2'-Fucosyllactose (2'-FL)   中文名称: 2'-岩藻糖基乳糖

Target: IFN-γ, IL-6, IL-17, and TNF-α[1]

在 T84 细胞中，2'-岩藻糖基乳糖（2'-FL；0–12 mg/mL；48 小时）可减弱 LPS (100 μg/mL) 并刺激 IL-8 分泌，同时抑制细胞相关的 CD14 表达[1]。在 T84 和 HCT8 细胞中，2'-岩藻糖基乳糖（2 mg/mL；48 小时）可减少细菌入侵引起的炎症。抑制 ETEC 侵袭和减少随后的 IL-8 释放是 2'-岩藻糖基乳糖的两个作用[1]。在 T84 和 HCT8 细胞中，2'-岩藻糖基乳糖（2 mg/mL；48 小时）可激活巨噬细胞迁移抑制因子的信号通路，从而减少炎症[1]。

---

2′-FL/2′-岩藻糖基乳糖抑制CD14表达[1]
LPS在UPEC侵入膀胱上皮和ETEC侵入T84细胞期间介导促炎信号传导（未显示）。LPS在100 μg/mL引发T84细胞显著释放IL-8（见在线补充图S5），HMOS减弱了这种诱导作用（图1A）。在这个更简单的简化模型中，分别测试了2′-FL/2′-岩藻糖基乳糖、3-FL、6′-SL、3′-SL，LNFP I和TFiLNO（图1B）在母乳中的浓度对减轻炎症的能力（图1C）。只有2′-FL抑制了LPS诱导的T84细胞中IL-8水平的诱导（图1B）。 At 2 mg/mL，2′-FL使LPS处理的T84细胞中诱导的IL-8分泌降低了45%，与5 mg/mL HMOS（图1B）。2′-FL的抑制作用呈剂量依赖性（图1D，E），4μmol/L对IL-8诱导的抑制作用达到80%时趋于平稳 mg/mL 2′-FL（图1E）。细胞松弛素D抑制ETEC用于侵袭的T84细胞中的细胞内肌动蛋白机制。孵化2 μM细胞松弛素D在2′-FL存在或不存在的情况下均不影响IL-8的基础表达（图1F，第5和第6条）。ETEC感染前T84细胞的细胞松弛素D预处理降低了暴露于ETEC后IL-8的诱导（图1F，第3条和第7条）。2′-FL无法抑制残留的IL-8表达（图1F，第7条和第8条），表明2′-FL仅抑制ETEC侵袭特异性诱导的IL-8。

---

2′-FL/2′-岩藻糖基乳糖改善细菌入侵引起的炎症[1]
与上述对LPS的影响一致，2 mg/mL 2′-FL/2′-岩藻糖基乳糖抑制了T84细胞中ETEC的侵袭，并抑制了相关的IL-8诱导（图3A），与5 mg/mL HMOS见在线补充图S1。为了确保2′-FL显示的抑制作用对T84细胞系不是特异性的，在HCT8细胞中测试了2′-FL活性，HCT8细胞是一种对ETEC侵袭特别敏感的IEC人回肠细胞系。在这些HCT8细胞中，预处理48 h，2′-FL为2 mg/mL抑制ETEC侵袭并减弱随后的IL-8分泌（图3B）。
为了测试上述观察结果是否适用于其他1型菌毛生物，在另外两种1型菌皮大肠杆菌AIEC（LF82菌株）和UPEC（CF073菌株）中测试了2′-FL抑制炎症信号传导的能力。作为对照，我们测试了2′-FL在鼠伤寒沙门氏菌（SL1344菌株）侵袭T84时的活性，该菌株的侵袭独立于1型菌毛，而需要III型分泌系统或拉链样或触发器样进入过程。2′-FL分别抑制AIEC和UPEC侵袭T84细胞约50%（图3C，D），抑制IL-8产生约25%和约40%（未显示）。尽管SL1344的侵袭受到总HMOS的抑制，但2′-FL没有抑制（图3E）。这表明2′-FL以外的HMOS成分可能抑制其他发病机制，但2′-FL特异性抑制1型菌毛发病。

