| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 100mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Inducible nitric oxide synthase (iNOS); Protein kinase C-theta (PKC-θ) [1][2]
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| 体外研究 (In Vitro) |
在LPS激活的RAW 264.7巨噬细胞中，Anemonin（4）以浓度依赖性方式抑制NO产生，IC50值为5.37 ± 0.39 μM。在100 μM浓度下，它完全逆转了LPS诱导的NO产生。 [2]
通过Western blot和光密度分析，Anemonin（2.5-30 μM）显著且浓度依赖性地抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞中iNOS蛋白表达。 [2] 通过半定量RT-PCR测量，Anemonin（2.5-30 μM）在孵育6小时后逐渐降低LPS诱导的RAW 264.7细胞中iNOS mRNA表达。 [2] 在硝普钠溶液中，Anemonin（30 μM，长达150分钟）未表现出NO清除活性，因为它不影响亚硝酸盐的积累。 [2] 在HT-29细胞中，Anemonin（2.5、5和10 μM）对细胞活力和凋亡无显著影响（CCK-8和流式细胞术），表明无细胞毒性。 [1] Anemonin（2.5、5和10 μM）剂量依赖性地下调LPS诱导的HT-29细胞中IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白水平。 [1] Anemonin不影响PRKCQ基因转录，但显著抑制PKC-θ蛋白翻译或蛋白稳定性。 [1] 在转染PRKCQ过表达质粒（pcPRKCQ）的HT-29细胞中，Anemonin对细胞因子（IL-1β、TNF-α、IL-6）产生的抑制作用被显著逆转。 [1] 分子对接预测Anemonin（分子ID：MOL001883）与PKC-θ（蛋白ID：4FKD）结合，结合自由能为-5.9 kcal/mol。 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在DSS诱导的急性UC小鼠模型中，Anemonin（2、5和10 mg/kg，腹腔注射）剂量依赖性地防止体重减轻和结肠长度缩短，并显著抑制疾病活动指数（DAI）评分。 [1]
HE染色显示，Anemonin剂量依赖性地减轻DSS诱导的结肠组织病理学变化。 [1] Anemonin剂量依赖性地抑制DSS诱导的小鼠结肠组织中IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA、蛋白和释放水平（RT-qPCR、ELISA、Western blot）。 [1] Anemonin剂量依赖性地显著抑制DSS诱导小鼠结肠组织中PKC-θ蛋白表达。 [1] 在大鼠中，Anemonin（5-30 μM）显著逆转LPS诱导的去内皮主动脉环对苯肾上腺素的血管高反应性，将最大收缩从1.60 ± 0.23 g恢复到3.09 ± 0.14 g。 [2] Anemonin（10、100 μM）不影响内皮完整大鼠主动脉环中乙酰胆碱诱导的内皮NO依赖性血管舒张，表明对eNOS活性无影响。 [2] |
| 酶活实验 |
NO测量：RAW 264.7细胞（5 × 10⁵个/mL）在24孔板上生长至融合。24小时后，将培养基更换为无血清培养基再培养4小时。在LPS（200 ng/mL）存在下，加入Anemonin（2.5-30 μM）、溶剂或阳性对照（L-NNA或氨基胍，100 μM），继续培养24小时。使用Griess试剂分光光度法测定培养基中的亚硝酸盐浓度作为NO产生的指标。 [2]
iNOS蛋白的Western blot分析：在Anemonin（2.5-30 μM）或溶剂存在下，用LPS（200 ng/mL）刺激RAW 264.7细胞24小时。裂解细胞并超声处理，在4°C下以3000 × g离心20分钟。使用Bradford法测定细胞质蛋白浓度。通过SDS-PAGE分离蛋白，转移至膜上，与小鼠单克隆抗iNOS抗体（1:1000）在4°C孵育过夜，然后与HRP标记的二抗孵育1.5小时，通过化学发光检测。 [2] iNOS mRNA的RT-PCR分析：在Anemonin（2.5-30 μM）或溶剂存在下，用LPS（200 ng/mL）处理RAW 264.7细胞（5 × 10⁶个/6厘米培养皿）6小时。使用TRIzol提取总RNA。使用iNOS（384 bp产物）和GAPDH（452 bp产物，内参）引物进行RT-PCR。PCR产物在2%琼脂糖凝胶上分析，通过紫外透照可视化。 [2] NO清除活性测定：将硝普钠溶液（5 mM）与Anemonin（2.5-30 μM）或溶剂在微量离心管中于室温光照下孵育。