical structure of WIKI4 (left) and XAV-939 (right). (D) Dose response curves showing that WIKI4 inhibits ß-catenin reporter activity in DLD1 colorectal carcinoma cells and Wnt-stimulated A375 melanoma cells. (E) Inhibition of the expression of the ß-catenin target genes AXIN2 and TNFRSF19 by WIKI4 as assessed by quantitative PCR. DLD cells were transfected with CTNNB1 siRNA as a control 72 hours prior to harvesting for RNA; cells were treated with compounds or DMSO for 16 hours prior to harvesting. The experiments in (D) and (E) are representative of three independent experiments and the error bars represent standard deviation from four technical replicates. PLoS One. 2012;7(12):e50457.

WIKI4 inhibits the functional outcomes of Wnt/ß-catenin signaling. (A) WIKI4 inhibits colony formation of DLD1 colorectal cancer cells. DLD1 cells were plated individually in 0.5% serum containing medium, and treated with the indicated concentrations of WIKI4 and XAV-939. This experiment is representative of three independent experiments and the error bars represent standard deviation of three technical replicates. (B-F) WIKI4 prevents Wnt3A-dependent differentiation of H1 human embryonic stem cells (hESCs). (B) Culturing hESCs for six days with Wnt3A causes marked morphological changes that are rescued by treatment with WIKI4. Scalebar = 500 µm. (C) Treatment with WIKI4 prevents the decrease in co-expression of markers of undifferentiated hESCs following Wnt3A stimulus. hESCs were stimulated with the indicated treatments and expression of GCTM2 and CD9 was assessed by flow cytometry following six days of treatment. (D-F) The effect of WIKI4 treatment on the expression of genes that are altered during Wnt3A-dependent differentiation of hESCs was assessed by qPCR. hESCs were treated for the indicated conditions for six days, and then analyzed by qPCR for markers of undifferentiated stem cells (NANOG, POU5F1) (D), endoderm (SOX17, GATA6) (E), and mesoderm (T, KDR) (F). The data was normalized to 100,000 copies of GAPDH and plotted as a ratio to the untreated hESCs (cultured in KSR media). The data in the experiments presented in B-F are representative of three independent experiments and the error represents standard deviation of technical replicates. In B-F, LCM = control L cell CM, WNT3A = Wnt3a CM; both 50% (vol/vol) in KSR medium. PLoS One. 2012;7(12):e50457.

WIKI4 increases the steady-state abundance of the Wnt/ß-catenin inhibitory protein, AXIN1. (A) WIKI4 prevents degradation of AXIN1 following stimulation with Wnt3A. A375 melanoma cells were stimulated with 10% (vol/vol) Wnt3A CM for the indicated time periods with or without WIKI4 treatment, lysed and analyzed by western blot using the indicated antibodies. (B) WIKI4 increases the steady-state abundance of AXIN1 and AXIN2 protein. DLD1 colorectal carcinoma cells were incubated with DMSO, WIKI4 or XAV-939 for the indicated times, lysed and analyzed by western blot. (C) WIKI4 does not significantly affect the steady-state RNA abundance of AXIN1. DLD1 colorectal carcinoma cells were incubated with WIK4 for the indicated times, and processed for qPCR to assess changes in the steady-state abundance of AXIN1 transcript. This data is representative of two independent experiments and the error bars represent standard deviation. (D) WIKI4-dependent increases in AXIN1 protein abundance can be maintained by treatment with a proteasome inhibitor. DLD1 colorectal carcinoma cells were treated overnight with WIKI4, and after washing were then incubated for two hours with DMSO (D), WIKI4 (W), or the proteasome inhibitor MG132 (M). The cells were lysed and analyzed by western blotting for the indicated antibodies. PLoS One. 2012;7(12):e50457.