---

2′-FL/2′-岩藻糖基乳糖诱导巨噬细胞移动抑制因子信号通路，抑制炎症[1]
在T84细胞中研究了与2′-FL诱导的CD14表达变化相关的细胞内信号传导的变化。通过512种信号蛋白抗体阵列测量信号分子。使用GenePix Pro阵列分析软件分析Cy5/Cy3荧光信号比。根据统计显著性，将筛选标准设置为>1.3或<0.77的内部归一化比率，并对多重比较进行校正。
根据这些标准，2′-FL/2′-岩藻糖基乳糖处理细胞显著调节了28个信号分子（表1）。使用Metacore（GeneGo，http://trials.genego.com).巨噬细胞移动抑制因子（MIF）炎症信号网络的亚群表现出2′-FL诱导的变化，与2′-FL诱导的抗炎结果相匹配（见在线补充图S6）。2′-FL处理诱导的抗体微阵列配体的这些变化通过LPS/TLR4信号通路介质的蛋白质印迹得到证实：2′-FL抑制CD14和NF-κB的表达，同时诱导NF-κB信号通路的负调节因子iκB的表达式（图4A）。TLR4和MyD88的表达没有变化（图4A）。Erk磷酸化减少，而p38和Akt磷酸化增加（图4A）。在细胞因子信号传导抑制剂（SOCSs）中，2′-FL增加了SOCS2的表达，但没有增加SOCS1或SOCS3的表达（图4A）。2′-FL增加了信号转导子和转录激活子3（STAT3）的磷酸化（激活），STAT3是几个SOCS通路共享的下游信号分子，但STAT1没有（图4A）。图4B显示了所有测量的信号分子的蛋白质印迹强度的变化。在H4细胞（未成熟肠上皮细胞模型）中，2′-FL调节了类似的信号分子：CD14和NF-κB的诱导受到抑制，而iκB和SOCS2的表达以及STAT3的磷酸化被诱导（图4C）。因此，2′-FL在未成熟和成熟肠上皮细胞模型中调节了相同的信号通路。

2'-岩藻糖基乳糖（2'-FL；100 mg（200 μL）；ig；每天，持续 4 天；患有 AIEC 感染的 C57BL/6 小鼠）可减少体内炎症和 AIEC 感染[1]。

---

2'-FL/2'-岩藻糖基乳糖抑制体内AIEC感染和炎症[1]
在第4天用0.25%DSS（低剂量）和链霉素治疗三天会破坏小鼠的微生物群。第5天接种AIEC导致明显感染，表现为AIEC后3天和4天体重减轻（约10%）<接种前4天每天一次强饲>2'-岩藻糖基乳糖/2′-FL可防止体重减轻（图5A）。AIEC感染的小鼠结肠缩短，但用2′-FL预处理的AIEC接种小鼠的结肠长度更接近正常（图5B）。针对O83抗原的抗体（在LPS阳性的AIEC LF82上表达）显示，2′-FL预处理组的定植较少（图5C）。来自新鲜粪便（未显示）和结肠的培养物证实，接种AIEC的2′-FL预处理组小鼠的菌落较少（图5D）。2′-FL处理的小鼠结肠隐窝中AIEC诱导的CD14表达较少（图5E），粘膜肌层中CD14阳性细胞较少（未显示），CD14 mRNA水平较低（图5F）。AIEC感染小鼠结肠组织的H&E染色显示上皮细胞脱落、免疫细胞浸润和肌层粘膜增生，而2′-FL预处理小鼠的结肠显示出较少的炎症表现（见在线补充图S7）。AIEC感染伴随着小鼠黏膜主要炎性细胞因子IL-6、IL-17和TNF-α的升高，2′-FL预处理抑制了这种诱导（图5G）。AIEC感染和2′-FL均未对IL-1β、IFN-γ和IL-10产生显著影响（未显示）。

体外LPS刺激[1]
IEC在24孔板中以每孔5×104个细胞（亚融合）的速度培养48 h在500 μL培养基含有接近生理水平的HMOS（HMOS，5 mg/mL；2'-岩藻糖基乳糖/2′-FL，2 mg/mL；3-FL，0.4 mg/mL；6′-SL，0.5 mg/mL；3′-SL，0.5 mg/mL；LNFP I，2.5 mg/mL；TFiLNO，3 pg/mL），然后LPS（大肠杆菌）刺激（T84细胞100 μg/mL；H4电池200 ng/mL）持续16分钟 h.上清液在-20°C下储存，直至分析。

