| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 100mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| 1g |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Inducible nitric oxide synthase (iNOS); Protein kinase C-theta (PKC-θ) [1][2]
iNOS (inducible nitric oxide synthase) and PKC-theta (protein kinase C theta). Anemonin is a selective iNOS inhibitor and also inhibits PKC-theta. It significantly inhibits PKC-theta protein translation or stability. iNOS is involved in inflammation and immune responses. PKC-theta is a key regulator of T cell activation and inflammation. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
白头翁素 (4) 浓度依赖性地抑制LPS激活的RAW 264.7巨噬细胞中NO的产生，IC50值为5.37 ± 0.39 μM。在100 μM浓度下，它完全逆转了LPS诱导的NO产生。[2]
白头翁素 (2.5-30 μM) 显著且浓度依赖性地抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞中iNOS蛋白的表达，该结果通过Western blotting和密度分析法测定。[2] 白头翁素 (2.5-30 μM) 在孵育6小时后逐渐降低LPS诱导的RAW 264.7细胞中iNOS mRNA的表达，该结果通过半定量RT-PCR测定。 [2] 白头翁素（30 μM，作用时间长达 150 分钟）在硝普钠溶液中未表现出 NO 清除活性，因为它不影响亚硝酸盐的积累。[2] 在 HT-29 细胞中，白头翁素（2.5、5 和 10 μM）对细胞活力或凋亡（CCK-8 和流式细胞术）没有显著影响，表明其无细胞毒性。[1] 白头翁素（2.5、5 和 10 μM）呈剂量依赖性地下调 HT-29 细胞中 LPS 诱导的 IL-1β、TNF-α 和 IL-6 的 mRNA 和蛋白水平。 [1] 白头翁素不影响PRKCQ基因转录，但显著抑制PKC-θ蛋白翻译或蛋白稳定性。[1] 在转染PRKCQ过表达质粒（pcPRKCQ）的HT-29细胞中，白头翁素对细胞因子（IL-1β、TNF-α、IL-6）产生的抑制作用显著逆转。[1] 分子对接预测白头翁素（分子ID：MOL001883）与PKC-θ（蛋白ID：4FKD）的结合自由能为-5.9 kcal/mol。[1] 生化和细胞实验表明，白头翁素可抑制iNOS和PKC-θ的活性。该化合物能显著抑制 PKC-θ 蛋白的翻译或稳定性。细胞模型已证实该化合物具有抗炎特性。公开文献中尚未披露详细的 IC50 值。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在DSS诱导的急性溃疡性结肠炎小鼠模型中，腹腔注射白头翁素（2、5和10 mg/kg）呈剂量依赖性地抑制了体重下降和结肠长度缩短，并显著降低了疾病活动指数（DAI）评分。[1] HE染色显示，白头翁素呈剂量依赖性地减轻了DSS诱导的结肠组织病理学改变。[1] 白头翁素呈剂量依赖性地抑制了DSS诱导的小鼠结肠组织中IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA、蛋白表达及释放（RT-qPCR、ELISA、Western blotting）。[1] 白头翁素呈剂量依赖性地显著抑制了DSS诱导小鼠结肠组织中PKC-θ蛋白的表达。 [1]
在大鼠中，白头翁素（5-30 μM）显著逆转了内皮剥脱的主动脉环中脂多糖（LPS）诱导的苯肾上腺素引起的血管高反应性，使最大收缩力从 1.60 ± 0.23 g 恢复至 3.09 ± 0.14 g。[2] 在内皮完整的大鼠主动脉环中，白头翁素（10、100 μM）不影响乙酰胆碱诱导的内皮型一氧化氮（eNOS）依赖性血管舒张，表明其对 eNOS 活性无影响。[2] 白头翁素可改善葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎。这种体内效应表明其在炎症性肠病模型中具有抗炎活性。该化合物已被用于炎症相关疾病的研究。还需要进行更多的体内研究来充分表征其治疗潜力。 |
