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Oxychlororaphine

别名: 吩嗪-1-甲酰胺;1-吩嗪甲酰胺
目录号: V34517 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
氧氯阿啡因可以从自然存在于土壤中的成团潘氏菌中提取。
Oxychlororaphine CAS号: 550-89-0
产品类别: Apoptosis
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
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10mg
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产品描述
氧氯阿芬可从天然存在于土壤中的聚集泛菌（Pantoea agglomerans）中提取。氧氯阿芬具有广谱抗真菌活性，并具有浓度依赖性的细胞毒性作用，可诱导细胞凋亡。氧氯阿芬可用于癌症研究。
氧氯阿芬（吩嗪-1-甲酰胺，PCN）是一种从土壤细菌聚集泛菌中分离得到的杂环含氮化合物。它属于吩嗪类化合物，该类化合物以其广谱抗生素和抗肿瘤活性而闻名。由于其分子量小，它很容易渗透组织和器官。该研究探讨了其对三种癌细胞系（A549（非小细胞肺癌）、HeLa（宫颈癌）和SW480（结肠癌））的抗癌活性，结果表明其具有剂量依赖性的细胞毒性，并通过膜损伤、乳酸脱氢酶（LDH）泄漏、细胞色素c释放、p53上调和caspase激活诱导细胞凋亡。[2]
生物活性&实验参考方法
体外研究 (In Vitro)
氧氯阿芬（1-256 μM；24 小时）可诱导细胞膜损伤，增加细胞凋亡和乳酸脱氢酶泄漏，并促进细胞色素 c 蛋白的生成。针对 A549、HeLa 和 SW480 癌细胞系的细胞毒性药物的 IC50 值范围为 32 至 40 μM[2]。氧氯阿芬（32 μM；A549 和 SW480 细胞）可导致细胞周期阻滞于 G1 期并诱导亚 G1 期[2]。48 小时后，氧氯阿芬（A549 细胞）可激活促凋亡蛋白 caspase-3，进而导致 PARP 裂解[2]。这导致抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下调。
氧氯普利因对A549、HeLa和SW480癌细胞系表现出剂量依赖性的细胞毒性，其50%抑制浓度（IC50）值介于32至40 μM之间。[2]
用氧氯普利因处理后，乳酸脱氢酶（LDH）泄漏到培养基中显著增加，表明癌细胞膜遭到破坏。LDH水平远低于0.10% Triton X-100诱导的水平，证实细胞死亡是由凋亡而非坏死引起的。[2]
氧氯普利因处理导致所有三种癌细胞系中细胞色素c蛋白的产生增加，这通过ELISA检测得到证实。 [2]
相差显微镜观察显示，经氧氯普胺处理的细胞与紧密排列的对照细胞相比，出现死亡和脱落的细胞。吖啶橙/溴化乙锭染色荧光显微镜观察显示，细胞凋亡的特征性表现包括核碎裂、核浓缩、细胞收缩和凋亡小体的形成。[2]
细胞周期分析表明，氧氯普胺诱导G1期细胞周期阻滞，并增加亚G1期（凋亡期）细胞比例。[2]
Western blot分析显示，经氧氯普胺处理的细胞中，抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL和Bcl-w表达下调，促凋亡蛋白Bax表达上调，p53（S15磷酸化）表达增加，caspase-3（裂解）激活，以及PARP裂解。 [2] RT-PCR 分析显示，氧氯普利处理可增加 p53 mRNA 的表达（与对照组相比，Ct 值降低），并降低抗凋亡蛋白 Bcl-w 和 Bcl-xL 的 mRNA 表达（Ct 值升高）。[2]
酶活实验
在经氧氯普利处理的癌细胞中测定了caspase-3活性。处理后，用冰冷的PBS洗涤细胞两次，并在低渗缓冲液中裂解细胞。将裂解液匀浆，置于冰上30分钟，然后以12,500 × g离心20分钟。收集上清液，使用200 μM Ac-DEVD-AMC荧光底物，在含有100 mM HEPES、10%蔗糖、10 mM二硫苏糖醇和0.1% CHAPS的测定缓冲液中测定caspase-3活性。[2]
细胞实验
细胞活力检测[2]
细胞类型： A549、HeLa 和 SW480 癌细胞系
测试浓度： 1、2、4、8、16、32、64、128 和 256 μM
孵育时间： 24 小时
实验结果： 以剂量依赖的方式抑制细胞增殖。
MTT 细胞毒性试验：将癌细胞（A549、HeLa、SW480）以每孔 5,000 个细胞的密度接种于 96 孔板中，并在 37°C、5% CO2 条件下孵育 24 小时。将氧氯普利（Oxychlororaphine）溶于DMSO中，用培养基稀释，并添加至终浓度分别为1、2、4、8、16、32、64、128和256 μM。孵育48小时后，用10% (v/v) MTT染料溶液（5 mg/mL）处理细胞4小时。然后用DMSO溶液替换MTT培养基，并在490 nm处测量吸光度，以确定细胞活力和IC50值。[2] LDH泄漏测定：将氧氯普利处理的癌细胞以1,000 × g离心2分钟，并使用体外毒理学检测试剂盒测定培养基中的LDH。使用0.05% Triton X-100作为膜损伤的阳性对照。 [2]
细胞色素c检测：使用细胞色素c ELISA试剂盒，按照制造商说明书测定经氧氯普胺处理的癌细胞中细胞色素c的水平。[2]
凋亡基因的RT-PCR：使用RNA提取试剂盒从正常细胞系和经氧氯普胺处理的癌细胞系中分离总RNA。使用第一链cDNA合成试剂盒，按照制造商说明书进行逆转录PCR，以分析p53、Bcl-w和Bcl-xL mRNA的表达。[2]
Caspase-3活性检测：经氧氯普胺处理后，按照酶活性检测部分所述方法裂解细胞。使用Ac-DEVD-AMC底物，通过荧光法测定Caspase-3活性。 [2]
蛋白质印迹分析：将三种癌细胞系用IC50浓度的氧氯普利处理48小时。收集细胞沉淀，用PBS洗涤，并在裂解缓冲液（20 mM HEPES、150 mM NaCl、1% Triton X-100、1 mM EDTA、1 mM PMSF、10 μg/mL抑蛋白酶）中于4°C裂解30分钟，然后在4°C下以10,000 rpm离心20分钟。将上清液（100 μg 蛋白）进行 10% SDS-PAGE 电泳分离，转移至硝酸纤维素膜上，室温下用 1% 牛血清白蛋白封闭 1 小时，然后用针对 Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w、Bax、磷酸化 p53 S15、裂解 caspase-3 和裂解 PARP 的抗体进行检测。使用 ImageJ 软件通过条带强度定量基因表达。[2]
克隆形成实验：取对数生长期中期的细胞，用胰蛋白酶消化后接种于 60 mm 培养皿中，每皿 150 个细胞，重复三次。处理后，用乙醇固定细胞，并用 1% 亚甲蓝染色后计数。A549 和 HeLa 细胞的克隆效率为 90–95%，SW480 细胞的克隆效率约为 60%。[2]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
氧氯普利以浓度依赖的方式导致LDH泄漏增加，表明细胞膜受损。然而，与0.10% Triton X-100诱导的LDH水平相比，氧氯普利的LDH水平非常低，证实氧氯普利对癌细胞的抑制是由于细胞凋亡而非坏死。[2]
参考文献

