| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
Caspase 8
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| 体外研究 (In Vitro) |
四肽醛对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶的抑制作用[1]
本研究选择四肽醛是基于对这些酶已知底物特异性的理解。醛Ac-WEHD-CHO和Ac-DEVD-CHO分别含有I组和II组胱天蛋白酶的最佳四肽识别基序。Boc-IETD-CHO中的肽类似于III组胱天蛋白酶的优选序列。这也是在半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3酶原切割位点发现的序列,半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶-3酶原可能是这些酶的内源性底物。选择Ac-YVAD-CHO是因为它以前是已知最有效的可逆胱天蛋白酶抑制剂,因此被广泛用作生物工具。最后,根据这些酶的已知氨基酸偏好,Boc-AEVD-CHO被纳入,因为它被认为是一种广泛的特异性胱天蛋白酶抑制剂。 III组胱天蛋白酶被Boc-IETD-CHO、Ac-DEVD-CHO和Boc-AEVD-CHO广泛抑制,K i值范围为∼1至300 nm。正如底物特异性研究所预期的那样,Ac-WEHD CHO和Ac-YVAD CHO是这组酶的相对较差的抑制剂,这与P4中的疏水性氨基酸通常不能被该组成员很好地耐受的发现是一致的,在Ac-YVAD-CHO的情况下,反映了该组对S3中Glu的严格特异性。 这些实验是在用四种不同的胱天蛋白酶抑制剂预处理的PBL上进行的,泛胱天蛋白酶抑制因子ZVAD-fmk和胱天蛋白酶8抑制剂Boc-AEVD-CHO、Ac-YVAD-cmk和Ac-IETD-CHO至少在使用的浓度下对胱天蛋白酶9具有相对选择性(Garcia-Calvo等人,1998)。图2a-d显示的结果显示,人类PBL与1 μM Ac-YVAD cmk或Ac-IETD-CHO可防止CD95介导的ASM易位和激活(图2a和b)、神经酰胺释放(图2b)和CD95聚集(图2c和d)。对照研究证实,Ac-YVAD cmk和Ac-IETD-CHO也可预防CD95诱导的细胞凋亡(未显示)。同时,未经胱天蛋白酶抑制剂处理的人类PBL对CD95连接反应灵敏(图2a-d)。同样,ZVAD-fmk和Boc-AEVD-CHO几乎完全阻止了ASM易位、ASM激活和CD95聚集(未显示)。这些研究支持ASM激活和CD95聚集发生在引发剂胱天蛋白酶激活的下游的观点[2]。 |
| 酶活实验 |
酶分析[1]
使用类似于先前描述的胱天蛋白酶-1和胱天蛋白酶-3的连续荧光测定法测量每种酶的活性。在每种情况下,使用具有一般结构Ac-XEXD-AMC的底物,其中包含与每种酶的最佳四肽识别基序相同或相似的肽:胱天蛋白酶-1、-4和-5(Ac-WEHD-AMC);胱天蛋白酶-2、-3、-7和-8(Ac-DEVD-AMC);以及胱天蛋白酶-6、-9和-10(Ac-VEHD AMC)。简而言之,在含有底物(浓度≤K m)和不同浓度的目标抑制剂的反应混合物中加入适当稀释的酶,最终反应体积为100μl。使用Tecan Fluostar 96-孔板读取器在室温下使用380nm的激发波长和460nm的发射波长连续监测AMC的释放。除非另有说明,所有实验均在室温下在标准反应条件下进行,标准反应条件定义为0.1 m HEPES、10%蔗糖、0.1%CHAPS和10 mm DTT,pH 7.5,25°C。 |
| 细胞实验 |
为了抑制胱天蛋白酶8,将细胞孵育20分钟 最小值为1 μM的相对特异性胱天蛋白酶8抑制剂Boc-AEVD-CHO、Ac-YVAD-cmk和Ac-IETD-CHO以及非特异性胱天蛋白酶抑制剂Z-VAD-fmk[2]。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
利用肽类和大分子抑制剂对半胱天冬酶家族进行的研究,有助于明确这些酶在炎症和哺乳动物细胞凋亡中的核心作用。然而,由于对这些分子选择性的理解尚不完全,对这些研究的清晰解读受到了一定程度的影响。本文描述了几种肽类抑制剂和痘病毒丝氨酸蛋白酶抑制剂CrmA对10种人半胱天冬酶的选择性。所考察的肽醛(Ac-WEHD-CHO、Ac-DEVD-CHO、Ac-YVAD-CHO、t-butoxycarbonyl-IETD-CHO和t-butoxycarbonyl-AEVD-CHO)中包含多种含有针对不同半胱天冬酶的最佳四肽识别基序的化合物。这些醛类化合物对这些酶表现出广泛的选择性和效力,解离常数范围从75 pM到>10 μM。卤甲基酮苄氧羰基-VAD氟甲基酮是一种广谱不可逆半胱天冬酶抑制剂,其二级失活速率范围为:对半胱天冬酶-2为2.9 × 10² M⁻¹ s⁻¹,对半胱天冬酶-1为2.8 × 10⁵ M⁻¹ s⁻¹。肽类抑制剂的结果与先前描述的底物特异性研究的预测结果一致。牛痘丝氨酸蛋白酶抑制剂CrmA是一种强效(Ki < 20 nM)且选择性的I组半胱天冬酶(半胱天冬酶-1、-4和-5)和大多数III组半胱天冬酶(半胱天冬酶-8、-9和-10)抑制剂,表明该病毒通过抑制细胞凋亡和宿主炎症反应来促进感染。 [1]
CD95诱导细胞凋亡所需的早期事件包括CD95的预结合、死亡诱导信号复合物(DISC)的形成以及CD95在特定膜结构域的聚集。本文阐明了这些事件的分子顺序,并表明酸性鞘磷脂酶(ASM)位于DISC的上游,介导CD95在富含神经酰胺的膜平台上的聚集,而这一过程是DISC形成所必需的。在ASM缺陷细胞中进行的实验表明,在没有神经酰胺生成的情况下,CD95配体结合仅能触发受体上不到1%的caspase 8完全激活。然而,这一事件对于触发ASM易位至质膜外层、ASM激活和神经酰胺释放是必要且充分的,但不足以诱导细胞凋亡。神经酰胺介导的 CD95 聚集随后放大 CD95 的初始信号传导,并驱动 CD95 信号传导的第二步,即 DISC 的形成,从而产生 100% 的 caspase 活性并导致细胞凋亡。这些研究表明,至少在某些细胞中,CD95 信号传导早期事件的分子顺序最简洁的解释是:CD95 配体结合→1% 的最大 caspase 8 激活→ASM 易位→神经酰胺生成→CD95 聚集→DISC 形成→100% 的最大 caspase 8 激活→细胞凋亡。[2] |
