| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Isocitrate lyase (ICL)[1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
在白色念珠菌中，Cyclo（L-Phe-L-Val）（32μg/mL；2 d）分别降低MRC10（Δicl）、MRC11（Δicl+icl）和SC5314（野生型）中icl产物的水平[1]。
二酮哌嗪类化合物的ICL抑制活性和抗真菌活性[1] 根据之前报道的方法，对分离的二酮哌嗪进行了ICL抑制活性测试。分离化合物的抑制浓度（IC50）值如表1所示。在分离的二酮哌嗪中，环（L-Pro-L-Leu）和环（L-Pro-L-Val）对ICL酶的抑制活性较弱，IC50值分别为533.79μM和516.28μM（表1）Cyclo（L-Phe-L-Val）在受试化合物中表现出最强的抑制活性，但其抑制效力低于3-硝基丙酸酯，IC50值分别为109.50μM和15.95μM（图2a）。其他的则没有表现出抑制活性。为了确定抑制类型，用Cyclo（L-Phe-L-Val）（抑制剂）和苯肼（底物）进行动力学分析。抑制剂常数（Ki）由Dixon图计算得出。结果表明，Cyclo（L-Phe-L-Val）表现为混合抑制剂，Ki值为64.86μM（图2b）。真菌生长抑制试验表明，浓度为256μg/mL的二酮哌嗪对在葡萄糖中培养的SC5314没有抑制作用（表1）。 抑制C2底物的利用[1] 乙醛酸循环是白念珠菌毒力所必需的，白念珠菌可以在脂肪酸或其分解产物等丰富碳源的巨噬细胞中存活。当白色念珠菌被巨噬细胞吞噬时，代谢从糖酵解到乙醛酸循环的转变被激活，这样细胞就可以利用C2碳源。预计ICL抑制剂会降低营养吸收能力，阻碍病原体在巨噬细胞中的存活。为了确定环（L-Phe-L-Val）是否影响C2底物的使用，白色念珠菌菌株SC5314、ATCC10231、ATCC10259、ATCC11006和ATCC18804在含有2%葡萄糖或2%乙酸盐作为唯一碳源的YNB液体肉汤中生长。Cyclo（L-Phe-L-Val）在醋酸盐中对白色念珠菌表现出强烈的抑制作用（最低抑制浓度为32-64μg/mL），但在葡萄糖中对白色球菌没有抑制作用（表2）。这些结果表明，在C2碳利用条件下，Cyclo（L-Phe-L-Val）影响ICL介导的真菌增殖。 Cyclo（L-Phe-L-Val）对生长表型和icl表达的影响[1] 为了确定icl缺失突变体的细胞表型是否受到Cyclo（L-Phe-L-Val）的影响，使用白色念珠菌SC5314（野生型）和两个icl缺失突变株（MRC10和MRC11）进行了生长测定。预培养后，将这些菌株划线到含有2%葡萄糖或2%乙酸钾的YNB琼脂上，加入或不加入32μg/mL的Cyclo（L-Phe-L-Val）。所有菌株在含有葡萄糖和葡萄糖加化合物的平板上均正常生长。然而，当乙酸盐是唯一的碳源时，MRC10没有生长。此外，所有受试菌株在YNB琼脂平板上均未显示出生长（L-Phe-L-Val）（图3a）。我们进一步进行了半定量逆转录（RT）-PCR，以评估环（L-Phe-L-Val）对ICL表达的影响。