| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 靶点 |
Isocitrate lyase (ICL)[1]
Cyclo(L-Phe-L-Val) targets isocitrate lyase (ICL), a key enzyme in the glyoxylate shunt that is essential for the growth of certain bacteria and fungi on fatty acids and acetate. The compound inhibits ICL with an IC50 of 27 μg/mL. Cyclo(L-Phe-L-Val) also inhibits the gene transcription of ICL in C. The compound's ability to inhibit ICL makes it a potential antimicrobial agent. It also has effects on axon sprouting in the spinal cord. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在白色念珠菌中，Cyclo(L-Phe-L-Val)（32 μg/mL；2 天）分别降低了 MRC10 (Δicl)、MRC11 (Δicl + ICL) 和 SC5314（野生型）中的 ICL 产物水平 [1]。
二酮哌嗪的 ICL 抑制活性和抗真菌活性[1] 根据先前报道的方法，测试了分离得到的二酮哌嗪的 ICL 抑制活性。表 1 显示了分离得到的化合物的抑制浓度 (IC50) 值。在分离得到的二酮哌嗪中，cyclo(L-Pro-L-Leu) 和 cyclo(L-Pro-L-Val) 对 ICL 酶表现出较弱的抑制活性，IC50 值分别为 533.79 μM 和 516.28 μM（表 1）。在所有测试化合物中，环(L-Phe-L-Val)表现出最强的抑制活性，但其抑制效力低于3-硝基丙酸酯，IC50值分别为109.50 μM和15.95 μM（图2a）。其他化合物均未表现出抑制活性。为了确定抑制类型，我们以环(L-Phe-L-Val)（抑制剂）和苯肼（底物）为模型进行了动力学分析。抑制常数(Ki)由Dixon图计算得出。结果表明，环(L-Phe-L-Val)表现为混合型抑制剂，Ki值为64.86 μM（图2b）。真菌生长抑制试验表明，浓度为 256 μg/mL 的二酮哌嗪类化合物对在葡萄糖培养基中培养的 SC5314 菌株没有抑制作用（表 1）。 C2 底物利用抑制[1] 乙醛酸循环是白色念珠菌毒力所必需的，白色念珠菌能够在碳源丰富的巨噬细胞中生存，例如脂肪酸或其分解产物。当白色念珠菌被巨噬细胞吞噬时，代谢途径会从糖酵解转向乙醛酸循环，从而使细胞能够利用 C2 碳源。预期 ICL 抑制剂会降低病原体的营养吸收能力，并阻碍其在巨噬细胞中的存活。为了确定环(L-Phe-L-Val)是否影响C2底物的利用，我们分别在以2%葡萄糖或2%乙酸盐为唯一碳源的YNB液体培养基中培养了白色念珠菌菌株SC5314、ATCC10231、ATCC10259、ATCC11006和ATCC18804。结果表明，环(L-Phe-L-Val)在乙酸盐培养基中对白色念珠菌具有显著的抑制作用（最低抑菌浓度为32–64 μg/mL），但在葡萄糖培养基中则无抑制作用（表2）。这些结果表明，在C2碳利用条件下，Cyclo(L-Phe-L-Val)会影响真菌的ICL介导的增殖。 Cyclo(L-Phe-L-Val)对生长表型和icl表达的影响[1] 为了确定icl缺失突变体的细胞表型是否受Cyclo(L-Phe-L-Val)的影响，我们使用白色念珠菌SC5314（野生型）和两个icl缺失突变体（MRC10和MRC11）进行了生长测定。预培养后，将这些菌株划线接种到含有2%葡萄糖或2%乙酸钾的YNB琼脂平板上，培养基中添加或不添加32 μg/mL的Cyclo(L-Phe-L-Val)。所有菌株在含葡萄糖和含葡萄糖加化合物的培养基上均正常生长。然而，当以乙酸盐为唯一碳源时，MRC10菌株无法生长。此外，所有测试菌株在含环(L-Phe-L-Val)的YNB琼脂平板上均未生长（图3a）。我们进一步进行了半定量逆转录(RT)-PCR，以评估环(L-Phe-L-Val)对ICL表达的影响。当SC5314和MRC11在含葡萄糖的YNB液体培养基中培养时，未检测到ICL特异性PCR产物。