Boc-AEVD-CHO

别名: Boc-aevd-cho; 220094-15-5; (4S)-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-carboxy-3-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid; Boc-AEVD-CHO trifluoroacetate salt; N-Boc-AEVD-CHO; N-叔丁氧羰基-丙氨酰-谷氨酰-缬氨酰-天冬氨醛;BOC-ALA-GLU-VAL-ASP-ALDEHYDE (PSEUDO ACID)
目录号: V54862 纯度: ≥98%
Boc-AEVD-CHO 是一种 Caspase 8 抑制剂,可用于细胞凋亡以及免疫和炎症疾病的研究。
Boc-AEVD-CHO CAS号: 220094-15-5
产品类别: Apoptosis
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格
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产品描述
Boc-AEVD-CHO 是一种 Caspase 8 抑制剂,可用于细胞凋亡以及免疫和炎症疾病的研究。
生物活性&实验参考方法
靶点
Caspase 8
体外研究 (In Vitro)
四肽醛对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶的抑制作用[1]
本研究选择四肽醛是基于对这些酶已知底物特异性的理解。醛Ac-WEHD-CHO和Ac-DEVD-CHO分别含有I组和II组胱天蛋白酶的最佳四肽识别基序。Boc-IETD-CHO中的肽类似于III组胱天蛋白酶的优选序列。这也是在半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3酶原切割位点发现的序列,半胱氨酸天冬氨酰蛋白酶-3酶原可能是这些酶的内源性底物。选择Ac-YVAD-CHO是因为它以前是已知最有效的可逆胱天蛋白酶抑制剂,因此被广泛用作生物工具。最后,根据这些酶的已知氨基酸偏好,Boc-AEVD-CHO被纳入,因为它被认为是一种广泛的特异性胱天蛋白酶抑制剂。
III组胱天蛋白酶被Boc-IETD-CHO、Ac-DEVD-CHO和Boc-AEVD-CHO广泛抑制,K i值范围为∼1至300 nm。正如底物特异性研究所预期的那样,Ac-WEHD CHO和Ac-YVAD CHO是这组酶的相对较差的抑制剂,这与P4中的疏水性氨基酸通常不能被该组成员很好地耐受的发现是一致的,在Ac-YVAD-CHO的情况下,反映了该组对S3中Glu的严格特异性。
这些实验是在用四种不同的胱天蛋白酶抑制剂预处理的PBL上进行的,泛胱天蛋白酶抑制因子ZVAD-fmk和胱天蛋白酶8抑制剂Boc-AEVD-CHO、Ac-YVAD-cmk和Ac-IETD-CHO至少在使用的浓度下对胱天蛋白酶9具有相对选择性(Garcia-Calvo等人,1998)。图2a-d显示的结果显示,人类PBL与1 μM Ac-YVAD cmk或Ac-IETD-CHO可防止CD95介导的ASM易位和激活(图2a和b)、神经酰胺释放(图2b)和CD95聚集(图2c和d)。对照研究证实,Ac-YVAD cmk和Ac-IETD-CHO也可预防CD95诱导的细胞凋亡(未显示)。同时,未经胱天蛋白酶抑制剂处理的人类PBL对CD95连接反应灵敏(图2a-d)。同样,ZVAD-fmk和Boc-AEVD-CHO几乎完全阻止了ASM易位、ASM激活和CD95聚集(未显示)。这些研究支持ASM激活和CD95聚集发生在引发剂胱天蛋白酶激活的下游的观点[2]。
酶活实验
酶分析[1]
使用类似于先前描述的胱天蛋白酶-1和胱天蛋白酶-3的连续荧光测定法测量每种酶的活性。在每种情况下,使用具有一般结构Ac-XEXD-AMC的底物,其中包含与每种酶的最佳四肽识别基序相同或相似的肽:胱天蛋白酶-1、-4和-5(Ac-WEHD-AMC);胱天蛋白酶-2、-3、-7和-8(Ac-DEVD-AMC);以及胱天蛋白酶-6、-9和-10(Ac-VEHD AMC)。简而言之,在含有底物(浓度≤K m)和不同浓度的目标抑制剂的反应混合物中加入适当稀释的酶,最终反应体积为100μl。使用Tecan Fluostar 96-孔板读取器在室温下使用380nm的激发波长和460nm的发射波长连续监测AMC的释放。除非另有说明,所有实验均在室温下在标准反应条件下进行,标准反应条件定义为0.1 m HEPES、10%蔗糖、0.1%CHAPS和10 mm DTT,pH 7.5,25°C。
细胞实验
为了抑制胱天蛋白酶8,将细胞孵育20分钟 最小值为1 μM的相对特异性胱天蛋白酶8抑制剂Boc-AEVD-CHO、Ac-YVAD-cmk和Ac-IETD-CHO以及非特异性胱天蛋白酶抑制剂Z-VAD-fmk[2]。
参考文献

[1]. Inhibition of human caspases by peptide-based and macromolecular inhibitors. J Biol Chem. 1998 Dec 4;273(49):32608-13.