在0、30、60、90、120和150分钟时使用Griess试剂测定亚硝酸盐水平。 [2] 血管张力实验：将去内皮的大鼠主动脉环在含有LPS（300 ng/mL）和Anemonin（5-30 μM）或溶剂的MEM中于37°C孵育6小时。然后将环固定在含氧Krebs溶液的器官浴槽中，施加1.8 g的静息张力。构建苯肾上腺素（1 nM至100 μM）的浓度-反应曲线。对于eNOS功能评估，将内皮完整的主动脉环用苯肾上腺素（0.3 μM）预收缩，然后在Anemonin（10、100 μM）、L-NNA（100 μM）、氨基胍（100 μM）或溶剂存在下，加入累积浓度的乙酰胆碱（10 nM至10 μM）处理20分钟。 [2] 分子对接：使用AutoDock Vina软件将Anemonin（分子ID：MOL001883）与PKC-θ（蛋白ID：4FKD）对接。使用Discovery Studio 4.5 Client软件进一步分析相互作用结果。计算得到结合自由能为-5.9 kcal/mol。 [1] |
| 细胞实验 |
细胞活力测定（alamarBlue）：NO测量后，向含有RAW 264.7细胞的每个孔中加入含10% alamarBlue的DMEM。将板在37°C、5% CO₂中孵育3小时。在570和600 nm双波长处分光光度法读取吸光度。 [2]
HT-29细胞培养和处理：HT-29细胞在含10% FBS和1%链霉素/青霉素的DMEM中，于37°C、5% CO₂下培养。将细胞（5 × 10⁴个/mL）接种于96孔板（每孔100 μL）。24小时后，用LPS（1 μg/mL）处理细胞24小时，然后用Anemonin（2.5、5和10 μM）处理48小时。 [1] 细胞活力（CCK-8）和凋亡（流式细胞术）：使用CCK-8法检测HT-29细胞活力。使用Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒和流式细胞术检测细胞凋亡。 [1] 炎症因子的RT-qPCR：使用TRIzol试剂从结肠组织和HT-29细胞中提取总RNA，使用RT-PCR试剂盒反转录，使用SYBR Green PCR试剂盒和GAPDH内参进行实时PCR。使用的引物包括IL-1β、TNF-α、IL-6、PRKCQ、PTPN2和GAPDH。使用2-ΔΔCt方法分析数据。 [1] 炎症因子和PKC-θ的Western blotting：使用RIPA总蛋白裂解液提取蛋白，在10% SDS-PAGE凝胶上分离，转移至PVDF膜，与一抗（1:1000；抗IL-1β、抗TNF-α、抗IL-6、抗PKC-θ）在4°C孵育过夜，然后与HRP标记的二抗（1:2000）孵育1.5小时，使用ECL Western试剂检测。 [1] 细胞转染：HT-29细胞以1.5 × 10⁵个/cm²的密度接种。使用Lipofectamine 2000试剂将PRKCQ过表达质粒（pcPRKCQ）或空pcDNA3.1质粒转染细胞。在室温下形成Lipo2000/DNA复合物20分钟，然后将100 μL复合物加入细胞中4-6小时，随后在含1%链霉素/青霉素和10% FBS的培养基中培养24小时。 [1] |
| 动物实验 |
DSS诱导的急性溃疡性结肠炎小鼠模型：C57BL/6小鼠连续7天饮用含3% (w/v) DSS的水。在DSS给药期间，每日腹腔注射白头翁素（2、5和10 mg/kg）。对照组使用无菌水。第9天处死小鼠进行实验。记录体重和疾病活动指数（DAI）。DAI =（体重减轻[%] + 粪便性状 + 便血）/3。[1]
AAV载体感染：在DSS给药前一周，用3%戊巴比妥钠麻醉小鼠。将一根软导管插入小鼠肛门4 cm深处。通过导管将含有0.2 mL AAV-PRKCQ或AAV-null（4 × 10¹⁰病毒基因组）的无菌生理盐水灌注到小鼠结肠内。将小鼠倒置1分钟，以使药物均匀分布于整个结肠。[1] HE染色：结肠组织切片脱蜡后，用苏木精孵育2分钟，伊红染色，脱水，包埋后进行显微镜分析。[1] 炎症因子ELISA：使用ELISA试剂盒，按照制造商说明书检测结肠组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的水平。使用酶标仪在450 nm处测量光密度值。[1] 大鼠胸主动脉环实验：雄性Sprague-Dawley大鼠（280-350 g）用戊巴比妥钠（50 mg/kg，腹腔注射）麻醉，放血处死。分离胸主动脉，清洗后将其切成3 mm长的环状组织。将血管环置于含有 1 mL 含 LPS (300 ng/mL) 和白头翁素 (5-30 μM) 或溶剂的 MEM 培养基的 24 孔板中，并在 37°C 下孵育 6 小时。随后，将去除内皮的血管环等容固定在含有氧合 Krebs 溶液的器官浴槽中，并施加 1.8 g 的被动张力。通过力位移传感器记录血管张力。绘制去氧肾上腺素 (1 nM 至 100 μM) 的浓度-反应曲线。在eNOS研究中，先用去氧肾上腺素（0.3 μM）预收缩内皮完整的血管环，然后在存在白头翁素（10、100 μM）、L-NNA（100 μM）、氨基胍（100 μM）或溶剂的情况下，施加累积浓度的乙酰胆碱（10 nM至10 μM），持续20分钟。[2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