然而，当这些细胞在含乙酸盐的YNB培养基中培养时，icl基因被强烈诱导。在icl表达条件下培养的细胞中，与icl产物对应的PCR条带强度随着环(L-Phe-L-Val)浓度的增加而降低（图3b）。无论是否暴露于环(L-Phe-L-Val)，所有处理组均检测到GPDH表达。这些结果表明，在C2碳利用条件下，环(L-Phe-L-Val)抑制白色念珠菌中icl的表达。体外研究表明，环(L-Phe-L-Val)是异柠檬酸裂解酶(ICL)的强效抑制剂，IC50值为27 μg/mL。该化合物抑制ICL基因的转录。环(L-Phe-L-Val)是一种环状二肽，可自身诱导产生对葡萄球菌有效的抗菌物质。该化合物可促进脊髓挤压伤后轴突的萌发。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
目前尚未发表环(L-Phe-L-Val)作为治疗药物的详细体内活性数据。该化合物主要在体外被鉴定为一种ICL抑制剂和细菌代谢产物。其促进轴突萌发的能力表明，它可能具有在神经损伤修复中应用的体内潜力。需要进一步研究以评估其在动物模型中的疗效。
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| 酶活实验 |
ICL抑制试验[1]
在评估测试化合物[Cyclo(L-Phe-L-Val)]的ICL抑制活性之前，根据先前报道的方法制备了来自白色念珠菌的重组ICL。测试化合物的ICL抑制活性根据先前描述的方法测定。ICL抑制试验基于以下原理：在异柠檬酸和苯肼处理后，反应试剂中会生成乙醛酸苯腙。每种测试化合物均溶解于DMSO中。反应混合物由20 mM磷酸钠缓冲液（pH 7.0）、1.27 mM苏式-DL(+)异柠檬酸、3.75 mM氯化镁、4.1 mM苯肼和2.5 μg/mL纯化的ICL组成，在37 °C下与浓度范围为1–128 μg/mL的测试化合物孵育30分钟。使用分光光度计在324 nm波长处观察因乙醛酸苯腙生成而引起的吸光度强度增加。测试化合物的抑制活性以DMSO对照组为基准进行计算（n = 3）。IC50值和ICL酶浓度的测定方法已在之前的报告中描述。已知的ICL抑制剂3-硝基丙酸酯被用作参考对照。 环(L-Phe-L-Val)的异柠檬酸裂解酶(ICL)抑制活性可通过体外酶活性测定进行评估。在一个典型的测定中，将重组ICL与异柠檬酸、MgCl₂和不同浓度的环(L-Phe-L-Val)一起孵育。测定乙醛酸和琥珀酸的生成量，并计算IC₅₀值。ICL抑制的IC₅₀值为27 μg/mL。该化合物抑制ICL基因转录的能力可通过qPCR进行评估。 |
| 细胞实验 |
体外生长测定[1]
将白色念珠菌菌株在含2%葡萄糖的YNB肉汤中于28℃培养24小时，然后以15,000×g离心1分钟，并用无菌蒸馏水洗涤两次。将每种测试化合物[Cyclo(L-Phe-L-Val)]溶解于DMSO中，并用含2%葡萄糖或2%乙酸钾的YNB肉汤稀释至浓度范围为1至256 μg/mL。向培养基中添加DMSO至终浓度为0.5%。将真菌菌株培养物（20 μL）倒入96孔测定板中，终浓度为1 × 10⁴个细胞/mL，总体积为100 μL。将培养板在28℃下孵育3天。阳性对照为两性霉素B，它是一种已知的抗真菌化合物。 生长表型和Icl表达分析[1] 将白色念珠菌SC5314（野生型）和icl缺失突变体（MRC10和MRC11）在含有2%葡萄糖的YNB肉汤中，于28℃下在旋转摇床上培养24小时。收集细胞并按上述方法洗涤。将收集的细胞划线接种于含有2%葡萄糖、2%乙酸钾或2%乙酸钾加32 μg/mL环(L-Phe-L-Val)的YNB琼脂平板上，并在28℃下培养2天。为进行icl表达分析，将收集的细胞加入含有2%葡萄糖、2%乙酸钾或2%乙酸钾加Cyclo(L-Phe-L-Val)（8、16或32 μg/mL）的YNB液体培养基中，并在28 °C下孵育4小时。RNA提取、cDNA合成和半定量RT-PCR均采用先前描述的方法进行。GPDH用作内参。 可使用针对葡萄球菌属的标准药敏试验方法评估cyclo(L-Phe-L-Val)的抗菌活性。在典型的试验中，将细菌培养物接种于合适的培养基中，并用不同浓度的cyclo(L-Phe-L-Val)处理。采用肉汤微量稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)。可以通过测量培养上清液的活性来评估该化合物自身诱导抗菌物质产生的能力。 |
| 动物实验 |
