Sodium Demethylcantharidate targets protein phosphatase 2A (PP2A), a serine/threonine phosphatase that regulates numerous cellular processes including cell cycle progression, apoptosis, and signal transduction. By inhibiting PP2A enzymatic activity, the compound modulates phosphorylation-dependent signaling pathways, leading to cell cycle arrest and apoptosis induction. The compound also induces apoptosis in hepatocellular carcinoma cells via ER stress, suggesting involvement of the unfolded protein response pathway. It is also described as an endogenous metabolite.

去甲基斑蝥酸钠已被证实能有效抑制小鼠肝细胞的增殖，其IC50值仅为10 μM。体外实验表明，去甲基斑蝥酸钠对多种癌症具有优异的抗癌活性。它通过内质网应激诱导肝癌细胞凋亡。该化合物抑制PP2A活性，从而调控一系列复杂的细胞过程，包括细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡和抑制血管生成。作为斑蝥素的合成类似物，它具有强大的抗肿瘤活性。该化合物在水中的溶解度为41 mg/mL (196.98 mM)，便于体外和体内制剂的制备。

现有文献中关于去甲基斑蝥酸钠的体内具体数据有限。然而，鉴于其强大的体外抗癌活性以及与已进行体内研究的去甲斑蝥素的结构相似性，预计该化合物在多种癌症动物模型中均能显示出疗效。该化合物能够通过内质网应激诱导细胞凋亡并抑制PP2A，提示其在肝细胞癌和其他恶性肿瘤的体内研究中具有潜在应用价值。此外，它也可能在血管生成研究中发挥作用。

采用磷酸酶活性测定法评估PP2A抑制活性。将重组PP2A酶与磷酸肽底物和不同浓度的去甲基斑蝥酸钠孵育。采用比色法或荧光法检测磷酸盐的释放，并根据剂量反应曲线计算IC50值。通过检测caspase-3/7活性、Annexin V/PI染色和DNA片段化来评估癌细胞系中的细胞凋亡诱导情况。采用Western blot法检测内质网应激标志物，如CHOP、GRP78和PERK的磷酸化水平。

将细胞接种于96孔微孔板（1×10⁴个细胞/孔/孔；100 μl），每组设四个复孔，待细胞平衡后，用药物处理72小时（顺铂：1-5 μM；DMC：2-200 μM；卡铂：50-3000 μM）。之后，加入MTT溶液（5 mg/ml，20 ml，溶于磷酸盐缓冲液），并将细胞在37℃下孵育4小时。之后，移除 MTT/培养基，将甲臜产物溶解于 150 ml DMSO 中，并使用微孔板读数仪在 570 nm 波长处测定吸光度。

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将肝细胞癌细胞系（例如 HepG2、Huh7）和其他癌细胞系在添加 10% FBS 的适宜培养基中，于 37°C、5% CO₂ 条件下培养。用不同浓度的去甲基斑蝥酸钠处理细胞 24-72 小时。使用 MTT、CCK-8 或 CellTiter-Glo 检测法评估细胞活力。使用 Annexin V-FITC/PI 双染法通过流式细胞术评估细胞凋亡。通过 Western blot 分析 PP2A 靶蛋白、内质网应激标志物和凋亡相关蛋白的表达。使用碘化丙啶染色和流式细胞术分析细胞周期分布。

体内疗效研究将在小鼠异种移植模型中进行。癌细胞将被皮下植入免疫缺陷小鼠体内。一旦肿瘤达到一定大小，将通过灌胃或腹腔注射给予适当剂量的去甲基斑蝥酸钠。每周测量两次肿瘤体积，并监测体重以评估毒性。研究结束时，将收集肿瘤进行组织学分析，并评估细胞凋亡标志物、PP2A活性和内质网应激标志物。然而，目前尚无针对该化合物的具体已发表方案。

吸收、分布和排泄
可能经皮肤吸收……给大鼠口服碳标记的内源性除草剂后，超过90%的放射性物质从粪便中回收。其余部分从尿液和呼出气体中回收。给药剂量几乎在48小时内完全回收。当蓝鳃太阳鱼在水族箱中暴露于含有2 ppm碳标记内源性除草剂的水中时，鱼吸收的除草剂不到1%。碳标记浓度最高的是内脏，最低的是肌肉。内源性除草剂也通过消化道被鱼吸收。……给两只哺乳期大鼠服用标记的内源性除草剂，以确定其是否会排泄到乳汁中。在分娩前连续五天，每天口服0.2毫克内源性除草剂（溶于10%蔗糖溶液）。产后，连续五天每天给母鼠口服0.4毫克甲胺磷（溶于10%蔗糖溶液）。处死幼鼠后，在任何组织或胃内容物中均未检测到放射性，表明甲胺磷不会分泌到哺乳母鼠的乳汁中。
有关甲胺磷（6种）的吸收、分布和排泄的更完整数据，请访问HSDB记录页面。