| 酶活实验 |
NO 测定：将 RAW 264.7 细胞（5 × 10⁵ 个细胞/mL）接种于 24 孔板中培养至汇合。24 小时后，更换为无血清培养基，培养 4 小时。在 LPS（200 ng/mL）存在下，加入 白头翁素（2.5-30 μM）、溶剂或阳性对照（100 μM L-NNA 或氨基胍），培养 24 小时。使用 Griess 试剂分光光度法测定培养基中的亚硝酸盐浓度，以此作为 NO 生成的指标。[2]
iNOS 蛋白的 Western blot 检测：在 白头翁素（2.5-30 μM）或溶剂存在下，用 LPS（200 ng/mL）刺激 RAW 264.7 细胞 24 小时。细胞裂解液经超声处理后，于4℃下以3000 × g离心20分钟。采用Bradford法测定胞质蛋白浓度。蛋白经SDS-PAGE电泳分离后，转移至膜上，与小鼠单克隆抗iNOS抗体（1:1000）于4℃孵育过夜，再与HRP标记的二抗孵育1.5小时，最后通过化学发光法检测。[2] iNOS mRNA的RT-PCR检测：将RAW 264.7细胞（每6 cm培养皿5 × 10⁶个细胞）在LPS（200 ng/mL）存在下，用白头翁素（2.5-30 μM）或溶剂对照处理6小时。采用TRIzol法提取总RNA。采用 iNOS（384 bp 产物）和 GAPDH（452 bp 产物，管家基因对照）引物进行 RT-PCR。PCR 产物经 2% 琼脂糖凝胶电泳分析，并用紫外透射仪观察。[2] NO 清除活性测定：将硝普钠溶液 (5 mM) 与白头翁素 (2.5-30 μM) 或溶剂在微量离心管中于室温下避光孵育。使用 Griess 试剂测定 0、30、60、90、120 和 150 分钟时的亚硝酸盐水平。[2] 血管张力实验：将去除内皮的大鼠主动脉环在含有 LPS (300 ng/mL) 和白头翁素 (5-30 μM) 或溶剂的 MEM 培养基中孵育 6 小时。随后将血管环固定在含有氧合克氏液的器官浴槽中，并施加1.8 g的被动张力。构建去氧肾上腺素（1 nM至100 μM）的浓度-反应曲线。为了评估eNOS功能，将内皮完整的血管环用去氧肾上腺素（0.3 μM）预收缩，然后在存在白头翁素（10、100 μM）、L-NNA（100 μM）、氨基胍（100 μM）或溶剂的情况下，用累积浓度的乙酰胆碱（10 nM至10 μM）处理20分钟。[2] 分子对接：使用AutoDock Vina软件将白头翁素（分子ID：MOL001883）与PKC-θ（蛋白ID：4FKD）进行对接。使用 Discovery Studio 4.5 客户端软件进一步分析了相互作用结果。结合自由能计算为 -5.9 kcal/mol。[1] 体外 iNOS 抑制酶活性测定采用重组 iNOS 酶和合适的底物进行。PKC-θ 抑制酶活性测定则使用重组 PKC-θ 和合适的肽底物，并在 ATP 和脂质存在下进行。将不同浓度的银杏素与酶和底物一起孵育。采用放射性或荧光法检测酶活性。IC50 值由剂量反应曲线计算得出。 |
| 细胞实验 |
细胞活力检测（alamarBlue）：NO测定后，向含有RAW 264.7细胞的每个孔中加入10% alamarBlue DMEM溶液。将培养板置于37℃、5% CO₂条件下孵育3小时。使用分光光度计在570 nm和600 nm处读取吸光度。[2]
HT-29细胞培养和处理：将HT-29细胞在含有10% FBS和1%链霉素/青霉素的DMEM培养基中，于37℃、5% CO₂条件下培养。将细胞（5 × 10⁴ 个细胞/mL）接种于96孔板（每孔100 μL）。24小时后，用LPS（1 μg/mL）处理细胞24小时，然后用白头翁素（2.5、5和10 μM）处理48小时。 [1] 细胞活力（CCK-8）和细胞凋亡（流式细胞术）：采用CCK-8法检测HT-29细胞活力。采用Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒和流式细胞术检测细胞凋亡。[1] 炎症因子RT-qPCR：使用TRIzol试剂从结肠组织和HT-29细胞中提取总RNA，使用RT-PCR试剂盒进行逆转录，并使用SYBR Green PCR试剂盒进行实时定量PCR，以GAPDH作为内参。所用引物包括IL-1β、TNF-α、IL-6、PRKCQ、PTPN2和GAPDH的引物。采用2-ΔΔCt法分析数据。 [1] 炎症因子和PKC-θ的Western blotting：使用RIPA裂解液提取总蛋白，经10% SDS-PAGE凝胶电泳分离后，转移至PVDF膜，与一抗（1:1000；抗IL-1β、抗TNF-α、抗IL-6、抗PKC-θ）于4℃孵育过夜，再与HRP标记的二抗（1:2000）孵育1.5小时，最后使用ECL化学发光试剂进行检测。[1] 细胞转染：将HT-29细胞以1.5 × 10⁵ 个细胞/cm²的密度接种。使用Lipofectamine 2000试剂将PRKCQ过表达质粒（pcPRKCQ）或空载体pcDNA3.1质粒转染至细胞中。 Lipo2000/DNA复合物在室温下反应20分钟后，取100 μL加入细胞中孵育4-6小时，随后在含1%链霉素/青霉素和10%胎牛血清的培养基中继续培养24小时。[1] 细胞（例如免疫细胞、巨噬细胞或T细胞）经培养后，用浓度通常为1-100 μM的银杏黄素处理24-48小时。通过测量NO生成量（Griess法）或通过Western blot检测iNOS蛋白水平来评估iNOS抑制情况。通过测量PKC-θ蛋白水平或下游靶点的磷酸化水平来评估PKC-θ抑制情况。炎症细胞因子生成通过ELISA进行评估。 |
| 动物实验 |
DSS诱导的急性溃疡性结肠炎小鼠模型：C57BL/6小鼠连续7天饮用含3% (w/v) DSS的水。在DSS给药期间，每日腹腔注射白头翁素（2、5和10 mg/kg）。对照组使用无菌水。第9天处死小鼠进行实验。记录体重和疾病活动指数（DAI）。DAI =（体重减轻[%] + 粪便性状 + 便血）/3。[1]
AAV载体感染：在DSS给药前一周，用3%戊巴比妥钠麻醉小鼠。将一根软导管插入小鼠肛门4 cm深处。通过导管将含有0.2 mL AAV-PRKCQ或AAV-null（4 × 10¹⁰病毒基因组）的无菌生理盐水灌注到小鼠结肠内。将小鼠倒置1分钟，以使药物均匀分布于整个结肠。[1] HE染色：结肠组织切片脱蜡后，用苏木精孵育2分钟，伊红染色，脱水，包埋后进行显微镜分析。[1] 炎症因子ELISA：使用ELISA试剂盒，按照制造商说明书检测结肠组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的水平。使用酶标仪在450 nm处测量光密度值。[1] 大鼠胸主动脉环实验：雄性Sprague-Dawley大鼠（280-350 g）用戊巴比妥钠（50 mg/kg，腹腔注射）麻醉，放血处死。分离胸主动脉，清洗后将其切成3 mm长的环状组织。将血管环置于含有 1 mL 含 LPS (300 ng/mL) 和白头翁素 (5-30 μM) 或溶剂的 MEM 培养基的 24 孔板中，并在 37°C 下孵育 6 小时。随后，将去除内皮的血管环等容固定在含有氧合 Krebs 溶液的器官浴槽中，并施加 1.8 g 的被动张力。通过力位移传感器记录血管张力。绘制去氧肾上腺素 (1 nM 至 100 μM) 的浓度-反应曲线。在eNOS研究中，内皮完整的血管环先用去氧肾上腺素（0.3 μM）预收缩，然后在存在白头翁素（10、100 μM）、L-NNA（100 μM）、氨基胍（100 μM）或溶剂的情况下，施加累积浓度的乙酰胆碱（10 nM至10 μM），持续20分钟。[2] 在葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的急性溃疡性结肠炎模型中，小鼠饮用水中添加DSS以诱导结肠炎。白头翁素通常以5-50 mg/kg/天的剂量，每日口服或腹腔注射，持续7-14天。评估疾病活动指数、结肠长度、组织学评分和炎症细胞因子水平。采用结肠炎模型的标准方案。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
关于银莲花素的药代动力学数据有限。该化合物是一种天然产物，分子量为192.17，分子式为C10H8O4。它微溶于冷水，更易溶于热水，可溶于热乙醇和氯仿，几乎不溶于乙醚。其体内药代动力学参数尚未得到充分研究。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在 RAW 264.7 巨噬细胞中，100 μM 的白头翁素在 LPS 存在下不影响细胞活力（通过 alamarBlue 检测）。[2] 在 HT-29 细胞中，2.5、5 和 10 μM 的白头翁素对细胞活力（CCK-8 检测）或细胞凋亡（流式细胞术检测）均无显著影响，表明其无细胞毒性。[1] 在大鼠中，10 和 100 μM 的白头翁素不影响主动脉环的基线张力，表明其无直接血管活性作用。 [2]