[1]. Comparative metabolomics and transcriptomics analyses provide insights into the high-yield mechanism of phenazines biosynthesis in Pseudomonas chlororaphis GP72. J Appl Microbiol. 2022 Nov;133(5):2790-2801.

[2]. Isolation of Bioactive Phenazine-1-Carboxamide from the Soil Bacterium Pantoea agglomerans and Study of Its Anticancer Potency on Different Cancer Cell Lines. J AOAC Int. 2016 Sep;99(5):1233-9.
其他信息
吩嗪-1-甲酰胺是一种芳香酰胺，其结构中吩嗪环的C-1位被氨基甲酰基取代。它属于吩嗪类化合物，既是芳香酰胺又是单羧酸酰胺。据报道，吩嗪-1-甲酰胺存在于链霉菌属中，相关数据可供参考。
氧氯拉芬（吩嗪-1-甲酰胺）是一种从土壤中的泛菌属聚集菌（Pantoea agglomerans）中分离得到的天然吩嗪类化合物。吩嗪类化合物是杂环含氮化合物，也存在于假单胞菌属、链霉菌属、伯克霍尔德氏菌属、海洋杆菌属和海洋弧菌属等细菌中。它们被认为是具有广谱抗菌和抗肿瘤活性的有前景的生物活性化合物。由于吩嗪类化合物分子较小，易于渗透组织和器官，自 1959 年以来就被认为具有抗癌活性。该研究得出结论，氧氯拉平通过线粒体途径诱导细胞凋亡，从而发挥有效的抗癌作用，该途径涉及 p53 上调、Bax 激活、细胞色素 c 释放和 caspase-3/PARP 裂解。[2]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C13H9N3O
分子量
223.23
精确质量
223.075
CAS号
550-89-0
PubChem CID
120282
外观&性状
Light yellow to brown solid powder
密度
1.371g/cm3
沸点
526.1ºC at 760 mmHg
熔点
242ºC
闪点
272ºC
折射率
1.76
LogP
2.582
tPSA
68.87
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
3
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
17
分子复杂度/Complexity
307
定义原子立体中心数目
0
InChi Key
KPZYYKDXZKFBQU-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C13H9N3O/c14-13(17)8-4-3-7-11-12(8)16-10-6-2-1-5-9(10)15-11/h1-7H,(H2,14,17)
化学名
phenazine-1-carboxamide
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : 10 mg/mL (44.80 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 4.4797 mL 22.3984 mL 44.7968 mL
5 mM 0.8959 mL 4.4797 mL 8.9594 mL
10 mM 0.4480 mL 2.2398 mL 4.4797 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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