| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
WDR5 (WD repeat domain 5 protein) - binds to the WIN site of WDR5. IC50 (FP assay) = 8.6 ± 1.3 nM. Kd (ITC assay) = 11.6 ± 4.0 nM. [1]
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
- 在荧光偏振（FP）实验中，DDO-2093对WDR5蛋白显示出高结合亲和力，IC50为8.6 ± 1.3 nM。[1]
- 等温滴定量热法（ITC）证实DDO-2093直接结合WDR5，Kd值为11.6 ± 4.0 nM，结合化学计量比为1:1，热力学参数为：ΔH = -10.2 ± 0.2 kcal·mol⁻¹，-TΔS = -0.629 kcal·mol⁻¹，表明结合过程是焓/熵协同驱动的。[1] - DDO-2093在体外选择性抑制MLL1 HMT活性，在测试浓度范围内不影响其他甲基转移酶，包括G9a（H3K9）、DOT1L（H3K79）、EZH2（H3K27）、SET8（H4K20）和PRMT5。[1] - DDO-2093抑制携带MLL-AF4融合蛋白的人急性白血病细胞MV4-11的增殖，IC50为8.0 ± 1.2 μM；抑制携带MLL-AF9融合蛋白的MOLM-13细胞增殖，IC50为9.9 ± 1.9 μM。对非癌性人脐静脉内皮细胞（HUVEC）无明显毒性（IC50 > 100 μM）。[1] - 在MV4-11细胞中，DDO-2093（1、2.5、5、10 μM，处理7天）剂量依赖性地降低组蛋白H3赖氨酸4的单甲基化（H3K4me1）、二甲基化（H3K4me2）和三甲基化（H3K4me3）水平。[1] - DDO-2093（1、2.5、5 μM，处理7天）显著降低MV4-11细胞中MLL1靶基因HOXA9和Meis1的表达。在5 μM浓度下，HOXA9基因表达降低约60%，Meis1基因表达降低约70%。[1] - 分子对接研究表明，DDO-2093占据WDR5的WIN位点（PDB: 4IA9）。苯基三唑部分与Phe133形成π-π堆积相互作用。苯甲酰胺核心的酰胺质子与Ser91形成直接氢键，羰基与Cys261形成水桥氢键。N-甲基哌嗪部分与Cys261的骨架羰基形成水介导的氢键。2-氯-3-甲基-4-氟-5-氨基苯基占据疏水性P4口袋，并与Asp107形成额外的氢键。[1] DDO-2093（5 μM；预处理 7 天）可抑制依赖于 MLL 融合蛋白的 HOXA9 和 Meis1 基因表达 [1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
- MV4-11异种移植瘤模型： 在携带MV4-11异种移植瘤的雌性裸鼠中，DDO-2093以20、40和80 mg/kg的剂量腹腔注射，连续给药21天，以剂量依赖性方式显著抑制肿瘤生长。20、40和80 mg/kg剂量下的肿瘤体积生长抑制率分别为13.7%、37.6%和63.9%。80 mg/kg剂量下的肿瘤重量生长抑制率为60.0%，与参考药物阿糖胞苷（ARAC，100 mg/kg）相当。治疗期间未观察到小鼠行为或体重的明显变化。[1]
- 在同一异种移植瘤模型中，DDO-2093剂量依赖性地降低肿瘤组织中H3K4me1、H3K4me2和H3K4me3的水平，并降低HOXA9和Meis1基因的表达，证实了药效学生物标志物的变化。[1] DDO-2093（20-80 mg/kg；腹腔注射；每隔一天，持续 21 天）以剂量依赖性方式显着抑制肿瘤大小和重量 [1]。 |
| 酶活实验 |
- 荧光偏振（FP）实验： 使用荧光偏振法评估化合物对WDR5的结合亲和力。该实验测量荧光标记的探针从WDR5结合位点被置换的情况。使用GraphPad Prism 6.0通过非线性回归和归一化剂量反应拟合计算IC50值。[1]
- 等温滴定量热法（ITC）： ITC在25°C下使用ITC200系统进行。将化合物注入含有300 μL 20 μM WDR5的样品池中，使用2 μL注射，共19次注射，注射间隔2.5分钟，搅拌速度为750 rpm。使用Origin 7.0软件分析数据。确定结合参数（Kd、ΔH、-TΔS、化学计量比）。[1] - 体外MLL HMT功能实验： MLL1酶促反应在室温下进行60分钟，反应体系为50 μL，包含甲基转移酶测定缓冲液（50 mM HEPES，100 mM NaCl，1.0 mM EDTA，5%甘油，pH 7.8）、1 μM SAM、MLL蛋白复合物和待测化合物。反应在预包被组蛋白底物的孔板中进行。用封闭缓冲液终止甲基化反应后，加入一抗和二抗。加入HRP化学发光底物，在酶标仪中测量发光值。使用GraphPad Prism 6.0计算IC50值。[1] - AlphaScreen选择性实验： 使用AlphaScreen实验评估化合物对其他甲基转移酶（G9a、Dot1L、EZH2、PRMT5、SET8）的活性。实验在384孔白板中进行。缓冲液含有10 mM PBS、化合物、SAM和蛋白质，室温混合30分钟。然后加入受体珠和底物抗体，孵育30分钟，最后加入链霉亲和素偶联的供体珠。在AlphaScreen酶标仪上读取信号。[1] |
