| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
eIF2B, integrated stress response (ISR)[1]
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
使用荧光显微镜在ALS体外模型中评估DNL343对ISR的抑制作用。将共表达可诱导的GFP标记的TDP43细胞质形式和应激颗粒标记物G3BP1-mCherry的H4细胞用亚砷酸钠应激2小时以诱导应激颗粒的形成。在2小时的时间过程中，DNL343以剂量依赖的方式抑制TDP43（86–414）阳性应激颗粒的形成，IC50值为13 nM。该数据支持DNL343在疾病模型中有效抑制细胞应激后的ISR途径[1]。
|
| 体内研究 (In Vivo) |
为了证明DNL343在体内具有抑制中枢神经系统ISR抑制的活性，我们利用了Eif2b5 R191H小鼠，该小鼠模拟了由中枢神经系统慢性ISR激活驱动的神经退行性疾病。DNL343（50mg/kg）在纯合突变动物及其野生型同窝仔中通过灌胃每天给药一次，持续2天。两组的未结合脑浓度与未结合血浆水平相当，与在大鼠和cyno中观察到的高中枢神经系统外显率一致（见上文）。如我们自己的模型表征以及其他人的模型表征所示，在2.9–3.8个月大时，与野生型对照相比，纯合突变体的大脑中ISR转录标记物的表达水平更高。DNL343的急性治疗降低了这些ISR标记物，表明DNL343在抑制大脑中的ISR过度激活方面是有效的[1]。
|
| 酶活实验 |
萤光素酶测定[1]
ATF4报告子克隆17细胞以2500个细胞/孔的速度在384孔板中以15μL进行铺板。第二天，通过使用Echo Acoustic液体处理器（10μM最终1/2 log稀释度）在750 nL中点样化合物，制备DNL343板。然后将培养基添加到稀释板（50μL/孔）中，以产生适当的稀释液添加到细胞中。然后使用Apricot液体处理器将含有DNL343（10μL）的培养基转移到细胞培养板中。将细胞与DNL343在37°C和5%CO2下孵育45分钟，然后加入5μL亚砷酸钠至最终浓度为30μM。然后将板在药物和压力的存在下再孵育6小时。对照孔包括在每个平板上，并被指定为“低”（无亚砷酸钠）和“高”（30μM亚砷酸盐，无DNL343） 将NanoGlo测定缓冲液和底物解冻并在室温下放置1小时（NanoGlo-萤光素酶试剂盒（Promega N1150））。为了制备工作测定试剂，在测定前直接将底物（200μL/板）加入缓冲液（10mL/板。最后6小时孵育后，向每个孔中加入30μL的测定工作试剂（体积与样品体积相等）。然后将板在600rpm下振荡3分钟以混合，然后在EnVision板读取器上读取发光。NLuc报告子定量后，使用以下公式计算DNL343实现的抑制百分比：100-[（样本-低）/（高-低）×100]。“高”（亚砷酸钠，无化合物）和“低”（无亚砷酸盐）由每个平板上运行的对照定义。 |
| 细胞实验 |
H4诱导的TDP43细胞的应激颗粒IC50[1]
H4细胞分别被表达G3BP1 mCherry和多西环素诱导的GFP-TDP43（86–414）的慢病毒感染，以产生稳定的细胞系。细胞在DMEM中培养，DMEM补充有1%丙酮酸钠和10%无tet胎牛血清，温度为37°C，含5%CO2。[1] 对于应力颗粒测定，将细胞接种在PDL涂布的96w Cell Carrier Ultra板中。在接种时用1μg/mL多西环素诱导转基因表达。诱导后约24小时，使用液体处理器（Tecan D300e数字分配器）用DNL343预处理细胞，从10mM终浓度和10点1/2对数稀释系列开始，在37°C、5%CO2中预处理30分钟。然后，在37°C、5%CO2中向细胞中加入200μM亚砷酸钠2小时。然后将细胞固定在4%多聚甲醛中，并在室温下孵育10分钟。固定后，用1×PBS洗涤细胞两次，并在0.1%Triton X-100中在室温下透化20分钟。将细胞封闭在3%BSA+0.1%Triton X-100中1小时。在室温下用DAPI（1:5000，Thermo Fisher）对细胞核染色1小时。然后将细胞在1×PBS中洗涤4次。然后使用40×物镜在Opera Phenix高含量显微镜上对板进行成像。 为了量化应激颗粒和TDP43点状，通过Harmony HCS软件在每个通道中分割并自动识别斑点，并计算每个细胞的总斑点面积之和。该值用于通过使用以下方程计算DNL343的抑制百分比：100-[（样品-低）/（高-低）×100]，其中高（亚砷酸钠，无DNL343）和低（无亚砷酸盐）定义为对照。 |
| 动物实验 |
DNL343 灌胃给药制剂 [1]
DNL343 配制成 0.5% 甲基纤维素溶液悬浮液。简而言之，将 DNL343 置于独立的玻璃小瓶中，并加入纯化水（最终体积的一半）。使用探头式超声波仪，以 40% 的振幅轻柔地混合混合物 10 次，每次脉冲超声持续 20 秒。最终得到颗粒分散均匀的悬浮液。将等体积的 1% 甲基纤维素溶液（浓度为最终目标浓度的 2 倍，体积为最终目标体积的一半）加入上述悬浮液中，并涡旋振荡至均匀。目测检查悬浮液是否均匀分布。给药溶液在首次给药当天配制，并置于实验室旋转器上，在 4 °C 下保存直至使用。 DNL343 混悬液在给药时重新混匀，并以 10 mL/kg 体重的剂量通过灌胃法给药。[1] 小鼠组织采集[1] 使用 2.5% 三溴乙醇对小鼠进行人道麻醉。通过心脏穿刺采集全血至 EDTA 抗凝管中，并在 4 °C 下以 12,700 rpm 离心 7 分钟，然后收集上层血浆进行分析。