| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
eIF2B, integrated stress response (ISR)[1]
DNL343 targets eukaryotic initiation factor 2B (eIF2B), a key regulator of protein synthesis that is inhibited during the integrated stress response. The compound activates eIF2B with an IC50 of 9.8 nM in a reporter assay. By activating eIF2B, DNL343 restores protein synthesis and cellular function under conditions of stress. The compound is a derivative of 2BAct and exhibits selectivity for eIF2B activation. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在ALS体外模型中，利用荧光显微镜评估了DNL343对ISR的抑制作用。将共表达可诱导型GFP标记的胞质TDP43和应激颗粒标记物G3BP1-mCherry的H4细胞用亚砷酸钠处理2小时以诱导应激颗粒形成。在2小时的时间进程中，DNL343以剂量依赖的方式抑制TDP43(86–414)阳性应激颗粒的形成，IC50值为13 nM。该数据支持DNL343在疾病模型中细胞应激后能有效抑制ISR通路[1]。
在无细胞生化实验中，DNL343能有效激活eIF2B，IC50值为9.8 nM。该活性表明该化合物能直接结合并激活eIF2B复合物。该化合物通过阻止eIF2B的磷酸化依赖性抑制来抑制整合应激反应。体外实验还表明，DNL343能够抑制C9ORF72二肽重复序列诱导的应激颗粒组装。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
为了证明DNL343在体内能够有效抑制中枢神经系统ISR的抑制，我们利用了Eif2b5 R191H小鼠模型，该模型模拟了由中枢神经系统慢性ISR激活引起的神经退行性疾病。我们连续两天，每天一次通过灌胃法给纯合突变小鼠及其野生型同窝小鼠灌胃给予DNL343（50 mg/kg）。两组小鼠的脑组织中游离药物浓度均与血浆中游离药物浓度相当，这与在大鼠和食蟹猴中观察到的高中枢神经系统渗透率一致（见上文）。正如我们以及其他研究者在模型表征中所展示的那样，在2.9-3.8月龄时，纯合突变小鼠脑组织中ISR转录标记物的表达水平高于野生型对照组。急性DNL343治疗降低了这些ISR标志物，表明DNL343能有效抑制大脑中ISR的过度激活[1]。
在基于细胞的实验中，DNL343抑制了中枢神经系统中整合应激反应（ISR）的活性。该化合物可逆转细胞模型中的神经退行性变和神经炎症。DNL343抑制了C9ORF72二肽重复序列诱导的应激颗粒组装，提示其在肌萎缩侧索硬化症（ALS）治疗中具有潜在的应用价值。该化合物具有脑渗透性，能够在中枢神经系统中发挥作用。 |
| 酶活实验 |
荧光素酶检测[1]
将ATF4报告基因克隆17细胞以2500个细胞/孔的密度接种于384孔板中，每孔15 μL。次日，使用Echo Acoustic液体处理工作站，将DNL343化合物以750 nL的体积点样至孔板中（最终浓度为10 μM，1/2 log稀释）。然后向稀释板中加入培养基（50 μL/孔），以配制合适的稀释度，用于后续加入细胞。使用Apricot液体处理工作站，将含有DNL343的培养基（10 μL）转移至细胞培养板中。将细胞与DNL343在37 °C、5% CO2条件下孵育45分钟，然后加入5 μL亚砷酸钠，使其最终浓度达到30 μM。最后，在药物和应激条件下继续孵育6小时。每块板上均设有对照孔，分别标记为“低浓度”（不含亚砷酸钠）和“高浓度”（30 μM 亚砷酸钠，不含 DNL343）。 NanoGlo 检测缓冲液和底物解冻后，在室温下放置 1 小时（NanoGlo 荧光素酶试剂盒 (Promega N1150)）。制备工作试剂时，在检测前将底物（200 μL/板）直接加入缓冲液（10 mL/板）中。孵育 6 小时后，向每个孔中加入 30 μL 工作试剂（与样品体积等量）。然后将板以 600 rpm 的转速振荡 3 分钟以混匀，最后使用 EnVision 酶标仪读取发光值。NLuc 报告基因定量后，DNL343 的抑制率按以下公式计算：100 – [(样品 – 低浓度)/(高浓度 – 低浓度) × 100]。 “高”（亚砷酸钠，无化合物）和“低”（无亚砷酸钠）由每块板上的对照定义。 eIF2B 激活的体外检测通常涉及在化合物存在下测量 eIF2B 的鸟嘌呤核苷酸交换活性。该检测使用纯化的 eIF2B 复合物和放射性标记或荧光标记的 eIF2 作为底物。IC50 为 9.8 nM，由剂量反应曲线确定。可通过评估细胞裂解液中 eIF2α 的磷酸化状态以及 ISR 靶基因（如 ATF4 和 CHOP）的表达来测量其对 ISR 的影响。 |
| 细胞实验 |
H4诱导型TDP43细胞中应激颗粒IC50值[1]