| 分子式 |
C22H36N4O10
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|---|---|
| 分子量 |
516.54
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| 精确质量 |
516.243
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| CAS号 |
220094-15-5
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| PubChem CID |
6324621
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| 序列 |
Boc-Ala-Glu-Val-Asp-CHO; Boc-Ala-Glu-Val-Asp-al; N-tert-butoxycarbonyl-L-alanyl-L-alpha-glutamyl-L-valyl-L-aspart-1-al
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| 短序列 |
AEVD; Boc-AEVD-CHO
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| 密度 |
1.258
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| LogP |
1.112
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| tPSA |
217.3
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| 氢键供体(HBD)数目 |
6
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| 氢键受体(HBA)数目 |
10
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| 可旋转键数目(RBC) |
16
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| 重原子数目 |
36
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| 分子复杂度/Complexity |
837
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| 定义原子立体中心数目 |
4
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| SMILES |
CC(C)C(C(=O)NC(CC(=O)O)C=O)NC(=O)C(CCC(=O)O)NC(=O)C(C)NC(=O)OC(C)(C)C
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| InChi Key |
MAMIJEIFDIXCPX-WSMBLCCSSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H36N4O10/c1-11(2)17(20(34)24-13(10-27)9-16(30)31)26-19(33)14(7-8-15(28)29)25-18(32)12(3)23-21(35)36-22(4,5)6/h10-14,17H,7-9H2,1-6H3,(H,23,35)(H,24,34)(H,25,32)(H,26,33)(H,28,29)(H,30,31)/t12-,13-,14-,17-/m0/s1
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| 化学名 |
(4S)-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-carboxy-3-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid
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| 别名 |
Boc-aevd-cho; 220094-15-5; (4S)-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-carboxy-3-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid; Boc-AEVD-CHO trifluoroacetate salt; N-Boc-AEVD-CHO;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9360 mL | 9.6798 mL | 19.3596 mL | |
| 5 mM | 0.3872 mL | 1.9360 mL | 3.8719 mL | |
| 10 mM | 0.1936 mL | 0.9680 mL | 1.9360 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。