Boc-Lys(Ac)-AMC

别名: 2-甲基-2-丙基{(2S)-6-乙酰氨基-1-[(4-甲基-2-氧代-2H-苯并吡喃-7-基)氨基]-1-氧代-2-己烷基}氨基甲酸酯
目录号: V4120 纯度: ≥98%
Boc-Lys(Ac)-AMC 是一种细胞穿透/可穿透的荧光 HDAC 底物 (Ex/Em = 355 nm/460 nm)。
Boc-Lys(Ac)-AMC CAS号: 233691-67-3
产品类别: HDAC
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
5mg
10mg
25mg
50mg
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产品描述
Boc-Lys(Ac)-AMC 是一种细胞穿透性荧光 HDAC 底物(激发/发射波长 = 355 nm/460 nm)。
Boc-Lys(Ac)-AMC(CAS 编号:233691-67-3)是一种细胞渗透性荧光组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 底物。它是一种合成化合物,由一个被叔丁氧羰基 (Boc) 和乙酰基 (Ac) 保护的赖氨酸残基与一个氨甲基香豆素 (AMC) 部分偶联而成。该化合物的分子式为 C23H31N3O6,分子量为 445.51。它专为生物学研究应用而设计,不适用于临床或医疗用途。
生物活性&实验参考方法
靶点
Boc-Lys(Ac)-AMC serves as a substrate for histone deacetylases (HDACs), a family of enzymes that remove acetyl groups from lysine residues on histones and other proteins. Following deacetylation by an HDAC, the Boc-Lys-AMC intermediate is cleaved by trypsin, releasing the fluorescent 7-amino-4-methylcoumarin (AMC) moiety. The fluorescence of released AMC can be quantified and used to measure HDAC activity. This makes the compound a valuable tool for studying HDAC function and screening HDAC inhibitors.
体外研究 (In Vitro)
操作指南(以下是我们建议的操作流程;请根据您的具体需求进行调整,仅供参考)。基于组织培养的HDAC检测[2] 1. 在96孔组织培养板中,加入6 × 10⁴个细胞、100 mL培养基和25 μM Boc-Lys(Ac)-AMC。培养过夜。2. 在37°C、5% CO₂条件下孵育2-3小时。3. 为终止脱乙酰化反应,加入含有细胞裂解缓冲液和胰蛋白酶的HDAC显色液。4. 室温孵育15分钟。5. 使用SpectraMax M5微孔板分析仪,在激发/发射波长为355 nm/460 nm处测量AMC的荧光信号。
在体外,Boc-Lys(Ac)-AMC用作底物来测定HDAC酶活性。该化合物可透过细胞膜,可用于基于细胞的检测方法来监测细胞内 HDAC 活性。经 HDAC 脱乙酰化后,再经胰蛋白酶切割,释放出的 AMC 在 355 nm 激发光(激发/发射波长 = 355 nm/460 nm)下发出 460 nm 处的荧光。荧光信号强度与 HDAC 活性成正比,因此可用于定量分析。
体内研究 (In Vivo)
由于Boc-Lys(Ac)-AMC是一种用于生化分析的底物而非治疗药物,因此其具体的体内活性数据并不适用。该化合物并非设计用于体内给药或药理活性研究。其主要用途是在体外作为研究工具,用于测量细胞裂解液或活细胞中的HDAC活性。该化合物在研究中用于研究HDAC功能并评估HDAC抑制剂的效力。
酶活实验
使用 Boc-Lys(Ac)-AMC 的典型 HDAC 活性测定包括将底物与 HDAC 酶源(例如重组 HDAC 蛋白或含有 HDAC 活性的细胞裂解液)孵育。反应在合适的 HDAC 测定缓冲液中于 37°C 下进行指定时间。孵育后,加入含有细胞裂解缓冲液和胰蛋白酶的显色液以终止脱乙酰化反应并裂解脱乙酰化的底物。混合物在室温下孵育 15 分钟。使用微孔板读数仪测量释放的 AMC 的荧光强度,激发波长为 355 nm,发射波长为 460 nm。
细胞实验
对于基于细胞的HDAC活性检测,将细胞以每100 μL培养基6 × 10⁴个细胞的密度接种于96孔组织培养板中,并培养过夜。然后用测试化合物或溶剂处理细胞,随后加入25 μM Boc-Lys(Ac)-AMC。将培养板置于37°C、5% CO₂条件下孵育2-3小时。孵育结束后,加入含有细胞裂解缓冲液和胰蛋白酶的HDAC显色液,并在室温下孵育15分钟。使用酶标仪在激发/发射波长为355 nm/460 nm处测量荧光强度。
动物实验
由于Boc-Lys(Ac)-AMC是一种用于体外生化和细胞分析的底物,而非动物研究的治疗药物,因此没有针对该化合物的特定体内动物实验方案。它被用作研究工具,用于测量动物模型组织样本或细胞裂解液中的HDAC活性。在此类应用中,首先采集动物组织,进行裂解,然后将裂解液与Boc-Lys(Ac)-AMC孵育,以在体外测量HDAC活性。
药代性质 (ADME/PK)
Boc-Lys(Ac)-AMC 的具体药代动力学数据不适用,因为该化合物是生化分析的底物而非治疗药物。它并非设计用于全身给药或体内药理活性研究。该化合物作为小分子(分子量 445.51)的特性及其细胞渗透性使其适用于基于细胞的分析,但并非旨在作为候选药物进行药代动力学表征。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
Boc-Lys(Ac)-AMC 是一种用于生化分析的研究工具,而非治疗药物,因此其具体的毒性数据不适用。该化合物仅供实验室使用,不得用于人体消费或临床应用。处理该化合物时,应遵循标准的实验室安全预防措施,包括使用适当的个人防护装备。
参考文献