用冰冷的 PBS 对小鼠进行心脏灌注。然后收集组织，称重，用干冰冷冻，并在 80 °C 下保存以备后续分析。[1] DNL343 药代动力学[1] 使用 Quintara Discovery 公司的 LC-MS/MS 测定小鼠脑和血浆中的 DNL343 浓度。将脑组织样本在3倍体积的冰水中匀浆，然后用空白小鼠血浆进一步稀释2倍。取20 μL血浆样本或血浆稀释后的脑组织匀浆，加入100 μL含内标（华法林）的乙腈溶液进行提取。混合物在摇床上涡旋振荡15分钟，随后以4000 rpm离心15分钟。取70 μL上清液，与70 μL含0.1%甲酸的35%乙腈水溶液混合，用于LC-MS/MS分析。校准标准品和质控样品通过将2 mg/mL DNL343储备液用70%乙腈稀释至空白小鼠血浆中制备。在每个生物分析批次中，这些标准品和质控样品与未知样品一起提取。最终提取物采用反相液相色谱-负离子电喷雾电离（LC-MS/MS）进行分析，并使用多反应监测（MRM）模式监测待测样品和内标物。使用 Analyst 1.6.3 软件（AB Sciex）通过线性回归拟合标准曲线，以定量基质中的 DNL343。总 DNL343 浓度根据脑或血浆蛋白结合率（游离分数，fu）进行校正，游离分数通过超速离心法在体外测定，并以游离 DNL343 的暴露量表示。 |
| 参考文献 |
[1]. Discovery of DNL343: A Potent, Selective, and Brain-Penetrant eIF2B Activator Designed for the Treatment of Neurodegenerative Diseases. J Med Chem. 2024 Apr 11;67(7):5758-5782.
[2]. Yulyaningsih E, et al. DNL343 is an investigational CNS penetrant eIF2B activator that prevents and reverses the effects of neurodegeneration caused by the Integrated Stress Response[J]. bioRxiv, 2023: 2023.8.21.554203 |
| 其他信息 |
DNL343 正在临床试验 NCT05842941（HEALEY ALS 平台试验 - G 方案 DNL343）中进行研究。
|
| 分子式 |
C20H19CLF3N3O4
|
|---|---|
| 分子量 |
457.83077454567
|
| 精确质量 |
457.10
|
| 元素分析 |
C, 52.47; H, 4.18; Cl, 7.74; F, 12.45; N, 9.18; O, 13.98
|
| CAS号 |
2278265-85-1
|
| PubChem CID |
137491382
|
| 外观&性状 |
Light yellow to green yellow solid powder
|
| LogP |
3.7
|
| tPSA |
86.5Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
9
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
31
|
| 分子复杂度/Complexity |
678
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
ClC1C=CC(=CC=1)OCC(NC12CC(C3=NN=C(C4CC(C4)OC(F)(F)F)O3)(C1)C2)=O
|
| InChi Key |
IKPNRMYDOSNVAU-QEJBIBHGSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C20H19ClF3N3O4/c21-12-1-3-13(4-2-12)29-7-15(28)25-19-8-18(9-19,10-19)17-27-26-16(30-17)11-5-14(6-11)31-20(22,23)24/h1-4,11,14H,5-10H2,(H,25,28)/t11-,14+,18?,19?
|
| 化学名 |
2-(4-chlorophenoxy)-N-(3-(5-((1s,3s)-3-(trifluoromethoxy)cyclobutyl)-1,3,4-oxadiazol-2-yl)bicyclo[1.1.1]pentan-1-yl)acetamide
|
| 别名 |
DNL343; DNL 343; DNL-343
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1842 mL | 10.9211 mL | 21.8422 mL | |
| 5 mM | 0.4368 mL | 2.1842 mL | 4.3684 mL | |
| 10 mM | 0.2184 mL | 1.0921 mL | 2.1842 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
eIF4A-IN-1
eIF4A-IN-3
EIF2AK4 Recombinant Human Active Protein Kinase
EMD-C02602
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
