Not applicable. As a labeled carcinogen, it targets DNA. The unlabeled DEN is a potent DNA alkylating agent that primarily targets liver cells after metabolic activation by cytochrome P450 enzymes (particularly CYP2E1). It forms DNA adducts (primarily O6-ethylguanine), leading to mutations (G:C to A:T transitions) and the initiation of hepatocellular carcinoma (HCC). This leads to changes in nuclear enzymes associated with DNA repair/replication.

药物分子中通常包含碳、氢和其他元素的稳定重同位素，主要用作药物研发过程中定量分析的示踪剂。由于氘代可能改变药物的药代动力学和代谢特征，因此引起了人们的关注[1]。

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作为标记标准品，它用于方法开发和验证，而非用于评估其生物活性。未标记的二乙胺（DEN）是一种强效致癌物，其体外细胞转化IC50值较高。它可用于诱导动物模型发生肝癌，并造成DNA损伤。N-亚硝基二乙胺主要存在于烟草烟雾、水和某些食物中，被国际癌症研究机构（IARC）列为2A类可能的人类致癌物。

二乙基亚硝胺（DEN）是一种广泛用于啮齿动物模型的强效且特异性的肝癌诱导剂，可诱发肝细胞癌（肝癌）。它是最重要的环境致癌物之一。氘代二乙基亚硝胺（DEN-d4）并非用于诱导致癌，而是用于毒代动力学研究中追踪母体化合物，使科学家能够利用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）定量分析血浆和组织中的致癌物，而不会受到内源性化合物的干扰信号的影响。

DEN-d4 用作 DEN 分析的内标。典型的方法是采用液液萃取 (LLE) 或固相萃取 (SPE) 从生物基质（例如血浆、肝匀浆或水）中分离 DEN。萃取前，向所有样品中添加固定浓度的 DEN-d4。提取物采用液相色谱-串联质谱 (LC-MS/MS) 在多反应监测 (MRM) 模式下进行分析，监测 DEN（例如，102.1 > 75.1）和 DEN-d4（例如，106.1 > 79.1）的质量跃迁。天然 DEN 的浓度根据峰面积比确定。

不适用。该化合物为内标，而非测试样品。体外遗传毒性试验使用未标记的DEN。例如，将原代大鼠肝细胞或人HepaRG细胞在含有外源代谢活化系统（S9组分）的条件下，用DEN（1-10 mM）处理24-72小时。通过³²P标记法检测DNA加合物或通过碱性彗星试验定量DNA链断裂来评估遗传毒性。标记标准品用于分析化学，而非细胞培养。

在动物研究中，通常不直接给动物注射DEN-d4；而是将其用作研究未标记DEN的工具。在DEN诱导致癌研究中，对15日龄雄性C57BL/6小鼠或6周龄大鼠进行单次腹腔注射（ip）未标记DEN（例如，50 mg/kg）。在给药后不同时间点采集血液和肝脏样本。在进行液相色谱-质谱（LC-MS）分析之前，将DEN-d4作为内标加入这些样本中，以准确量化DEN的浓度。这使得可以计算致癌物在癌症模型中的毒代动力学参数。

吸收、分布和排泄
/乳汁/ 在山羊中，口服30 mg/kg体重的N-亚硝基二乙胺1小时后，乳汁中N-亚硝基二乙胺的含量为11.4 mg/kg，血液中为11.9 mg/kg。24小时后在乳汁中检测到痕量N-亚硝基二乙胺，但在血液中未检测到。放射自显影研究表明，在小鼠妊娠的所有研究日（第12、14、16和18天），未代谢的N-亚硝基二乙胺均匀分布于大多数胎儿组织中。结果还表明，该物质在妊娠第18天于胎儿支气管树黏膜和肝脏中代谢。