白头翁素是一种丁烯内酯。
据报道，白头翁樟脑存在于安第斯白头翁中，并有相关数据可供参考。 |
| 分子式 |
C10H8O4
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|---|---|
| 分子量 |
192.17
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| 精确质量 |
192.042
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| 元素分析 |
C, 62.50; H, 4.20; O, 33.30
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| CAS号 |
508-44-1
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| PubChem CID |
46173847
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| 密度 |
1.45
|
| 沸点 |
535.7ºC at 760 mmHg
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| 熔点 |
157-158ºC
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| 闪点 |
300.7ºC
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| 折射率 |
1.61
|
| LogP |
0.483
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| tPSA |
52.6
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
0
|
| 重原子数目 |
14
|
| 分子复杂度/Complexity |
357
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
O1C(C([H])=C([H])[C@@]21C([H])([H])C([H])([H])[C@@]12C([H])=C([H])C(=O)O1)=O
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| InChi Key |
JLUQTCXCAFSSLD-NXEZZACHSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C10H8O4/c11-7-1-3-9(13-7)5-6-10(9)4-2-8(12)14-10/h1-4H,5-6H2/t9-,10-/m1/s1
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| 化学名 |
(5S,6S)-4,7-dioxadispiro[4.0.46.25]dodeca-1,9-diene-3,8-dione
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| 别名 |
508-44-1; Pulsatilla camphor; Anemonine; Pulsatilla camphor; trans-Anemonin; DTXSID70903913; G99XG5B674; (5S,6S)-4,7-dioxadispiro(4.0.46.25)dodeca-1,9-diene-3,8-dione;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 5.2037 mL | 26.0186 mL | 52.0373 mL | |
| 5 mM | 1.0407 mL | 5.2037 mL | 10.4075 mL | |
| 10 mM | 0.5204 mL | 2.6019 mL | 5.2037 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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2-PMDQ
GW590735
4-PPBP maleate
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