Cytochrome C (cytochrome C)

别名: 9007-43-6; Cytochrome C [JAN]; Cytochrome C (JAN); Myohematin; Cromoci; 细胞色素C;细胞色素丙;细胞血素C; 细胞色素C 来源于牛;细胞色素C 来源于牛心脏;细胞色素C 马心 Cytochromes C;细胞色素C(马源);细胞色素C(牛源);细胞色素C(猪源); 细胞色素C,BR;细胞色素C、来源于马心脏; 细胞色素C、来源于牛心脏
目录号: V35074 纯度: ≥98%
细胞色素 C 是一种参与细胞生死决定的多功能酶。
Cytochrome C (cytochrome C) CAS号: 9007-43-6
产品类别: Apoptosis
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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纯度: =95.8%

产品描述
细胞色素C是一种参与细胞生死抉择的多功能酶。细胞色素C在细胞线粒体电子传递和内源性II型细胞凋亡(凋亡)中起着至关重要的作用。
细胞色素c是一种进化上保守的、由核基因编码的线粒体蛋白,在哺乳动物中由104个氨基酸组成,带高正电荷(等电点9.6)。它是电子传递链(ETC)的关键组成部分,对有氧能量产生至关重要,负责将电子从复合物III传递到复合物IV(细胞色素c氧化酶,CcO)。除了在呼吸作用中维持生命外,细胞色素c还是内源性(II型)细胞凋亡的关键介质。当它从线粒体释放到胞质溶胶中时,会与Apaf-1结合形成凋亡体,进而激活caspase。此外,细胞色素c在健康状态下作为活性氧(ROS)清除剂发挥作用,通过与p66Shc相互作用产生ROS,并在细胞凋亡过程中作为心磷脂过氧化物酶发挥作用。其多种功能受到严格调控,包括通过体内酪氨酸磷酸化。[1]
细胞色素c是一种小型血红素蛋白,属于I类c型细胞色素家族。该化合物的CAS号为9007-43-6,分子量约为13,000 Da。细胞色素c是一种多功能酶,在细胞线粒体电子传递和内源性II型细胞凋亡中发挥关键作用。在线粒体中,细胞色素c在电子传递链中将电子从复合物III(细胞色素bc1)传递到复合物IV(细胞色素c氧化酶),从而在可呼吸底物和氧气之间形成电子桥。细胞色素c从线粒体释放到细胞质后,会触发caspase级联反应的激活,最终导致细胞凋亡。细胞色素c广泛应用于生物化学研究和临床诊断。
生物活性&实验参考方法
靶点
As an endogenous protein, Cytochrome c interacts with several molecular partners. It transfers electrons to Cytochrome c oxidase (CcO, Complex IV). The reaction with isolated CcO showed half-maximal turnover at a substrate concentration of 2.5 μM for unphosphorylated cytochrome c, whereas Tyr97-phosphorylated cytochrome c required 5.5 μM. Maximal turnover for Tyr48-phosphorylated cytochrome c was more than 50% reduced compared to the unphosphorylated form. [1]
It binds to cardiolipin via two sites (A-site and C-site) and acts as a cardiolipin peroxidase. The phosphomimetic substitution Tyr48Glu decreased cytochrome c-cardiolipin binding by about 30% compared to wild-type. [1]
Upon release, it binds to Apaf-1 to form the apoptosome. A mutant containing the phosphomimetic amino acid Glu48 (instead of Tyr48) was completely incapable of inducing downstream caspase activation. [1]
Cytochrome c targets two key cellular processes: mitochondrial electron transport and apoptosis. In the electron transport chain, cytochrome c acts as an electron carrier, transferring electrons from Complex III to Complex IV, contributing to the generation of ATP through oxidative phosphorylation. In apoptosis, cytochrome c is released from the mitochondria into the cytoplasm, where it binds to apoptotic protease-activating factor 1 (Apaf-1), forming the apoptosome, which activates caspase-9 and downstream effector caspases, leading to programmed cell death. Cytochrome c's dual role in cellular energy production and apoptosis makes it a critical regulator of cell fate.