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代谢/代谢物 2,6-二氯-4-硝基苯酚对磺酰转移酶的抑制作用完全消除了N-亚硝基二乙醇胺在大鼠肝脏中的遗传毒性，表现为DNA单链断裂的诱导。N-亚硝基氨基-2-羟基吗啉是N-亚硝基二乙醇胺经醇脱氢酶介导的氧化代谢产物，其DNA断裂能力几乎完全丧失。与这些β-羟基化亚硝胺不同，2,6-二氯-4-硝基苯酚对N-亚硝基二乙醇胺的DNA损伤能力没有影响。本文提出了一种新的N-亚硝基二乙醇胺活化机制：N-亚硝基二乙醇胺首先被醇脱氢酶转化为环状半缩醛N-亚硝基氨基-2-羟基吗啉。这种环状β-羟基亚硝胺似乎是磺酰转移酶的底物。生成的硫酸盐结合物被认为是最终的基因毒性亲电试剂。然而，结果并未排除N-亚硝基二乙醇胺本身发生硫酸盐结合的可能性。
NDEA的氧化N-脱乙基化是体内CO2生成和烷基化的原因。我们测定了NDEA在大鼠和仓鼠器官切片中的体外代谢率，并建立了代谢程度与诱导肿瘤分布之间的相关性。将NDEA注射到大鼠或仓鼠体内后，在肝脏和肾脏核酸中生成了多种乙基化衍生物。这些化合物包括7-乙基鸟嘌呤、O6-乙基鸟嘌呤和3-乙基腺嘌呤。……证据表明，亚硝基二乙胺需要代谢活化才能发挥其致癌和毒性作用。在大鼠尿液中检测到了N-亚硝基乙基-N-(2-羟乙基)胺和N-亚硝基乙基-N-(羧甲基)胺。……研究人员在大鼠小肠中探讨了亚硝胺的结构与代谢之间的可能关系。将分离的空肠和回肠肠段通过管腔灌注2小时。灌注液中含有四种对称二烷基亚硝胺中的一种（每个侧链含有2-5个碳原子，所有亚硝胺均在α位用¹⁴C标记）或两种不对称亚硝胺中的一种（N-亚硝基叔丁基甲胺和N-亚硝基甲基苄胺，在甲基上用¹⁴C标记）。除了测定肠组织中的¹⁴C含量外，还分析了吸收液（吸收物）、灌注液和组织匀浆中极性代谢物的存在情况，以评估亚硝胺的肠道代谢。N-亚硝基二乙胺和两种不对称亚硝胺均未发生显著代谢。N-亚硝基二乙胺的已知代谢物包括N-亚硝基乙胺。

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氘代标准品与未标记的二乙基氨基甲酸酯 (DEN) 具有相同的药代动力学性质。DEN 是一种小分子亲脂性物质，经口服、皮肤或吸入暴露后可迅速吸收。它主要通过肝细胞色素 P450 系统（CYP2E1、CYP2A6）代谢，该系统也负责将其活化为致癌的烷基化物质。DEN 在啮齿动物体内的消除半衰期约为 2-4 小时。DEN-d4 用于校正这些不稳定化合物在提取和分析过程中的回收率。