目前尚未发表环(L-Phe-L-Val)作为治疗药物的详细体内动物模型数据。该化合物已被证明能促进脊髓挤压伤后轴突的萌发。未来的研究可能包括使用脊髓损伤小鼠模型来评估环(L-Phe-L-Val)在促进神经再生方面的体内疗效。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
目前尚未发表环(L-Phe-L-Val)的详细药代动力学数据。该化合物的分子量约为260.33 g/mol，分子式为C14H18N2O2，是一种环状二肽。需要进一步研究以阐明其吸收、分布、代谢和排泄特性，包括口服生物利用度、血浆蛋白结合率、清除率和半衰期。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚未公布环状(L-Phe-L-Val)的详细毒性数据。作为一种环状二肽和细菌代谢产物，它可能具有良好的安全性。需要进行全面的毒理学研究来评估其安全性，以用于潜在的治疗开发。该化合物仅供研究使用。
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| 参考文献 |
[1]. Kim H, et al. Inhibitory Effects of Diketopiperazines from Marine-Derived Streptomyces puniceus on the Isocitrate Lyase of Candida albicans. Molecules. 2019 Jun 4;24(11):2111.
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| 其他信息 |
环-(L-Phe-L-Val)是一种含氧和氮的有机化合物，其功能与α-氨基酸相关。环-(L-Val-L-Phe)已在西多氏曲霉(Aspergillus sydowii)中被报道，并已有相关数据。乙醛酸循环是由关键酶异柠檬酸裂解酶(ICL)和苹果酸合酶催化的一系列互补反应，在微生物感染的发病机制中发挥着重要作用。与野生型相比，白色念珠菌(Candida albicans)的icl基因缺失突变体在小鼠体内表现出毒力降低。从海洋来源的链霉菌(Streptomyces puniceus Act 1085)中分离得到的五种二酮哌嗪类化合物（均为小型稳定的环状肽）被评估了其对白色念珠菌ICL的抑制作用。这些化合物的结构是基于光谱数据并与先前报道的数据进行比较而确定的。环(L-Phe-L-Val)被鉴定为一种有效的ICL抑制剂，其半数抑制浓度(ICC)为27 μg/mL。基于ICL缺失突变体的生长表型和ICL表达分析，我们证实环(L-Phe-L-Val)在C2碳利用条件下抑制白色念珠菌中ICL基因的转录。[1] 二酮哌嗪类化合物具有多种生物活性。由于二酮哌嗪类化合物在药物化学中具有诸多优势，例如抗蛋白水解稳定性、模拟肽药效团的能力、构象刚性、取代基立体化学以及氢键供体和受体基团的存在（有利于与靶点相互作用），许多研究团队对其药理学潜力进行了研究。此外，二酮哌嗪类化合物易于合成，并且可以从天然产物中分离得到。采用活性导向分离法从海洋放线菌S. puniceus中分离得到五种二酮哌嗪类化合物：L-Phe-L-Pro、L-Pro-L-Leu、L-Pro-L-Tyr、L-Pro-L-Val和L-Phe-L-Val。其中，L-Pro-L-Leu、L-Pro-L-Val和L-Phe-L-Val表现出ICL抑制活性，IC50值范围为27至112 μg/mL（表1）。这些具有ICL抑制活性的二酮哌嗪类化合物的结构中均含有异丙基，表明异丙基在ICL抑制过程中发挥作用。 [1] 在结核分枝杆菌（一种细菌）和白色念珠菌（一种真菌）中，毒力会导致icl基因的表达，该基因编码乙醛酸循环的一个组分，并在巨噬细胞的持续感染中发挥作用。这些发现表明，乙醛酸循环抑制剂可能减少营养物质的吸收，从而导致这些病原体在巨噬细胞中死亡。因此，本研究通过分析白色念珠菌SC5314（野生型）及其ICL基因缺失突变体（MRC10和MRC11）的生长表型和ICL转录水平，研究了L-Phe-L-Val环对白色念珠菌ICL的影响。生长实验表明，L-Phe-L-Val环特异性地抑制了ICL酶，因为在含有醋酸盐和32 μg/mL该化合物的YNB琼脂平板上未观察到SC5314或MRC11的生长。此外，L-Phe-L-Val 处理后 ICL 转录水平降低。总之，本研究鉴定了一种二酮哌嗪类化合物，这是一种有前景的抗真菌药物，其作用机制是通过抑制白色念珠菌的致病性。[1]