| 细胞实验 |
- 细胞增殖实验（CCK8）： 将MV4-11、MOLM-13和K562细胞以每孔8,000个细胞接种在96孔板中，用不同浓度的化合物处理72小时，培养基中DMSO终浓度为0.2%。使用CCK8（WST-8）评估细胞活力，在450 nm处测量吸光度。对于HUVEC细胞，处理24小时后使用MTT法。使用GraphPad Prism 6.0计算IC50值。[1]
- Western blot分析： MV4-11细胞用不同浓度的DDO-2093或DMSO预处理7天。细胞在裂解缓冲液（50 mM Tris-Cl pH 7.6，150 mM NaCl，1 mM EDTA，1% NP-40，0.2 mM PMSF，0.1 mM NaF，1.0 mM DTT）中裂解30分钟。离心后，通过BCA法测定蛋白浓度。等量蛋白通过SDS-PAGE分离，电转到PVDF膜上，用5%脱脂牛奶封闭，与一抗（抗-H3K4me1、抗-H3K4me2、抗-H3K4me3、抗-β-actin）在4°C孵育过夜，然后与DyLight 800标记的二抗孵育。使用Odyssey红外成像系统扫描膜。[1] - RNA提取和RT-PCR： MV4-11细胞用不同浓度的DDO-2093或DMSO处理7天。使用TRIzol提取总RNA。评估RNA浓度后，使用PrimeScript RT试剂盒进行逆转录。使用STEPONE SYSTEM快速实时PCR系统进行HOXA9和Meis1的实时PCR分析。以GAPDH作为内参。引物序列：HOXA9（正义：TACGTGGACTCGTTCTCGTT，反义：CGTCGCTCGTTGAGCTAGGAAG）；Meis1（正义：GGCGATGGATGGAGTAGGC，反义：GGGTACTGATGCCGAGTGCAG）。[1] 蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： MV4-11 细胞 测试浓度： 1、2.5、5 和 10 μM 孵育时间：7天 实验结果：H3K4单甲基化、二甲基化和三甲基化的剂量依赖性减少。 |
| 动物实验 |
- 体内异种移植瘤研究： 雌性裸鼠右侧 flank 皮下注射MV4-11细胞（5 × 10⁶）。当平均肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为不同组（每组6只）。DDO-2093以20、40和80 mg/kg的剂量腹腔注射，每隔一天给药一次，共21天。阿糖胞苷（ARAC，100 mg/kg）作为参考药物。每2天监测一次肿瘤生长和体重。肿瘤体积计算公式：（短径）² ×（长径）/2。生长抑制率（GI%） = [1 - (TVt - TV₀)/(CVt - CV₀)] × 100%。肿瘤重量抑制率（TGI%）= (对照组平均瘤重 - 治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重 × 100%。治疗后，收集肿瘤用于Western blot和RT-PCR分析。[1]
- 初步短期毒性实验： Balb/c雌性小鼠随机分为不同组，腹腔注射化合物，剂量为80 mg/kg/天，连续10天。监测体重和死亡率以评估毒性。[1] - 亚急性毒性评估： 雌性ICR小鼠（6-8周龄）分为4组（每组6只）：对照组、DDO-2093有效剂量组（80 mg/kg）、中剂量组（200 mg/kg）和高剂量组（300 mg/kg）。所有小鼠每天腹腔注射相应剂量，连续14天。测量并记录体重。第15天处死小鼠，取出心脏、肝脏、脾脏、肺和肾脏。测量器官重量，并通过苏木精-伊红（HE）染色检查器官。[1] 动物/疾病模型：雌性裸鼠（MV4-11人白血病癌异种移植瘤）[1] 剂量：20 mg/kg、40 mg/kg和80 mg/kg 给药途径：腹腔注射（ip）；每隔一天注射一次，持续21天 实验结果：计算得出，20 mg/kg、40 mg/kg和80 mg/kg剂量组的肿瘤体积生长抑制率（GI）分别为13.7%、37.6%和63.9%。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
- 渗透性（PAMPA）： 通过平行人工膜渗透性实验测定，DDO-2093在pH 7.4条件下的渗透性（Pe）值为17.2 ± 4.8 × 10⁻⁶ cm/s。与联苯化合物6（1.6 × 10⁻⁶ cm/s）相比，渗透性显著提高。[1]
- 溶解度： 通过Gemini Profiler仪器上的电位滴定法测定，DDO-2093在pH 7.4条件下的水溶性为245.9 μmol/L。与联苯化合物6（199.1 μmol/L）相比，溶解度显著提高。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
- 在Balb/c小鼠的初步短期毒性研究中（80 mg/kg/天腹腔注射，连续10天），根据体重和死亡率监测未观察到明显毒性。[1]
- 在ICR小鼠的亚急性毒性评估中（80、200、300 mg/kg/天腹腔注射，连续14天），治疗期间未观察到明显的动物毒性迹象。与对照组相比，治疗组体重逐渐增加。未观察到行为异常。给予DDO-2093后，心脏、肝脏、脾脏、肺和肾脏的器官/体重比无显著变化。即使在最高剂量（300 mg/kg）下，正常小鼠器官的苏木精-伊红（HE）染色也未显示明显的组织损伤。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