毒性概述
鉴定和用途：N-亚硝基二乙胺 (NDEA) 是一种黄色油状物质。它用作汽油和润滑油添加剂、抗氧化剂和塑料稳定剂。人体研究：NDEA 已被确定为烟草致癌物。支气管上皮细胞系短期暴露于相当于吸烟浓度的烟草致癌物（包括 NDEA）后，关键增殖调控基因 EGFR、BCL-2、BCL2L1、BIRC5、TP53 和 MKI67 的表达发生改变，类似于在被描述为癌前病变的肺上皮活检标本中报告的变化。动物研究：NDEA 可通过多种暴露途径在多种实验动物的各种组织中诱发肿瘤。NDEA 对围产期和成年动物具有致癌性，主要导致肝脏、呼吸道、肾脏和上消化道肿瘤。小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、兔、犬和猪口服NDEA后均观察到良性和恶性肝肿瘤。大鼠经吸入或直肠给药后诱发肝肿瘤；小鼠、大鼠和仓鼠经腹腔注射后诱发肝肿瘤；仓鼠、豚鼠、沙鼠和刺猬经皮下注射后诱发肝肿瘤；小鼠经产前暴露后诱发肝肿瘤；鸟类经肌肉注射后诱发肝肿瘤；鱼类和蛙类在水族箱水中暴露于NDEA后诱发肝肿瘤。犬经胃管灌注NDEA后进行皮下注射，导致肝癌和鼻癌。小鼠、大鼠、仓鼠、犬和猪口服NDEA后诱发肺癌和上呼吸道肿瘤。大鼠经口服、静脉注射或产前给予NDEA后，均可诱发肾脏肿瘤。口服NDEA还可导致猪肾脏肿瘤，以及小鼠、大鼠和仓鼠上消化道肿瘤。采用沙门氏菌TA98、TA100、TA1535、TA1537和TA1538菌株（Ames试验）评估NDEA的致突变性，并分别进行代谢活化和未活化处理。结果表明，无论是否进行代谢活化，NDEA均未在任何受试菌株中诱导出可重复的阳性反应。在苯巴比妥处理的大鼠肝微粒体组分存在的情况下，NDEA可在中国仓鼠V79细胞中诱导出8-氮杂鸟嘌呤抗性突变体。NDEA在果蝇隐性致死试验中也表现出致突变性。本研究探讨了NDEA对日本青鳉（Oryzias latipes）性发育、配子发生和卵母细胞成熟的影响。结果表明，NDEA呈剂量依赖性地降低了XX幼鱼早期性分化阶段的生殖细胞数量，导致成鱼卵巢发育不全。这种影响具有性别特异性；在XY幼鱼中未观察到类似变化。此外，早期暴露于低剂量NDEA的XX和XY幼鱼成鱼体重显著降低。与对照组相比，暴露于NDEA的性未成熟成年雄性和雌性表现出更成熟的性腺发育。生态毒性研究表明，NDEA浓度超过5 μg/L时，可诱导斑马鱼代谢系统产生氧化应激和抗氧化防御反应。暴露42天后，当NDEA浓度超过500 μg/L时，斑马鱼肝细胞中观察到显著的DNA损伤。在终生灌胃给予网纹蚯蚓（Phython reticulatus）6、12 和 24 mg/kg NDEA（每晚一次，连续四次）后，观察到了毒性和致癌性。诱发肿瘤所需的总剂量为 500–600 mg/kg。相互作用目的：本研究旨在探讨 2,3,7,8-四氯二苯并二恶英（TCDD）和 N-亚硝基二乙胺（DEN）对肿瘤发生的影响及其潜在机制。方法：采用细胞转化试验，在 Balb/c 3T3 细胞中检测了 TCDD 和 DEN 单独或联合诱导恶性转化的潜力。通过在芳烃受体（AhR）通路中添加 TCDD 的竞争性结合剂 α-萘基黄酮（α-NF），进一步研究了所观察到的效应的可能机制。本研究采用定量实时RT-PCR检测了Balb/c 3T3细胞中Cyp1a1和Cyp2a5基因的mRNA表达水平，分别使用DEN和TCDD单独或联合处理，联合处理组添加或不添加α-NF。结果显示，与单独使用TCDD或DEN相比，TCDD与DEN联合处理显著提高了细胞转化频率（TF）。α-NF并未抑制这种效应。