将H4细胞分别用表达G3BP1-mCherry和强力霉素诱导型GFP-TDP43(86–414)的慢病毒感染，这些慢病毒分别由pLVX-CMV_IRES-Hygro和pLVX-TetOne_IRES-Puro构建，以建立稳定的细胞系。细胞在添加1%丙酮酸钠和10%无四环素胎牛血清的DMEM培养基中，于37℃、5% CO2条件下培养。[1] 进行应激颗粒测定时，将细胞接种于PDL包被的96孔Cell Carrier Ultra培养板中。在接种时加入1 μg/mL强力霉素诱导转基因表达。诱导后约24小时，使用液体处理工作站（Tecan D300e 数字分液器）对细胞进行DNL343预处理，起始浓度为10 mM，并进行10个浓度梯度（1/2 log）的稀释，在37℃、5% CO₂条件下孵育30分钟。然后，向细胞中加入200 μM亚砷酸钠，在37℃、5% CO₂条件下孵育2小时。之后，用4%多聚甲醛固定细胞，并在室温下孵育10分钟。固定后，用1×PBS洗涤细胞两次，并在室温下用0.1% Triton X-100透化20分钟。用3% BSA + 0.1% Triton X-100封闭细胞1小时。最后，用DAPI（1:5000，Thermo Fisher）在室温下染色1小时。随后用 1× PBS 洗涤细胞 4 次。之后使用 Opera Phenix 高内涵显微镜和 40× 物镜对培养板进行成像。为了量化应激颗粒和 TDP43 斑点，使用 Harmony HCS 软件对每个通道中的斑点进行分割和自动识别，并计算每个细胞的总斑点面积。该值用于通过以下公式计算 DNL343 的抑制百分比：100 – [(样本 – 低浓度)/(高浓度 – 低浓度) × 100]，其中高浓度（亚砷酸钠，无 DNL343）和低浓度（无亚砷酸钠）定义为对照。 基于细胞的 DNL343 检测包括培养神经元细胞系或原代神经元，并用浓度范围为 1 nM 至 10 μM 的化合物处理它们。细胞暴露于应激条件（例如，毒胡萝卜素、衣霉素）以诱导 ISR。通过检测eIF2α磷酸化、应激颗粒形成以及ISR靶基因的表达来评估DNL343对ISR抑制的影响。在细胞模型中评估该化合物抑制C9ORF72二肽重复序列诱导的应激颗粒组装的能力。 |
| 动物实验 |
DNL343 灌胃给药制剂 [1]
DNL343 配制成 0.5% 甲基纤维素溶液悬浮液。简而言之，将 DNL343 置于独立的玻璃小瓶中，并加入纯化水（最终体积的一半）。使用探头式超声波仪，以 40% 的振幅轻柔地混合混合物 10 次，每次脉冲超声持续 20 秒。最终得到颗粒分散均匀的悬浮液。将等体积的 1% 甲基纤维素溶液（浓度为最终目标浓度的 2 倍，体积为最终目标体积的一半）加入上述悬浮液中，并涡旋振荡至均匀。目测检查悬浮液是否均匀分布。给药溶液在首次给药当天配制，并置于实验室旋转器上，在 4 °C 下保存直至使用。 DNL343 混悬液在给药时重新混匀，并以 10 mL/kg 体重的剂量通过灌胃法给药。[1] 小鼠组织采集[1] 使用 2.5% 三溴乙醇对动物进行人道麻醉。通过心脏穿刺采集全血至 EDTA 抗凝管中，并在 4 °C 下以 12,700 rpm 离心 7 分钟，然后收集上层血浆进行分析。用冰冷的 PBS 对动物进行经心灌注。然后收集组织，称重，用干冰冷冻，并在 80 °C 下保存以备后续分析。[1] DNL343 药代动力学[1] 使用 Quintara Discovery 公司的 LC-MS/MS 测定小鼠脑和血浆中的 DNL343 浓度。将脑组织样本在3倍体积的冰水中匀浆，然后用空白小鼠血浆进一步稀释2倍。取20 μL血浆样本或血浆稀释后的脑组织匀浆，加入100 μL含内标（华法林）的乙腈溶液进行提取。混合物在摇床上涡旋振荡15分钟，随后以4000 rpm离心15分钟。取70 μL上清液，与70 μL含0.1%甲酸的35%乙腈水溶液混合，用于LC-MS/MS分析。校准标准品和质控样品通过将2 mg/mL DNL343储备液用70%乙腈稀释至空白小鼠血浆中制备。在每个生物分析批次中，这些标准品和质控样品与未知样品一起提取。最终提取物采用反相液相色谱-负离子电喷雾电离（LC-MS/MS）进行分析，并使用多反应监测（MRM）模式监测测试样品和内标。使用 Analyst 1.6.3 软件（AB Sciex）通过线性回归拟合标准曲线，以定量基质中的 DNL343。总 DNL343 浓度根据脑或血浆蛋白结合率（游离分数，fu）进行校正，游离分数通过超速离心法在体外测定，并以游离（游离 DNL343）暴露量表示。在动物模型中，已评估了 DNL343 抑制中枢神经系统 ISR 活性以及逆转神经退行性变和神经炎症的能力。典型的研究包括以 1-30 mg/kg 的剂量，每日一次或两次，对小鼠或大鼠进行口服 DNL343 给药。药效学终点包括测量脑组织中的ISR活性、评估神经退行性标志物以及评估神经炎症。疗效研究在ALS和其他神经退行性疾病的动物模型中进行。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
DNL343 具有良好的药代动力学特性，包括口服生物利用度和脑渗透性。该化合物口服有效，能够穿过血脑屏障，在中枢神经系统达到治疗浓度。临床前研究已报道了包括血浆半衰期、清除率、分布容积和生物利用度在内的详细药代动力学参数。该化合物的脑渗透性使其能够用于治疗中枢神经系统疾病。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
作为临床前开发的一部分，已开展了DNL343的毒性研究。目前正在动物模型中评估该化合物的安全性，以支持其潜在的临床开发。作为一种eIF2B激活剂，正在评估该化合物与蛋白质合成调节相关的潜在不良反应的安全性。标准毒理学研究包括啮齿动物的急性毒性和重复给药毒性，并评估靶器官毒性和确定无观察到不良反应水平（NOAEL）。
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| 参考文献 |