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代谢/代谢物
本文综述了广泛使用的除草剂甲胺磷在各种生物体和系统中的代谢途径。有限的研究结果表明，植物和鱼类吸收的甲胺磷可完全代谢，但在哺乳动物体内，它主要以结合态排出体外。

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去甲基斑蝥酸钠在水中的溶解度高达 41 mg/mL (196.98 mM)，这有利于其配制成体内给药制剂。目前尚无大量药代动力学数据报道。该化合物为小分子（分子量 208.14 g/mol），水溶性高，预计口服或肠外给药后具有良好的生物利用度。需要进行药代动力学研究，以确定半衰期、清除率、分布容积和动物模型口服生物利用度等参数。该化合物应以粉末形式储存于 -20°C。

相互作用
内皮素和异丙基苯基氨基甲酸酯的复方制剂 Murbetol 的除草活性比单独使用任一成分高数百倍。乙醇和其他小分子醇类以剂量依赖的方式抑制 L1 介导的细胞黏附和神经突生长。乙醇对 L1 介导的黏附的抑制作用可能导致胎儿酒精综合征。尽管乙醇抑制 L1 黏附的药理机制已被充分阐明，并且已鉴定出拮抗分子，但其细胞机制仍不清楚。从同一稳定 L1 转染细胞系中鉴定出乙醇敏感和乙醇不敏感的细胞系，表明其他细胞因子调节乙醇的作用。本研究探讨了细胞内信号分子在乙醇抑制 L1 黏附中的作用。 L1介导的功能受磷酸化事件调控，已知多种激酶可磷酸化L1，包括酪蛋白激酶II (CK2)、ERK 1/2和p90rsk。在稳定表达人L1的乙醇敏感型NIH/3T3细胞(2A2-L1)和经BMP-7处理的NG108细胞中，CK2活性的药理学抑制阻断了乙醇对L1黏附的抑制作用。然而，乙醇对CK2活性或亚基定位没有直接影响。接下来，我们研究了蛋白磷酸酶抑制剂对乙醇敏感性的影响。用冈田酸预处理2A2-L1细胞和经BMP-7处理的NG108细胞，可显著降低乙醇对L1黏附的抑制作用，且呈剂量依赖性(IC50 = 10 nM)。另一种磷酸酶抑制剂内皮素也观察到了类似的效果。在没有乙醇的情况下，两种药物均未对L1细胞黏附产生任何影响。CK2和磷酸酶活性对于乙醇敏感性的必要性可能源于PP2A磷酸酶受CK2激活这一事实。因此，抑制CK2也可能降低PP2A活性。乙醇对CK2活性没有直接影响这一事实支持了以下观点：除了CK2之外，另一种蛋白质（PP2A）可能是L1细胞黏附对乙醇敏感性的更直接调节因子。总之，这些结果表明，乙醇对L1细胞黏附的抑制作用可能受细胞内信号通路调控，并为开发乙醇拮抗剂提供了新的途径。磷酸二酯酶5A抑制剂在缺血/再灌注损伤和心脏肥大中的有益作用已得到充分证实。抑制心脏Na+/H+交换器（NHE-1）也对这些疾病有益，研究表明这两种治疗策略之间可能存在联系。为了进一步了解磷酸二酯酶 5A 抑制剂降低 NHE-1 活性的细胞内通路，我们利用分离的猫心肌细胞进行了实验。在无碳酸氢盐条件下，通过细胞内 pH 值从持续酸性负荷中恢复的速率来评估 NHE-1 活性。使用西地那非 (1 μmol/L) 抑制磷酸二酯酶 5A 并不影响基础细胞内 pH 值；然而，它确实降低了酸性负荷后的质子外流 (J(H)；单位为毫摩尔/升/分钟)（对照组为 6.97 ± 0.43，西地那非组为 3.31 ± 0.58；P < 0.05）。当使用 100 nmol/L 冈田酸同时阻断蛋白磷酸酶 1 和 2A 时，西地那非的作用被逆转（质子外流：6.77 ± 0.82）。相反，选择性抑制蛋白磷酸酶2A（1 nmol/L 冈田酸或100 μmol/L 内皮素）并未产生相同的效果（分别为3.86 ± 1.0和2.61 ± 1.2），表明西地那非诱导的NHE-1抑制仅涉及蛋白磷酸酶1。此外，西地那非可阻止酸中毒诱导的NHE-1磷酸化水平升高，而不影响细胞外信号调节激酶1/2-p90 (RSK)通路的激活。我们的结果表明，在酸负荷后细胞内pH恢复过程中，磷酸二酯酶5A抑制剂通过蛋白磷酸酶1依赖性通路降低NHE-1磷酸化水平，从而降低NHE-1活性。

