| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 100mg |
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| 500mg |
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| 靶点 |
STING/stimulator of interferon genes
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| 体外研究 (In Vitro) |
通过引起相同的闭合构象，SR-717 激活 STING，并为在许多情况下研究系统性 STING 激动剂开辟了可能性，例如抗肿瘤免疫 [1]。在 THP1 细胞和原代人外周血单核细胞中，SR-717 (3.8 μM) 以 STING 依赖性方式刺激 PD-L1 表达 [1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
SR-717（30 mg/kg 腹腔注射，每天一次，持续 1 周）在 WT 或 Stinggt/gt 小鼠中表现出抗癌功效 [1]。 SR-717（30 mg/kg 腹腔注射，持续 7 天）显示出抗肿瘤功效；增强相关器官中CD8+ T、自然杀伤细胞和树突状细胞的激活；并促进抗原交叉引发[1]。
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| 酶活实验 |
STING热位移分析（TSA）。[1]
如前所述，表达并纯化了人和小鼠STING的c末端结构域（CTD）。将供试品或载体对照加入蛋白质热转移染料试剂盒中提供的1X蛋白质热转移缓冲液中稀释的STING蛋白（0.22mg/ml）中。在按照染料试剂盒概述的参数进行熔解曲线之前，添加并混合热转移染料，但添加37°C的预孵育步骤30分钟并在37°C下启动熔解曲线除外。使用蛋白质热位移软件v1.3的导数法计算熔融温度（Tm）。[1] STING HTRF测定。[1] 按照制造商的说明，使用STING HTRF测定法定量SR-717与野生型人STING的结合亲和力。在启动制造商的方案之前，在水中制备浓度均为6.25 mM的二核苷酸、2'3'-cGAMP和环二GMP（Sigma，目录号SML1228-1UMO）以及SR-717[10 mM]的储备溶液。HTRF活性被报告为665nm至620nm的信号发射比乘以104[1]。 |
| 细胞实验 |
ISRE萤光素酶测定。[1]
将ISG-THP1细胞以5 x 105个细胞/ml的密度重新悬浮在低血清生长培养基（2%FBS）中，并用供试品或载体（DMSO）处理。将50μL细胞接种到384孔白色格雷纳板的每个孔中，并孵育24小时。为了评估萤光素酶报告基因的表达，向每个孔中加入30μl Quanti-luc（Invivogen）检测试剂，使用Envision平板阅读器读取发光，积分时间为0.1秒。对于每种细胞类型，将供试品样品的发光信号归一化为载体处理的样品，并报告为相对光单位（RLU）。[1] 蛋白质印迹分析。[1] 用新添加的蛋白酶和磷酸酶抑制剂将细胞溶解在1X蛋白裂解缓冲液（25 mM HEPES，pH 7.4，300 mM NaCl，1.5 mM MgCl2，1 mM EGTA，1%NP-40，1%脱氧胆酸钠，2.5 mM焦磷酸钠，1 mM甘油磷酸）中。按照制造商的说明，使用BoltTM 4-12%Bis-Tris凝胶和BoltTM迷你转移系统进行蛋白质印迹。按照制造商的建议稀释抗体（表1）。使用ECL试剂和ChemiDoc Imager检测发光信号。[1] 半定量实时PCR（qPCR）。[1] 将THP-1细胞以5 x 105个细胞/ml的密度重新悬浮在低血清生长培养基中，并用供试品或载体（DMSO）处理。将2.5mL细胞接种到6孔板的每个孔中，并孵育所需时间。以4 x 106个细胞/ml的密度接种PBMC，用供试品或载体处理并孵育所需时间。使用RNeasy Plus Mini Kit分离RNA，并将1μg纯化的RNA逆转录为cDNA。按照制造商的说明，使用表2中列出的Taqman引物和探针以及Taqman Universal Mix II评估基因表达。使用delta delta Ct方法对基因表达进行标准化，并报告为表达的倍数变化。[1] 细胞内活性化合物的分析检测。[1] THP-1细胞与SR001[10µM]在37°C下孵育15分钟，然后用冰冷的甲醇浸泡在液氮中提取，随后解冻。该过程重复三次，然后将样品离心至不溶性物质沉淀。将5µl细胞提取物按1:100稀释，并将1µl注入与安捷伦1260 LC堆栈连接的安捷伦6135单四极杆质谱仪中。使用SB-C8柱，4.6mm x 50mm，流速为0.5ml/min进行分离。在正离子模式下进行检测，并根据纯SR-001和SR-012的标准进行定量。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 野生型 (WT) 或 Stinggt/gt 小鼠 [1]
剂量： 30 mg/kg 给药途径： 腹腔注射 (ip)；每日一次，持续 1 周 实验结果： 最大程度抑制肿瘤生长。 小鼠研究。[1] 将 8 周龄雄性野生型 C57BL/6J 和 Stinggt/gt 小鼠皮下注射 5 x 10⁵ 个 B16.F10 肿瘤细胞，并每隔一天使用数字游标卡尺测量肿瘤大小。肿瘤体积使用以下公式估算：肿瘤体积 = 长 x 宽² / 2。在肿瘤细胞注射后第 11 天，小鼠每天腹腔注射 SR-717（30 mg/kg，溶于水）或载体（水），持续 7 天。当肿瘤面积超过 2000 mm³ 时，对小鼠实施安乐死。为了研究肿瘤转移和肺结节形成，将 B16.F10 细胞经尾静脉注射到 C57BL/6 小鼠体内，并分别给予 SR-717 或 DMXAA（15 mg/kg，腹腔注射，每日一次）。7 天后通过计数肺结节评估转移情况。为了评估循环血浆细胞因子水平，在给药 4 小时后通过视网膜眶静脉取血，并分离血浆。使用 IFN-β ELISA 试剂盒定量 IFN-β，并使用 IL-6 ELISA 试剂盒定量 IL-6，操作均按照制造商说明进行。在小鼠最后一次给药 24 小时后，从皮下肿瘤中纯化肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)。从小鼠体内手术切除肿瘤，并使用肿瘤解离试剂盒按照其针对软组织肿瘤的操作规程进行消化。疗效数据和肿瘤重量见图S18。淋巴细胞采用CD45微珠和制造商提供的操作规程进行富集。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