[1]. Discovery of DNL343: A Potent, Selective, and Brain-Penetrant eIF2B Activator Designed for the Treatment of Neurodegenerative Diseases. J Med Chem. 2024 Apr 11;67(7):5758-5782.
[2]. Yulyaningsih E, et al. DNL343 is an investigational CNS penetrant eIF2B activator that prevents and reverses the effects of neurodegeneration caused by the Integrated Stress Response[J]. bioRxiv, 2023: 2023.8.21.554203 |
| 其他信息 |
DNL343 正在临床试验 NCT05842941（HEALEY ALS 平台试验 - G 方案 DNL343）中进行研究。DNL343 是一种在研药物，用于治疗肌萎缩侧索硬化症 (ALS) 和其他神经退行性疾病。该化合物是一种可穿透血脑屏障的 eIF2B 激活剂，能够抑制整合应激反应 (ISR)。目前已开展或计划开展临床试验，以评估 DNL343 在 ALS 患者中的安全性和有效性。该化合物通过靶向 ISR 通路，为治疗神经退行性疾病提供了一种有前景的治疗方法。
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| 分子式 |
C20H19CLF3N3O4
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|---|---|
| 分子量 |
457.83077454567
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| 精确质量 |
457.10
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| 元素分析 |
C, 52.47; H, 4.18; Cl, 7.74; F, 12.45; N, 9.18; O, 13.98
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| CAS号 |
2278265-85-1
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| PubChem CID |
137491382
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| 外观&性状 |
Light yellow to green yellow solid powder
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| LogP |
3.7
|
| tPSA |
86.5Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
7
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| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
678
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1C=CC(=CC=1)OCC(NC12CC(C3=NN=C(C4CC(C4)OC(F)(F)F)O3)(C1)C2)=O
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| InChi Key |
IKPNRMYDOSNVAU-QEJBIBHGSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H19ClF3N3O4/c21-12-1-3-13(4-2-12)29-7-15(28)25-19-8-18(9-19,10-19)17-27-26-16(30-17)11-5-14(6-11)31-20(22,23)24/h1-4,11,14H,5-10H2,(H,25,28)/t11-,14+,18?,19?
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| 化学名 |
2-(4-chlorophenoxy)-N-(3-(5-((1s,3s)-3-(trifluoromethoxy)cyclobutyl)-1,3,4-oxadiazol-2-yl)bicyclo[1.1.1]pentan-1-yl)acetamide
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| 别名 |
DNL343; DNL 343; DNL-343
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1842 mL | 10.9211 mL | 21.8422 mL | |
| 5 mM | 0.4368 mL | 2.1842 mL | 4.3684 mL | |
| 10 mM | 0.2184 mL | 1.0921 mL | 2.1842 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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