[2]. Ceramide-mediated clustering is required for CD95-DISC formation. Oncogene. 2003 Aug 21;22(35):5457-70.

其他信息
利用肽类和大分子抑制剂对半胱天冬酶家族进行的研究,有助于明确这些酶在炎症和哺乳动物细胞凋亡中的核心作用。然而,由于对这些分子选择性的理解尚不完全,对这些研究的清晰解读受到了一定程度的影响。本文描述了几种肽类抑制剂和痘病毒丝氨酸蛋白酶抑制剂CrmA对10种人半胱天冬酶的选择性。所考察的肽醛(Ac-WEHD-CHO、Ac-DEVD-CHO、Ac-YVAD-CHO、t-butoxycarbonyl-IETD-CHO和t-butoxycarbonyl-AEVD-CHO)中包含多种含有针对不同半胱天冬酶的最佳四肽识别基序的化合物。这些醛类化合物对这些酶表现出广泛的选择性和效力,解离常数范围从75 pM到>10 μM。卤甲基酮苄氧羰基-VAD氟甲基酮是一种广谱不可逆半胱天冬酶抑制剂,其二级失活速率范围为:对半胱天冬酶-2为2.9 × 10² M⁻¹ s⁻¹,对半胱天冬酶-1为2.8 × 10⁵ M⁻¹ s⁻¹。肽类抑制剂的结果与先前描述的底物特异性研究的预测结果一致。牛痘丝氨酸蛋白酶抑制剂CrmA是一种强效(Ki < 20 nM)且选择性的I组半胱天冬酶(半胱天冬酶-1、-4和-5)和大多数III组半胱天冬酶(半胱天冬酶-8、-9和-10)抑制剂,表明该病毒通过抑制细胞凋亡和宿主炎症反应来促进感染。 [1]
CD95诱导细胞凋亡所需的早期事件包括CD95的预结合、死亡诱导信号复合物(DISC)的形成以及CD95在特定膜结构域的聚集。本文阐明了这些事件的分子顺序,并表明酸性鞘磷脂酶(ASM)位于DISC的上游,介导CD95在富含神经酰胺的膜平台上的聚集,而这一过程是DISC形成所必需的。在ASM缺陷细胞中进行的实验表明,在没有神经酰胺生成的情况下,CD95配体结合仅能触发受体上不到1%的caspase 8完全激活。然而,这一事件对于触发ASM易位至质膜外层、ASM激活和神经酰胺释放是必要且充分的,但不足以诱导细胞凋亡。神经酰胺介导的 CD95 聚集随后放大 CD95 的初始信号传导,并驱动 CD95 信号传导的第二步,即 DISC 的形成,从而产生 100% 的 caspase 活性并导致细胞凋亡。这些研究表明,至少在某些细胞中,CD95 信号传导早期事件的分子顺序最简洁的解释是:CD95 配体结合→1% 的最大 caspase 8 激活→ASM 易位→神经酰胺生成→CD95 聚集→DISC 形成→100% 的最大 caspase 8 激活→细胞凋亡。[2]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C22H36N4O10
分子量
516.54
精确质量
516.243
CAS号
220094-15-5
PubChem CID
6324621
序列
Boc-Ala-Glu-Val-Asp-CHO; Boc-Ala-Glu-Val-Asp-al; N-tert-butoxycarbonyl-L-alanyl-L-alpha-glutamyl-L-valyl-L-aspart-1-al
短序列
AEVD; Boc-AEVD-CHO
外观&性状
Typically exists as solid at room temperature
密度
1.258
LogP
1.112
tPSA
217.3
氢键供体(HBD)数目
6
氢键受体(HBA)数目
10
可旋转键数目(RBC)
16
重原子数目
36
分子复杂度/Complexity
837
定义原子立体中心数目
4
SMILES
CC(C)C(C(=O)NC(CC(=O)O)C=O)NC(=O)C(CCC(=O)O)NC(=O)C(C)NC(=O)OC(C)(C)C
InChi Key
MAMIJEIFDIXCPX-WSMBLCCSSA-N
InChi Code
InChI=1S/C22H36N4O10/c1-11(2)17(20(34)24-13(10-27)9-16(30)31)26-19(33)14(7-8-15(28)29)25-18(32)12(3)23-21(35)36-22(4,5)6/h10-14,17H,7-9H2,1-6H3,(H,23,35)(H,24,34)(H,25,32)(H,26,33)(H,28,29)(H,30,31)/t12-,13-,14-,17-/m0/s1
化学名
(4S)-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-carboxy-3-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid
别名
Boc-aevd-cho; 220094-15-5; (4S)-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-carboxy-3-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid; Boc-AEVD-CHO trifluoroacetate salt; N-Boc-AEVD-CHO;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.9360 mL 9.6798 mL 19.3596 mL
5 mM 0.3872 mL 1.9360 mL 3.8719 mL
10 mM 0.1936 mL 0.9680 mL 1.9360 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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