- DDO-2093（化合物24）是通过点击化学合成的苯基三唑衍生物。它是从联苯骨架化合物DDO-2117（化合物6）优化而来，旨在保持高WDR5结合亲和力的同时改善理化性质。[1]
- 该化合物结合于WDR5的WIN位点，阻断MLL1-WDR5蛋白-蛋白相互作用，这对于MLL复合物的H3K4甲基转移酶活性至关重要。破坏这种相互作用可抑制MLL1依赖性基因表达（如HOXA9和Meis1），并抑制白血病细胞生长。[1] - DDO-2093对MLL重排白血病细胞（MV4-11、MOLM-13）具有选择性，而对无MLL融合的K562细胞和非癌性HUVEC细胞作用较弱。[1] - 该化合物显示出良好的安全性特征，具有较大的治疗窗口（在300 mg/kg的高剂量下未观察到明显的亚急性毒性，该剂量是有效剂量80 mg/kg的3.75倍）。[1] |
| 分子式 |
C29H37CLFN9O3
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|---|---|
| 分子量 |
614.11
|
| 精确质量 |
613.269
|
| 元素分析 |
C, 56.72; H, 6.07; Cl, 5.77; F, 3.09; N, 20.53; O, 7.82
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| CAS号 |
2250024-74-7
|
| 相关CAS号 |
DDO-2093 dihydrochloride
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| PubChem CID |
156112343
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
2.2
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| tPSA |
134
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
10
|
| 可旋转键数目(RBC) |
9
|
| 重原子数目 |
43
|
| 分子复杂度/Complexity |
926
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
N1(C2=CC=C(N3CCN(C)CC3)C(NC(=O)C3=CC(N)=C(F)C(C)=C3Cl)=C2)C=C(C(NCCCN2CCOCC2)=O)N=N1
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| InChi Key |
MPTAUAHHFUFKAG-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C29H37ClFN9O3/c1-19-26(30)21(17-22(32)27(19)31)28(41)34-23-16-20(4-5-25(23)39-10-8-37(2)9-11-39)40-18-24(35-36-40)29(42)33-6-3-7-38-12-14-43-15-13-38/h4-5,16-18H,3,6-15,32H2,1-2H3,(H,33,42)(H,34,41)
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| 化学名 |
1-[3-[(5-amino-2-chloro-4-fluoro-3-methylbenzoyl)amino]-4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl]-N-(3-morpholin-4-ylpropyl)triazole-4-carboxamide
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| 别名 |
DDO-2093; DDO 2093; 2250024-74-7; DDO2093; CHEMBL4861912; orb1691071; SCHEMBL23035425;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6284 mL | 8.1419 mL | 16.2837 mL | |
| 5 mM | 0.3257 mL | 1.6284 mL | 3.2567 mL | |
| 10 mM | 0.1628 mL | 0.8142 mL | 1.6284 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
BI-9466
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(Rac)-NSD2-PWWP1-IN-4
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