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非人类毒性值
大鼠口服LD50：酸性（技术级）38-51 mg/kg
大鼠口服LD50：钠盐（19.2%溶液）182-197 mg/kg
大鼠口服LD50：氨基盐（66.7%制剂）206 mg/kg
雄性大鼠口服LD50：57 mg/kg
有关ENDOTHALL（6项）更完整的非人类毒性数据，请访问HSDB记录页面。

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去甲基斑蝥酸钠的毒理学数据有限。作为斑蝥素的合成类似物，斑蝥素已知具有显著毒性（斑蝥素是一种强效起泡剂和毒素），因此该化合物的安全性需要仔细评估。然而，已知去甲基化（去甲斑蝥素）可在保持抗肿瘤活性的同时降低毒性。任何临床开发之前都需要进行全面的毒理学研究。该化合物应采取适当的安全预防措施进行处理。

[1]. Anticancer Drugs. 2005 Sep;16(8):825-35.

一水合物是一种无色、无腐蚀性的晶体，用作选择性除草剂。内皮素二钠是一种有机分子实体。一种猪胰酶制剂，其脂肪酶含量已标准化。另见：胰脂肪酶（注：已移至此处）；内皮素二钠（注：已移至此处）。作用机制：环磷酸腺苷依赖性蛋白激酶 (PKA) 和钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II (CaMKII) 介导的磷酸化激活神经末梢中的组胺合成，但尚未研究使其失活的磷酸酶。本研究表明，蛋白磷酸酶 2A (PP2A)/蛋白磷酸酶 1 (PP1) 抑制剂冈田酸可使含有组胺能神经末梢的大鼠皮质微棱柱中的组胺合成增加至多两倍。 PP2A/PP1抑制剂卡利克林能模拟这种效应，但其无活性类似物1-去甲冈田酮则不能。其他磷酸酶抑制剂，如内氧氟沙星（PP2A抑制剂）、氯氰菊酯和环孢素A（蛋白磷酸酶2B抑制剂，PP2B抑制剂），其效应则低得多。冈田酸的作用似乎是通过激活组胺合成酶——组氨酸脱羧酶介导的。PKA介导的组胺合成激活降低了冈田酸的EC50值和最大效应。另一方面，CaMKII介导的组胺合成激活降低了冈田酸的最大效应，但增加了其EC50值。总之，我们的结果表明，脑内组胺的合成受磷酸酶PP2A和PP1（以及可能的PP2B）以及蛋白激酶的调控。我们利用蛋白磷酸酶（PP）抑制剂和原代培养的大鼠小脑胶质细胞，研究了PP活性在胶质细胞解毒外源性过氧化氢（H₂O₂）中的作用。海洋毒素冈田酸（OKA）是PP1和PP2A的强效抑制剂，可导致星形胶质细胞浓度依赖性退化，并显著增加过氧化氢自由基的生成。亚毒性浓度的OKA暴露显著增强了外源性H₂O₂的毒性。在没有毒素的情况下，估计3小时后使星形胶质细胞存活率降低50%的H₂O₂浓度为720 ± 40 μM；而在毒素存在的情况下，该浓度估计为85 ± 30 μM。过氧化物酶抑制剂calyculin A和endothall也增强了H₂O₂对小脑星形胶质细胞的毒性。 OKA对神经胶质细胞过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶均产生时间依赖性抑制作用，3小时后这些酶的活性降低约50%，而其他酶的活性不受影响。此外，OKA降低了细胞内总谷胱甘肽含量，并将氧化型谷胱甘肽的含量增加至总谷胱甘肽的约25%。OKA处理的星形胶质细胞清除培养基中H₂O₂的速度约为对照组的一半。我们的研究结果表明，PP活性在抗氧化机制中起着至关重要的作用，保护星形胶质细胞免受H₂O₂损伤。

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去甲基斑蝥酸钠（去甲斑蝥素钠）是去甲斑蝥素的二钠盐，去甲斑蝥素是斑蝥素的去甲基类似物。它通过抑制PP2A和诱导内质网应激介导的细胞凋亡，表现出强大的抗肿瘤活性。其水溶性为41 mg/mL。目前尚无临床试验或批准。仅供研究使用。

C8H8NAO5-

207.13600

207.027

13114-29-9

Demethylcantharidate disodium;129-67-9

8519

Cyrstalline, white solid

Converted to anhydride at 90 °C
Colorless crystals. MP: 144 °C /Endothall monohydrate/

89.49

0

5

0

15

224

0

[O-]C(C1C(C([O-])=O)C2OC1CC2)=O.[NaH]

XRHVZWWRFMCBAZ-UHFFFAOYSA-L

InChI=1S/C8H10O5.2Na/c9-7(10)5-3-1-2-4(13-3)6(5)8(11)12;;/h3-6H,1-2H2,(H,9,10)(H,11,12);;/q;2*+1/p-2

disodium;7-oxabicyclo[2.2.1]heptane-2,3-dicarboxylate

Sodium Demethylcantharidate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O: ~50 mg/mL (~240.2 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。