单独使用TCDD可增强Cyp1a1和Cyp2a5的mRNA表达水平，但TCDD与DEN联合处理则阻断了这种诱导作用。结论：TCDD与DEN联合处理对肿瘤发生具有显著的协同作用。AhR通路可能并非这种协同作用的关键机制。因此，有必要进一步研究其在癌症发展中的潜在机制。本研究探讨了用于治疗高脂血症的药物匹伐他汀对C57BL/KsJ-db/db (db/db)肥胖小鼠肝脏中二乙基亚硝胺(DEN)诱导的癌前病变发展的影响。雄性db/db小鼠先饮用含40 ppm DEN的自来水2周，随后分别饲喂含1 ppm或10 ppm匹伐他汀的饲料14周。处死小鼠后，与未治疗组相比，10 ppm匹伐他汀显著抑制了肝脏癌前病变（细胞改变）的发展，其机制是通过诱导细胞凋亡而非抑制细胞增殖。匹伐他汀改善了肝脏脂肪变性，并激活了肝脏中的AMPK-α蛋白。此外，匹伐他汀还降低了血清中游离脂肪酸和氨基转移酶的水平，同时提高了脂联素的水平。匹伐他汀治疗降低了血清中肿瘤坏死因子（TNF）-α的水平以及肝脏中TNF-α和白细胞介素-6 mRNA的表达，表明其可缓解由脂肪过度沉积引起的慢性炎症。白藜芦醇是一种在红酒和葡萄中含量丰富的植物化学物质，已知其在体外和体内均能影响癌细胞。本研究报告了白藜芦醇对N-亚硝基二乙胺（DEN）诱导的雄性Wistar大鼠肝细胞癌（HCC）早期和晚期的影响。将大鼠分为两组，分别在DEN给药后第1天（HCC发生前）或HCC发生后15-16周（HCC发生后）开始接受白藜芦醇治疗，疗程为15天。并将这些组与未治疗的HCC大鼠进行比较。对已知的肝细胞癌（HCC）血清标志物（如甲胎蛋白 (AFP)）以及其他血清和肝脏标志酶的生化分析表明，与未治疗的HCC大鼠相比，白藜芦醇治疗组的这些标志物水平较低。肝组织切片的苏木精-伊红染色显示，在DEN诱导的HCC（15-16周）期间，肝实质发生了改变或转化。在HCC早期（DEN诱导后第1天）和晚期（第17-18周）给予白藜芦醇治疗，与未治疗的HCC相比，组织结构存在显著差异。免疫印迹分析表明，在DEN诱导的肝细胞癌（HCC）的早期和晚期，白藜芦醇干预均激活了凋亡标志物，例如PARP裂解、caspase-3激活、p53上调和细胞色素c释放。此外，半定量RT-PCR和免疫印迹分析表明，关键凋亡调节因子Bax和Bcl2的表达分别以白藜芦醇依赖的方式上调和下调。……
本研究评估了紫豆提取物（TPE）对N-亚硝基二乙胺（NDEA）诱导的Wistar大鼠肝细胞癌（HCC）的化学预防潜力。通过腹腔注射NDEA（200 mg/kg）诱导HCC，随后每周皮下注射CCl₄（3 mL/kg），持续6周。致癌物给药后，本研究每日一次口服TPE，剂量分别为200 mg/kg和400 mg/kg。NDEA处理显著提高了肝细胞癌标志物（包括甲胎蛋白（AFP）和癌胚抗原（CEA））的水平。 TPE治疗显著减轻了肝损伤，并使所有肝细胞癌标志物恢复正常。此外，TPE显著恢复了NDEA处理大鼠肝脏中抗氧化酶的活性，包括脂质过氧化物酶、还原型谷胱甘肽、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽S-转移酶。TPE治疗显著降低了致癌物诱导的大鼠肝结节的发生率和数量。组织学结果与生化结果一致。这些发现有力地支持了紫锥菊在NDEA诱导的肝细胞癌发生过程中抑制脂质过氧化、抑制肿瘤负荷以及促进酶促和非酶促抗氧化防御系统的作用。这可能是由于其对抗菌防御状态的调节，从而增强了其抗癌潜力。有关N-亚硝基二乙胺（共16种）相互作用的更完整数据，请访问HSDB记录页面。