体外研究 (In Vitro)
哺乳动物细胞色素c氧化心磷脂,在细胞凋亡过程中与辅因子p66Shc共同产生活性氧(ROS),并在正常情况下清除ROS[1]。体外实验中,细胞色素c被用作生化分析的标准品,用于研究电子传递和细胞凋亡。该蛋白的电子传递活性可通过分光光度法测定,即通过追踪血红素基团的还原或氧化来测定。细胞色素c也用于无细胞凋亡分析,评估其在Apaf-1和dATP存在下激活caspase的能力。在基于细胞的分析中,线粒体释放细胞色素c被用作细胞凋亡的标志。细胞色素c是内源性凋亡途径的关键参与者,其从线粒体释放是程序性细胞死亡执行过程中的关键步骤。
体内研究 (In Vivo)
在体内,细胞色素c对于正常的细胞功能至关重要,因为它是线粒体电子传递链的关键组成部分。该蛋白广泛表达于真核细胞中,并通过氧化磷酸化作用参与ATP的生成。细胞色素c在细胞凋亡中的作用对于正常的发育和组织稳态,以及清除受损或感染的细胞也至关重要。细胞色素c功能失调与多种疾病相关,包括神经退行性疾病、心血管疾病和癌症。细胞色素c在临床诊断中被用作线粒体功能障碍和细胞凋亡的标志物。
酶活实验
细胞色素c氧化酶(CcO)活性测定:测定了细胞色素c与分离的细胞色素c氧化酶(CcO)的反应。对于Tyr97磷酸化的细胞色素c,观察到增强的信号动力学,与未磷酸化的细胞色素c相比,半数最大周转率对应的底物浓度为5.5 μM(未磷酸化的细胞色素c为2.5 μM)。对于Tyr48磷酸化的细胞色素c,动力学呈双曲线型,但磷酸化形式的最大周转率降低了50%以上。[1]
心磷脂过氧化物酶活性测定:使用电子顺磁共振(EPR)检测酪氨酰自由基的生成来测定细胞色素c的过氧化物酶活性。在不可氧化的心磷脂(TOCL)和H₂O₂存在下,检测到了酪氨酰自由基的强EPR信号。在可氧化心磷脂(TLCL)存在的情况下,酪氨酸自由基EPR信号的强度显著降低(降低30 ± 7%),这归因于该自由基参与心磷脂过氧化反应而被淬灭。[1]
线粒体膜电位测量:采用多种方法,在灌注的大鼠心脏、完整的培养成纤维细胞、神经母细胞瘤细胞等中,测量了生理条件下(80-140 mV)的线粒体膜电位(ΔΨₘ)。结果表明,较高的ΔΨₘ(>140 mV)会导致活性氧(ROS)呈指数级增长。[1]
细胞色素c的体外酶活性测定包括测量其电子传递活性。该测定通常使用纯化的细胞色素c和细胞色素c氧化酶(复合物IV)或其他电子受体。细胞色素c被还原剂(例如连二亚硫酸钠)或复合物III还原的过程可通过分光光度法在550 nm处进行监测。还原态细胞色素c被细胞色素c氧化酶氧化的过程也可通过分光光度法进行监测。细胞色素c的活性以电子传递速率表示。在细胞凋亡检测中,将细胞色素c添加到细胞裂解液或纯化的Apaf-1和procaspase-9中,并使用荧光底物检测caspase的激活情况。
细胞实验
体外细胞细胞检测方法通过评估细胞色素c从线粒体的释放来检测细胞凋亡。细胞经凋亡刺激物(例如星形孢菌素、依托泊苷或紫外线照射)处理后,在不同时间点收集细胞。通过差速离心法制备线粒体和细胞质组分。采用蛋白质印迹法或酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞质组分中的细胞色素c水平。细胞色素c的释放与caspase的激活和其他凋亡标志物相关。使用荧光染料(例如JC-1或TMRM)评估线粒体膜电位。通过测量其他线粒体蛋白的释放来评估线粒体外膜的完整性。
动物实验
由于细胞色素c是细胞的内源性成分而非药物,因此通常不进行体内动物实验。然而,细胞色素c释放对细胞凋亡和疾病进展的影响已在动物模型中得到研究。在缺血再灌注损伤、神经退行性疾病和癌症模型中,线粒体释放细胞色素c被用作细胞死亡的标志物。调节细胞色素c释放的化合物(例如,线粒体通透性转换孔抑制剂)的作用也在体内进行研究。组织和体液中的细胞色素c水平被用作线粒体功能障碍和细胞凋亡的生物标志物。
药代性质 (ADME/PK)
细胞色素c是一种内源性蛋白质,其药代动力学特性不适用于药物研发。然而,该蛋白质的周转和降解受到细胞机制的调控。细胞色素c在细胞质中合成,并被转运至线粒体,参与电子传递链的组装。该蛋白质的稳定性和半衰期取决于细胞环境。在科研应用中,细胞色素c通常以纯化蛋白的形式提供,该蛋白提取自牛或马的心脏组织。在适宜条件下,该蛋白储存于-20℃,并可长期保持稳定。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
细胞色素c是一种内源性蛋白质,在正常的生理条件下不具有毒性。然而,细胞色素c从线粒体释放到细胞质中会触发细胞凋亡,这可能有利(例如,清除受损细胞),也可能有害(例如,缺血再灌注损伤或神经退行性疾病中过度细胞死亡)。作为一种研究试剂,只要采取标准的实验室预防措施,细胞色素c通常被认为是安全的。该蛋白质仅供研究使用,不得用于人类治疗。
参考文献

[1]. The multiple functions of cytochrome c and their regulation in life and death decisions of the mammalian cell: From respiration to apoptosis. Mitochondrion. 2011 May;11(3):369-81.