当SC5314和MRC11在含有葡萄糖的YNB液体肉汤中生长时，在培养物中没有检测到ICL特异性PCR产物。然而，当这些细胞在含有醋酸盐的YNB肉汤中培养时，icl被强烈诱导。在icl表达条件下生长的细胞中，与icl产物相对应的PCR带强度随着环（L-Phe-L-Val）浓度的增加而降低（图3b）。在所有处理中都检测到GPDH表达，而与环（L-Phe-L-Val）暴露无关。这些结果表明，在C2碳利用条件下，cyclo（L-Phe-L-Val）抑制白色念珠菌中icl的表达。 |
| 酶活实验 |
ICL抑制试验[1]
在评估受试化合物[Cyclo（L-Phe-L-Val）]的ICL抑制活性之前，根据先前报告中描述的方法制备了来自白色念珠菌的重组ICL。根据前述方法测定试验化合物的ICL抑制活性。ICL抑制试验基于乙醛酸苯腙在用异柠檬酸盐和苯肼处理后在反应试剂中形成的原理。将每种试验化合物溶解在DMSO中。反应混合物由20 mM磷酸钠缓冲液（pH 7.0）、1.27 mM苏-DL（+）异柠檬酸盐、3.75 mM MgCl2、4.1 mM苯肼和2.5μg/mL纯化的ICL组成，在37°C下与或不与浓度范围为1-128μg/mL的测试化合物一起孵育30分钟。使用分光光度计在324 nm波长下观察到乙醛酸苯腙形成导致的吸光度强度增加。相对于DMSO对照（n=3）计算试验化合物的抑制活性。IC50值和ICL酶浓度的测定方法在之前的报告中已有描述。已知的ICL抑制剂3-硝基丙酸酯用作参考对照。 |
| 细胞实验 |
体外生长试验[1]
将白色念珠菌菌株在含有2%葡萄糖的YNB肉汤中在28°C下培养24小时，在15000×g下离心1分钟，用无菌蒸馏水洗涤两次。将每种试验化合物[Cyclo（L-Phe-L-Val）]溶解在DMSO中，用含有2%葡萄糖或2%乙酸钾的YNB肉汤稀释，浓度范围为1至256μg/mL。将额外的DMSO以0.5%的终浓度加入培养基中。将真菌菌株培养物（20μL）倒入96孔测定板中，终浓度为1×104个细胞/mL，总体积为100μL。培养板在28°C下孵育3天。阳性对照是两性霉素B，这是一种已知的抗真菌化合物。 生长表型和Icl表达分析[1] 白色念珠菌SC5314（野生型）和icl缺失突变体（MRC10和MRC11）在含有2%葡萄糖的YNB肉汤中于28°C下在旋转振荡器上培养24小时。收集细胞并如上所述洗涤。将收获的细胞在含有2%葡萄糖、2%乙酸钾或2%乙酸钾加32μg/mL的Cyclo（L-Phe-L-Val）的YNB琼脂平板上划线，并在28°C下孵育2天。对于icl表达分析，将收获的细胞加入含有2%葡萄糖、2%乙酸钾或2%乙酸钾加Cyclo（L-Phe-L-Val）（8、16或32μg/mL）的YNB液体肉汤中，并在28°C下孵育4小时。使用上述方法进行RNA提取、cDNA合成和半定量RT-PCR。GPDH用作负荷对照。 |
| 参考文献 |
[1]. Kim H, et al. Inhibitory Effects of Diketopiperazines from Marine-Derived Streptomyces puniceus on the Isocitrate Lyase of Candida albicans. Molecules. 2019 Jun 4;24(11):2111.