- 来源植物：见于白头翁属（白头翁及其近缘种）和铁线莲。 - 化学成分：含有毛茛素、原白头翁素、白头翁素、三萜皂苷和黄酮类化合物。 - 毒性/刺激性：新鲜植物对皮肤、胃肠道和黏膜具有极强的刺激性。 - 致敏性：已有白头翁过敏反应的报道。 - 传统用途（哺乳期）：据报道，顺势疗法制剂用于治疗乳头疼痛和乳腺炎，既可用于减少过多的乳汁分泌，也可用于增加乳汁分泌。 - 缺乏临床证据：目前尚无科学有效的临床试验支持其用于哺乳期的用途。由于缺乏相关信息，哺乳期妇女可能更倾向于选择其他药物。 - 传统用途（伤口愈合）：在突尼斯传统医学中，铁线莲（Clematis flammula）一直被用于治疗皮肤疾病，包括真菌感染。 - 伤口愈合研究：从铁线莲中分离出白头翁素，并将其添加到乳膏中。 - 主要成分：GC-MS 分析鉴定出原白头翁素（86.74%）为主要成分，其部分二聚化形成白头翁素。 - 伤口愈合功效：研究结果有力地支持了白头翁素乳膏的有效伤口愈合活性，表明其有望成为组织修复的治疗药物。 白头翁素的毒理学数据有限。该化合物是从植物中分离的天然产物。目前尚未发表系统的毒理学评价。该化合物仅供研究使用，未经批准用于人体治疗。应遵守处理天然产物的标准安全预防措施。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
白头翁素是一种丁烯内酯。据报道，安第斯白头翁素中含有樟脑成分，相关数据可供参考。
白头翁素（CAS：508-44-1，分子式C10H8O4，分子量192.17）又名白头翁樟脑和白头翁碱。它是一种选择性iNOS抑制剂和PKC-θ抑制剂。它已被用于炎症相关疾病的研究。目前尚未进行临床试验，也未获得任何监管部门的批准。该化合物仅作为研究级天然产物提供给实验室使用。 |
| 分子式 |
C10H8O4
|
|---|---|
| 分子量 |
192.17
|
| 精确质量 |
192.042
|
| 元素分析 |
C, 62.50; H, 4.20; O, 33.30
|
| CAS号 |
508-44-1
|
| PubChem CID |
46173847
|
| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
|
| 密度 |
1.45
|
| 沸点 |
535.7ºC at 760 mmHg
|
| 熔点 |
157-158ºC
|
| 闪点 |
300.7ºC
|
| 折射率 |
1.61
|
| LogP |
0.483
|
| tPSA |
52.6
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
0
|
| 重原子数目 |
14
|
| 分子复杂度/Complexity |
357
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
|
| SMILES |
O1C(C([H])=C([H])[C@@]21C([H])([H])C([H])([H])[C@@]12C([H])=C([H])C(=O)O1)=O
|
| InChi Key |
JLUQTCXCAFSSLD-NXEZZACHSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C10H8O4/c11-7-1-3-9(13-7)5-6-10(9)4-2-8(12)14-10/h1-4H,5-6H2/t9-,10-/m1/s1
|
| 化学名 |
(5S,6S)-4,7-dioxadispiro[4.0.46.25]dodeca-1,9-diene-3,8-dione
|
| 别名 |
508-44-1; Pulsatilla camphor; Anemonine; Pulsatilla camphor; trans-Anemonin; DTXSID70903913; G99XG5B674; (5S,6S)-4,7-dioxadispiro(4.0.46.25)dodeca-1,9-diene-3,8-dione;
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 5.2037 mL | 26.0186 mL | 52.0373 mL | |
| 5 mM | 1.0407 mL | 5.2037 mL | 10.4075 mL | |
| 10 mM | 0.5204 mL | 2.6019 mL | 5.2037 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