其他信息
C型细胞色素存在于真核生物线粒体中。它们作为氧化还原中间体,从线粒体电子传递复合物III接受电子并将其传递给线粒体电子传递复合物IV。
多功能性:细胞色素c是一种多功能酶,参与电子传递(呼吸作用)、自由基清除、活性氧(ROS)生成(通过p66Shc)、心磷脂过氧化和凋亡小体形成(细胞凋亡)。[1]
磷酸化调控:细胞色素c在体内以组织特异性方式进行磷酸化。已鉴定出四个磷酸化位点:Tyr97(牛心)、Tyr48(牛肝)和Thr28/Ser47(人骨骼肌)。这些磷酸化抑制呼吸作用并影响细胞凋亡。 [1]心磷脂氧化:在细胞凋亡过程中,心磷脂(通常位于线粒体内膜)易位至线粒体外膜。细胞色素c通过C位点(涉及Phe10和Tyr97)与心磷脂结合,并在H₂O₂存在下催化其氧化。这种氧化作用降低了心磷脂与细胞色素c的亲和力,促进其释放。Tyr67被认为是过氧化物酶活性的主要贡献者。[1]治疗潜力:在脓毒症小鼠模型中,静脉注射外源性细胞色素c可改善线粒体功能,并将存活率从15%(对照组)提高到约50%。注射的细胞色素c被心肌细胞摄取。其机制可能与细胞色素c中的细胞穿透肽表位有关。 [1]
同工型:啮齿动物中存在一种睾丸特异性细胞色素c同工型(T-Cytc)(但在人类中为假基因)。与体细胞同工型相比,T-Cytc的H₂O₂还原活性提高了三倍,凋亡活性提高了约四倍。[1]
细胞色素c是一种特性明确的蛋白质,其在细胞能量代谢和凋亡中的作用已被广泛研究。该蛋白的结构和功能已被详细阐明,使其成为研究电子传递蛋白和凋亡的理想模型系统。细胞色素c被用作生化研究的标准品,以及用于评估线粒体功能和凋亡的临床诊断标志物。该蛋白可从化学试剂供应商处获得,用于研究用途,通常从牛或马的心脏组织中纯化而来。细胞色素 c 在能量产生和细胞死亡中发挥双重作用,使其成为研究新陈代谢和细胞命运交汇点的理想分子。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子量
13000 (average)
CAS号
9007-43-6
PubChem CID
16057918
外观&性状
Brown to reddish brown solid powder
沸点
1323.5ºC at 760 mmHg
熔点
300ºC
闪点
754.2ºC
氢键供体(HBD)数目
6
氢键受体(HBA)数目
14
可旋转键数目(RBC)
16
重原子数目
59
分子复杂度/Complexity
1420
定义原子立体中心数目
0
SMILES
CC1=C(C2=CC3=C(C(=C([N-]3)C=C4C(=C(C(=N4)C=C5C(=C(C(=N5)C=C1[N-]2)C)C(C)SCC(C(=O)NC)N)C)C(C)SCC(C(=O)NC)N)C)CCC(=O)O)CCC(=O)O.[Fe+2]
InChi Key
WFVBWSTZNVJEAY-UHFFFAOYSA-L
InChi Code
InChI=1S/C42H54N8O6S2.Fe/c1-19-25(9-11-37(51)52)33-16-34-26(10-12-38(53)54)20(2)30(48-34)14-35-40(24(6)58-18-28(44)42(56)46-8)22(4)32(50-35)15-36-39(21(3)31(49-36)13-29(19)47-33)23(5)57-17-27(43)41(55)45-7;/h13-16,23-24,27-28H,9-12,17-18,43-44H2,1-8H3,(H6,45,46,47,48,49,50,51,52,53,54,55,56);/q;+2/p-2
化学名
3-[8,13-bis[1-[2-amino-3-(methylamino)-3-oxopropyl]sulfanylethyl]-18-(2-carboxyethyl)-3,7,12,17-tetramethylporphyrin-21,24-diid-2-yl]propanoic acid;iron(2+)
别名
9007-43-6; Cytochrome C [JAN]; Cytochrome C (JAN); Myohematin; Cromoci;
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O : 100 mg/mL
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们