---

细胞松弛素D[1]抑制ETEC感染
细胞松弛素D是一种肌动蛋白聚合抑制剂，可灭活细菌入侵所需的宿主细胞机制。将细胞松弛素D（2μM）加入T84细胞培养基中30 在接种ETEC（MOI=20）前min和暴露于ETEC后，在六个重复实验中测量了2'-Fucosyllactose/2′-FL抑制IL-8表达的能力。

蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： T84 细胞
测试浓度： 0、2 和 4 mg/mL
孵育持续时间：48 小时
实验结果：抑制 CD14 mRNA 并降低细胞相关 CD14 蛋白表达。

---

蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： T84 和 HCT8 细胞T84 和 HCT8 细胞
测试浓度： 2 mg/mL
孵育持续时间：48小时
实验结果：抑制CD14 mRNA并降低细胞相关CD14蛋白表达。抑制 CD14 和 NF-κB 诱导。诱导 iκB 和 SOCS2 表达以及 STAT3 磷酸化。

动物/疾病模型： 感染 AIEC（泌尿道致病性大肠杆菌和黏附侵袭性大肠杆菌）的 C57BL/6 小鼠（8 周龄）[1]
剂量： 100 mg (200 μL)
给药途径： 灌胃（po）；每日一次，连续 4 天
实验结果： 结肠长度更接近正常。抑制 O83 阳性细菌在结肠黏膜的定植。降低结肠中 CD14 表达、CD14 mRNA 水平、IL-6、IL-17 和 TNF-α 水平。

---

体内研究：采用并验证了 AIEC 感染的小鼠模型^37,38。 8周龄雌性C57BL/6小鼠连续3天饮用含0.25%葡聚糖硫酸钠（DSS）的水，并在第4天灌胃给予20 mg链霉素；其中一半小鼠还连续4天每天灌胃给予200 μL含100 mg 2'-岩藻糖基乳糖（2'-FL）的溶液。第5天，两组实验小鼠均灌胃接种10⁹ CFU的侵袭性大肠杆菌（AIEC），接种量为200 μL，并在4天后处死；对照组小鼠仅灌胃给予DSS和抗生素，但仅进行PBS灌胃。每日监测小鼠体重。粪便和结肠组织中的侵袭性大肠杆菌（AIEC）数量通过红霉素/氨苄青霉素LB平板上的菌落形成单位（CFU）进行定量。³⁷ 将小鼠结肠组织切片（5 μm厚，4%福尔马林固定，石蜡包埋）进行苏木精-伊红（H&E）染色。将小鼠结肠组织冷冻切片（5 μm厚）用CD14或O83抗体染色后，通过共聚焦显微镜进行观察。另取部分结肠组织样本，用Trizol试剂提取总RNA，用于CD14 mRNA水平的实时定量PCR检测；提取蛋白质，用于促炎细胞因子的ELISA分析。

[1]. The human milk oligosaccharide 2'-fucosyllactose modulates CD14 expression in human enterocytes, thereby attenuating LPS-induced inflammation. Gut. 2016 Jan;65(1):33-46.

[2]. Human milk--derived oligosaccharides and plant-derived oligosaccharides stimulate cytokine production of cord blood T-cells in vitro. Pediatr Res. 2004 Oct;56(4):536-40.

2'-岩藻糖基乳糖正在临床试验 NCT03847467（2'-FL 作为膳食补充剂用于接受稳定维持性抗 TNF 治疗的 IBD 患者的初步可行性研究）中进行研究。