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非人类毒性值
大鼠皮下注射LD50：195 mg/kg
大鼠腹腔注射LD50：216 mg/kg
大鼠静脉注射LD50：280 mg/kg
大鼠口服LD50：280 mg/kg
有关N-亚硝基二乙胺（共6种）非人类毒性的更完整数据，请访问HSDB记录页面。

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二乙基亚硝胺（DEN）具有极强的肝毒性和致癌性，被国际癌症研究机构（IARC）列为2A类致癌物。大鼠口服LD50约为500-700 mg/kg。急性暴露可导致肝脏中央小叶坏死、出血和脂肪变性。慢性暴露必然导致肝细胞癌（HCC）和肝血管肉瘤的发生。预计其氘代类似物与未标记化合物具有相同的毒性特征。必须极其谨慎地处理。必须在指定区域内，按照致癌物进行处理，并采取适当的控制措施。

[1]. Impact of Deuterium Substitution on the Pharmacokinetics of Pharmaceuticals. Ann Pharmacother. 2019 Feb;53(2):211-216.C

根据一个由科学和健康专家组成的独立委员会的说法，N-亚硝基二乙胺具有潜在致癌性。N-亚硝基二乙胺是一种清澈的淡黄色液体，沸点为175-177°C。因此，推测其具有致癌性是合理的。它被用作汽油和润滑油的添加剂，以及塑料的抗氧化剂和稳定剂。N-亚硝基二乙胺是一种亚硝胺，是N-乙基乙胺的产物，其中氮原子被亚硝基取代。它具有致突变性、肝毒性和致癌性。N-亚硝基二乙胺是一种合成的、光敏的、挥发性的清澈黄色油状物质，可溶于水、脂类和其他有机溶剂。它被用作汽油和润滑油的添加剂，以及工业材料的抗氧化剂和稳定剂。加热分解时，N-亚硝基二乙胺会释放有毒的氮氧化物烟雾。 N-亚硝基二乙胺可能通过烷基化作用影响DNA完整性，并已被用于诱导肝肿瘤的实验研究。它被认为是一种可能的人类致癌物。(NCI05)
一种具有烷基化、致癌和致突变特性的亚硝胺衍生物。

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作用机制
……研究表明，两种亚硝胺，即N-亚硝基二乙胺和4-(甲基亚硝基氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮，可以与仓鼠肺中的尼古丁胆碱能受体结合。亚硝胺和尼古丁与这些受体的结合可以刺激体外培养的人肺癌类癌细胞增殖。这些数据表明，吸烟者体内尼古丁和亚硝胺对尼古丁受体的慢性刺激是导致神经内分泌细胞增殖并最终发展为具有神经内分泌分化特征的肺肿瘤的分子机制之一。

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N-亚硝基二乙胺-d4 是一种稳定同位素标记的化学标准品，用于定量分析环境、食品和生物样品中的致癌物 N-亚硝基二乙胺。它是一种受美国缉毒局 (DEA) 管制的物质，广泛存在于烟草烟雾、水和食品（例如腌制和油炸食品、奶酪、酒精饮料）中。它仅供研究使用，不得用于人体。分子式：C4H6D4N2O；分子量：106.16。

C4H6D4N2O

106.16

106.104

1346603-41-5

N-Nitrosodiethylamine;55-18-5

5921

Yellow oil
Slightly yellow liquid

0.9±0.1 g/cm3

173.9±9.0 °C at 760 mmHg

59.0±18.7 °C

1.7±0.3 mmHg at 25°C

1.442

0.42

32.7

0

3

2

7

51.7

0

CCN(CC)N=O

WBNQDOYYEUMPFS-VEPVEJTGSA-N

InChI=1S/C4H10N2O/c1-3-6(4-2)5-7/h3-4H2,1-2H3/i1D2,3D2

N-ethyl-N-(1,1,2,2-tetradeuterioethyl)nitrous amide

DEN-d4; Diethylnitrosamine-d4; N-Nitrosodiethylamine-d4

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。