[1]. Measuring Histone Deacetylase Inhibition in the Brain. Curr Protoc Pharmacol. 2018 Jun;81(1):e41.

[2]. Selective cancer targeting with prodrugs activated by histone deacetylases and a tumour-associated protease. Nat Commun. 2013;4:2735.

其他信息
Boc-Lys(Ac)-AMC 是一种细胞可渗透的荧光 HDAC 底物(激发/发射波长 = 355 nm/460 nm)。其化学名称为 (S)-叔丁基 (6-乙酰氨基-1-((4-甲基-2-氧代-2H-色烯-7-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸酯。该化合物设计用于生物学研究和工业应用,不适用于个人临床或医疗用途。通常储存于 -20°C,密封并防潮。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C23H31N3O6
分子量
445.51
精确质量
445.221
CAS号
233691-67-3
PubChem CID
9846360
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
4.094
tPSA
126.74
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
6
可旋转键数目(RBC)
10
重原子数目
32
分子复杂度/Complexity
743
定义原子立体中心数目
1
SMILES
CC1=CC(=O)OC2=C1C=CC(=C2)NC(=O)[C@H](CCCCNC(=O)C)NC(=O)OC(C)(C)C
InChi Key
SUTRDULVNIPNLW-SFHVURJKSA-N
InChi Code
InChI=1S/C23H31N3O6/c1-14-12-20(28)31-19-13-16(9-10-17(14)19)25-21(29)18(8-6-7-11-24-15(2)27)26-22(30)32-23(3,4)5/h9-10,12-13,18H,6-8,11H2,1-5H3,(H,24,27)(H,25,29)(H,26,30)/t18-/m0/s1
化学名
tert-butyl N-[(2S)-6-acetamido-1-[(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)amino]-1-oxohexan-2-yl]carbamate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : 100 mg/mL (224.46 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.2446 mL 11.2231 mL 22.4462 mL
5 mM 0.4489 mL 2.2446 mL 4.4892 mL
10 mM 0.2245 mL 1.1223 mL 2.2446 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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