---

背景：革兰氏阴性致病菌是肠道感染的主要原因，它们通过脂多糖 (LPS) 与肠道 Toll 样受体 4 (TLR4) 结合来激活黏膜炎症。母乳喂养可降低疾病风险，且人乳具有调节炎症的作用。目的：本研究旨在探讨人乳低聚糖（HMOSs）是否影响致病性大肠杆菌诱导的肠上皮细胞（IECs）白细胞介素（IL）-8的释放，鉴定受HMOSs调控的特定促炎信号分子，明确活性HMOSs及其作用机制。方法：采用体外感染1型菌毛肠毒素性大肠杆菌（ETEC）的IECs模型构建炎症模型：T84细胞代表成熟IECs，H4细胞代表未成熟IECs。鉴定在有或无HMOSs存在的情况下，与IL-8释放相关的脂多糖（LPS）诱导的信号分子。通过基因敲低和过表达验证信号通路介质。已鉴定出导致信号通路改变的寡糖。结果：HMOSs可减弱肠毒素大肠杆菌（ETEC）、泌尿道致病性大肠杆菌和黏附侵袭性大肠杆菌（AIEC）感染引起的脂多糖（LPS）依赖性IL-8诱导，并抑制CD14的转录和翻译。CD14敲低可重现HMOSs诱导的减弱作用。CD14过表达可增强ETEC引起的炎症反应，并增加其对HMOSs抑制作用的敏感性。2'-岩藻糖基乳糖（2'-FL）在乳汁浓度下，与总HMOSs具有同等的抑制CD14表达的能力，并能保护AIEC感染的小鼠。结论：HMOSs和2'-FL通过减弱CD14的诱导，直接抑制ETEC侵袭T84和H4肠上皮细胞过程中LPS介导的炎症反应。 CD14 表达介导 LPS-TLR4 刺激巨噬细胞迁移抑制因子 (MIF) 炎症通路的部分活性，该通路通过细胞因子信号传导抑制因子 2/信号转导和转录激活因子 3/NF-κB 发挥作用。人乳低聚糖 (HMO) 对炎症的直接抑制作用支持其作为先天免疫系统的功能，使母亲能够通过乳汁保护脆弱的新生儿。2'-岩藻聚糖 (2'-FL) 是一种主要的 HMO，能够抑制炎症信号传导。[1]

---

人乳中含有大量游离低聚糖 (HMO)。HMO 已被证实具有抗炎特性，并且越来越多的证据表明其具有免疫调节作用。本研究旨在评估两种人乳来源的低聚糖样品（中性和酸性低聚糖）以及一种低分子量岩藻聚糖对细胞因子产生和脐带血单核细胞活化的影响。从随机选择的健康新生儿脐带血中分离单核细胞，并与寡糖样品进行共培养。采用流式细胞术检测细胞内细胞因子生成（第20天）和T细胞表面标志物表达（第5天）。体外诱导的免疫球蛋白水平通过浊度法（总IgG1）和ELISA法（总IgE）在细胞培养上清液中进行定量。酸性寡糖组分增加了产生干扰素-γ的CD3⁺CD4⁺和CD3⁺CD8⁺细胞的比例（p < 0.05），并增加了CD3⁺CD8⁺细胞中IL-13的产生（p < 0.05）。在酸性寡糖培养物中，CD3⁺CD4⁺细胞上的CD25⁺表达显著升高（p < 0.05）。低分子量岩藻聚糖可诱导CD3+CD4+ T细胞产生IL-4（p < 0.05），并诱导CD3+CD8+ T细胞产生IL-13（p < 0.05），而干扰素-γ的产生在两种T细胞群中均未受影响。免疫球蛋白（总IgE和总IgG1）的产生也未受影响。人乳来源的寡糖和植物来源的寡糖在体外可影响脐带血来源T细胞的细胞因子产生和活化。因此，寡糖，特别是酸性寡糖，可能影响母乳喂养新生儿的淋巴细胞成熟。[2]

C18H32O15

488.44

488.174

C, 44.26; H, 6.60; O, 49.13

41263-94-9

170484

White to off-white solid powder

1.68g/cm3

902.2ºC at 760 mmHg

230-231 °C

311.9ºC

0mmHg at 25°C

1.631

-6.1

248.45

10

15

10

33

609

14

C[C@H]1[C@H]([C@H]([C@@H]([C@@H](O1)O[C@@H]2[C@H]([C@H]([C@H](O[C@H]2O[C@H]([C@@H](CO)O)[C@@H]([C@H](C=O)O)O)CO)O)O)O)O)O

HWHQUWQCBPAQQH-BWRPKUOHSA-N

InChI=1S/C18H32O15/c1-5-9(24)12(27)14(29)17(30-5)33-16-13(28)11(26)8(4-21)31-18(16)32-15(7(23)3-20)10(25)6(22)2-19/h2,5-18,20-29H,3-4H2,1H3/t5-,6-,7+,8+,9+,10+,11-,12+,13-,14-,15+,16+,17-,18-/m0/s1

(2R,3R,4R,5R)-4-[(2S,3R,4S,5R,6R)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-[(2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-2,3,5,6-tetrahydroxyhexanal

2'-Fucosyllactose; 41263-94-9; 2'-O-fucosyllactose; Lactose, 2'-o-fucosyl-; 2'-o-l-fucosyl-d-lactose; XO2533XO8R; UNII-XO2533XO8R; DTXSID40194179;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : 50 mg/mL (102.37 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。