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| 其他信息 |
环-(L-Phe-L-Val) 是一种含氧有机化合物和含氮有机化合物，其功能与α-氨基酸相关。
据报道，环-(L-Val-L-Phe) 存在于西多氏曲霉(Aspergillus sydowii)中，并有相关数据。 乙醛酸循环是由关键酶异柠檬酸裂解酶(ICL)和苹果酸合酶催化的一系列补充反应，在微生物感染致病过程中发挥重要作用。与野生型相比，白色念珠菌(Candida albicans)的icl基因缺失突变株在小鼠体内表现出毒力降低。从海洋来源的链霉菌(Streptomyces puniceus Act1085)中分离得到的五种二酮哌嗪类化合物（均为小而稳定的环状肽）被评估了其对白色念珠菌ICL的抑制作用。这些化合物的结构是基于光谱数据并与先前报道的数据进行比较而阐明的。Cyclo(L-Phe-L-Val)被鉴定为一种有效的ICL抑制剂，其半数抑制浓度为27 μg/mL。基于icl缺失突变体的生长表型和icl表达分析，我们证明Cyclo(L-Phe-L-Val)在C2碳利用条件下抑制白色念珠菌中ICL基因的转录。[1] 二酮哌嗪类化合物具有多种生物活性。由于二酮哌嗪类化合物在药物化学领域具有诸多优势，例如抗蛋白水解稳定性、可模拟肽类药效团、构象刚性、取代基立体化学以及存在氢键供体和受体基团（有利于与靶点相互作用），许多研究团队都对其药理学潜力进行了研究。此外，二酮哌嗪类化合物易于合成，并可从天然产物中分离得到。本研究利用活性导向分离方法，从海洋放线菌S. puniceus中分离得到了五种二酮哌嗪类化合物：环(L-Phe-L-Pro)、环(L-Pro-L-Leu)、环(L-Pro-L-Tyr)、环(L-Pro-L-Val)和环(L-Phe-L-Val)。在这些二酮哌嗪类化合物中，环(L-Pro-L-Leu)、环(L-Pro-L-Val)和环(L-Phe-L-Val)表现出ICL抑制活性，IC50值在27–112 μg/mL范围内（表1）。分离得到的具有ICL抑制活性的二酮哌嗪类化合物的结构中含有异丙基，这表明异丙基在ICL活性抑制中发挥作用。[1]在结核分枝杆菌（一种细菌）和白色念珠菌（一种真菌）中，毒力导致icl基因的表达，该基因编码乙醛酸循环的一个组分，并在巨噬细胞持续感染过程中发挥作用。这些发现表明，乙醛酸循环抑制剂可能降低营养吸收能力，从而导致这些病原体在巨噬细胞中死亡。因此，本研究通过分析白色念珠菌SC5314（野生型）及其icl基因缺失突变株（MRC10和MRC11）的生长表型和icl转录水平，探讨了环(L-Phe-L-Val)对白色念珠菌ICL的影响。生长实验表明，环(L-Phe-L-Val)特异性抑制ICL酶，因为在含有醋酸盐和32 μg/mL该化合物的YNB琼脂平板上，未观察到SC5314或MRC11的生长。此外，环(L-Phe-L-Val)处理后，icl转录水平下降。总而言之，本研究发现了一种二酮哌嗪类化合物，它是一种有前景的抗真菌药物，其作用机制是通过抑制白色念珠菌的致病性。[1] |
| 分子式 |
C14H18N2O2
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|---|---|
| 分子量 |
246.30
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| 精确质量 |
246.136827
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| CAS号 |
35590-86-4
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| PubChem CID |
13783105
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| 外观&性状 |
Typically exists as White to off-white solid at room temperature
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| LogP |
1.525
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| tPSA |
58.2
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
2
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
18
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| 分子复杂度/Complexity |
322
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
CC(C)C1NC(=O)C(Cc2ccccc2)NC1=O
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| InChi Key |
OQQPOHUVAQPSHJ-RYUDHWBXSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C14H18N2O2/c1-9(2)12-14(18)15-11(13(17)16-12)8-10-6-4-3-5-7-10/h3-7,9,11-12H,8H2,1-2H3,(H,15,18)(H,16,17)/t11-,12-/m0/s1
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| 化学名 |
(3S,6S)-3-benzyl-6-propan-2-ylpiperazine-2,5-dione
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| 别名 |
cyclo(L-Phe-L-Val); 35590-86-4; Cyclo-(L-Val-L-Phe); (3S,6S)-3-benzyl-6-propan-2-ylpiperazine-2,5-dione; Cyclo-(L-Phe-L-Val); 3S-(1-methylethyl)-6S-(phenylmethyl)-2,5-piperazinedione; (3S,6S)-3-Benzyl-6-isopropylpiperazine-2,5-dione; (3S,6S)-3-benzyl-6-(propan-2-yl)piperazine-2,5-dione;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 8.33 mg/mL (33.82 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.0601 mL | 20.3004 mL | 40.6009 mL | |
| 5 mM | 0.8120 mL | 4.0601 mL | 8.1202 mL | |
| 10 mM | 0.4060 mL | 2.0300 mL | 4.0601 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
PPm
Antifungal agent 89
Antifungal agent 88
MoTPS1/2-IN-1
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