环(L-Phe-L-Val) (CAS# 35590-86-4) 是一种由 L-苯丙氨酸和 L-缬氨酸组成的环状二肽。它是海绵细菌 Pseudoalteromonas sp. NJ6-3-1 的代谢产物，该细菌可自身诱导抗菌物质的产生。该化合物是异柠檬酸裂解酶 (ICL) 的强效抑制剂，IC50 为 27 μg/mL。它还能增强脊髓挤压伤后的轴突萌生。 Cyclo(L-Phe-L-Val) 是一种用于研究 ICL 抑制、抗菌活性和神经再生的研究工具。 |
| 分子式 |
C14H18N2O2
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|---|---|
| 分子量 |
246.30
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| 精确质量 |
246.136827
|
| CAS号 |
35590-86-4
|
| PubChem CID |
13783105
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| 外观&性状 |
Typically exists as White to off-white solid at room temperature
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| LogP |
1.525
|
| tPSA |
58.2
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
2
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
18
|
| 分子复杂度/Complexity |
322
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
|
| SMILES |
CC(C)C1NC(=O)C(Cc2ccccc2)NC1=O
|
| InChi Key |
OQQPOHUVAQPSHJ-RYUDHWBXSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C14H18N2O2/c1-9(2)12-14(18)15-11(13(17)16-12)8-10-6-4-3-5-7-10/h3-7,9,11-12H,8H2,1-2H3,(H,15,18)(H,16,17)/t11-,12-/m0/s1
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| 化学名 |
(3S,6S)-3-benzyl-6-propan-2-ylpiperazine-2,5-dione
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| 别名 |
cyclo(L-Phe-L-Val); 35590-86-4; Cyclo-(L-Val-L-Phe); (3S,6S)-3-benzyl-6-propan-2-ylpiperazine-2,5-dione; Cyclo-(L-Phe-L-Val); 3S-(1-methylethyl)-6S-(phenylmethyl)-2,5-piperazinedione; (3S,6S)-3-Benzyl-6-isopropylpiperazine-2,5-dione; (3S,6S)-3-benzyl-6-(propan-2-yl)piperazine-2,5-dione;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 8.33 mg/mL (33.82 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.0601 mL | 20.3004 mL | 40.6009 mL | |
| 5 mM | 0.8120 mL | 4.0601 mL | 8.1202 mL | |
| 10 mM | 0.4060 mL | 2.0300 mL | 4.0601 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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