干扰素基因刺激因子 (STING) 将先天免疫与多种生物学过程联系起来，包括抗肿瘤免疫和微生物群稳态。目前，由于天然环状二核苷酸 (CDN) 配体的代谢不稳定性，人们对 STING 受体激活的抗癌潜力的机制理解仍然有限。我们通过一项基于细胞的通路靶向筛选，鉴定出一种非核苷酸类小分子 STING 激动剂，命名为 SR-717，它具有广泛的种间和等位基因间特异性。1.8 埃的共晶体结构显示，SR-717 作为一种直接的环状鸟苷酸-腺苷酸 (cGAMP) 模拟物，能够诱导 STING 呈现相同的“闭合”构象。SR-717 显示出抗肿瘤活性；促进相关组织中 CD8+ T 细胞、自然杀伤细胞和树突状细胞的活化；并促进抗原交叉启动。 SR-717 还以 STING 依赖的方式诱导了包括程序性死亡配体 1 (PD-L1) 在内的临床相关靶点的表达。[1]
为了克服瘤内给药的局限性，我们鉴定了 SR-717 系列功能性 cGAMP 模拟 STING 激动剂。研究表明，全身给药后，这些化合物能够促进抗肿瘤免疫，激活肿瘤和引流淋巴结 (dLN) 内的 CD8+ T 细胞，以及激活引流淋巴结内的 NK 细胞。在 B16.F10 黑色素瘤模型中，全身给药 SR-717 可降低肿瘤负荷，其疗效优于在该低免疫原性模型中观察到的抗 PD-1 或抗 PD-L1 疗法。重要的是，尽管SR-717诱导的IFN-β水平较低，但全身给药仍产生了显著疗效，这表明在肿瘤模型中，其疗效阈值可能远低于先前报道，且无需显著毒性即可达到。此外，SR-717激活STING后，以STING依赖的方式诱导PD-L1表达，这一发现也具有潜在的关键意义。这些结果对于在癌症治疗中选择与STING激动剂联合使用的药物以及给药方案的相对时间安排具有重要意义。可以推测，使用一种会增加第二种药物靶点相对丰度的药物进行治疗是无效的。与诱导开放构象的配体不同，SR-717能够诱导cGAMP介导的STING闭合构象，这使得我们能够探索不同潜在支架功能在体内以及在抗肿瘤免疫及其他相关领域全身分布情况下的相对重要性。与内源性产生的cGAMP（由胞质DNA在各种病理事件（例如基因组不稳定性）中产生）相比，细菌来源的环二磷酸核苷酸（例如，来自共生细菌的二磷酸鸟苷）的识别所相关的通路激活存在差异，这很容易理解，而且很可能是事实。每类激动剂都可能根据具体情况提供不同的治疗益处。[1] |
| 分子式 |
C15H9F2N5O3
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|---|---|
| 分子量 |
345.260469198227
|
| 精确质量 |
345.067345
|
| 元素分析 |
C, 51.30; H, 2.30; F, 10.82; Li, 1.98; N, 19.94; O, 13.67
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| CAS号 |
2375420-34-9
|
| 相关CAS号 |
SR-717;2375421-09-1
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| PubChem CID |
139434659
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
1.4
|
| tPSA |
110Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
25
|
| 分子复杂度/Complexity |
512
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
FC1C(=CC(C(=O)O)=C(C=1)NC(C1=CC=C(N=N1)N1C=NC=C1)=O)F
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| InChi Key |
WEBVQIJGIZVRGA-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C15H9F2N5O3/c16-9-5-8(15(24)25)12(6-10(9)17)19-14(23)11-1-2-13(21-20-11)22-4-3-18-7-22/h1-7H,(H,19,23)(H,24,25)
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| 化学名 |
4,5-difluoro-2-[(6-imidazol-1-ylpyridazine-3-carbonyl)amino]benzoic acid
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| 别名 |
SR-717 (free acid); CHEMBL4867353; 4,5-difluoro-2-[(6-imidazol-1-ylpyridazine-3-carbonyl)amino]benzoic acid; 2-(6-(1H-Imidazol-1-yl)pyridazine-3-carboxamido)-4,5-difluorobenzoic acid; 4,5-difluoro-2-{[6-(1H-imidazol-1-yl)pyridazine-3-carbonyl]amino}benzoic acid; 4,5-difluoro-2-[6-(1H-imidazol-1-yl)pyridazine-3-amido]benzoic acid;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.8964 mL | 14.4818 mL | 28.9637 mL | |
| 5 mM | 0.5793 mL | 2.8964 mL | 5.7927 mL | |
| 10 mM | 0.2896 mL | 1.4482 mL | 2.8964 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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CDN prodrug-1
STING agonist-45
STING agonist-46
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