mGluR5 (Ki = 1.7 nM)
Metabotropic glutamate receptor type 5 (mGlu5/mGluR5); allosteric binding site. Functional IC50 for inhibition of quisqualate-induced PI accumulation in hmGluR5-expressing cells: 2.4 nM (95% CI: 0.5-12 nM). IC50 for inhibition of glutamate-induced calcium release: 2.3 nM (95% CI: 2.1-2.5 nM). Ki from [3H]-M-MPEP displacement: 3.5 nM (95% CI: 3.1-4.0 nM). [1]

功能测定中的效力和选择性[1]
ABP688 最初被证明是奎斯奎酸诱导的 L(tk-) 细胞中表达重组人 mGluR5 (hmGluR5) 的磷脂酰肌醇 (PI) 积累的强效拮抗剂，IC50 值为 2.4 nM (95% CI: 0.5–12 nM) (图 2A)。在同一实验条件下，ABP688 完全抑制了谷氨酸诱导的钙释放，IC50 值为 2.3 nM（95% CI：2.1–2.5 nM）（数据未显示）。在浓度高达 10 μM 时，ABP688 对 hmGluR5 表达细胞中通过刺激内源性嘌呤能受体诱导的 ATP 诱导的 PI 积累没有影响（图 2A），对 hmGluR1 表达细胞中奎斯奎酸诱导的 PI 积累也没有影响。ABP688 对 hmGluR5 或 hmGluR1 表达细胞中的基础 PI 水平也没有影响（图 2B）。

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[3H]-M-MPEP 在表达 hmGluR5 的细胞膜中的置换作用 [1]
使用 [3H]-M-MPEP 进行放射性配体竞争实验，测定了 ABP688 与 mGluR5 跨膜结构域变构结合位点的亲和力。9 在表达重组人 mGluR5 (hmGluR5) 的 L(tk-) 细胞制备的膜中，23 ABP688 以浓度依赖的方式完全置换了 [3H]-M-MPEP 的结合（图 3），IC50 值为 7.0 nM（95% CI：6.1–8.1），相应的 Ki 值为 3.5 (3.1, 4.0) nM。Hill 系数为 −0.92 ± 0.10（±95% CI）。

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受体结合实验[1]
根据标准过滤方法²⁴测定了ABP688与多种中枢神经系统GPCR受体、离子通道或转运蛋白的体外结合亲和力。浓度为1和10 μM的ABP688均不与任何受试受体或转运蛋白结合，证实了ABP688具有高度选择性（详情见补充信息）。

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[³H]ABP688的体外结合特性[1]
在由大鼠全脑组织制备的膜中测定了[³H]ABP688与天然mGlu⁵受体的结合特性。观察到的结合和解离时间进程可以用单指数模型很好地描述，相应的速率常数分别为 kobs = 0.103 ± 0.006 (n = 3) 和 k−1 = 0.075 ± 0.006 min−1 (n = 5)。计算得到的结合速率常数 k1 为 0.07 nM−1 min−1。根据这些值，计算出平衡结合常数 Kd 为 1.07 nM。[3H]ABP688 的特异性结合是可饱和的，可以用单结合位点模型很好地描述，其 Bmax 和 Kd 值分别为 0.87 ± 0.096 pmol/mg 蛋白和 2.3 ± 0.34 (n = 4) nM。 （图 4A–C）[1]
在一系列后续实验中，我们利用 [3H]ABP688 测定了 ABP688、MPEP、M-MPEP 以及 mGluR1 拮抗剂 CPCCOEt 对表达 hmGluR5 的细胞膜制剂和大鼠全脑组织的亲和力。在两种制剂中，ABP688、MPEP 和 M-MPEP 均以浓度依赖的方式完全置换 [3H]ABP688，Hill 系数接近负 1，而 CPCCOEt 在浓度高达 10 μM 时对 [3H]ABP688 的结合没有明显影响（图 5 和表 1 列出了相应的亲和力）。溶剂 DMSO 对结合没有影响（数据未显示）。 APB688、MPEP 和 MPEP 与 hmGluR5 和大鼠脑膜的结合亲和力几乎相等，表明体外重组人受体和天然大鼠受体之间没有明显的物种差异。

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ABP688 是 mGluR5 的强效拮抗剂。它能完全抑制表达重组人 mGluR5 (hmGluR5) 的 L(tk-) 细胞中奎斯奎酸 (0.3 μM) 刺激的磷脂酰肌醇 (PI) 积累，IC50 为 2.4 nM，但不影响相同细胞中内源性嘌呤能受体介导的 ATP (10 μM) 刺激的 PI 积累，也不影响基础 PI 水平。在浓度高达 10 μM 时，ABP688 对表达 hmGluR1 的细胞中奎斯奎酸 (40 μM) 刺激的 PI 积累没有影响，对表达 hmGluR1 的细胞中基础 PI 水平也没有影响。[1]
在大鼠全脑膜中，[3H]ABP688 特异性、可逆且饱和地与天然 mGlu5 受体结合，Kd 为 2.3 ± 0.34 nM，Bmax 为 0.87 ± 0.096 pmol/mg 蛋白。结合速率常数 k1 为 0.07 nM-1min-1，解离速率常数 k-1 为 0.075 ± 0.006 min-1，根据动力学计算的平衡 Kd 为 1.07 nM。 [1]
在大鼠脑膜上使用 [3H]ABP688 (1.5 nM) 进行的竞争性结合试验中，ABP688 完全置换了特异性结合，Ki 值为 1.8 nM（95% CI：1.5-2.2 nM）。MPEP 和 M-MPEP 也分别以 Ki 值 19 nM 和 11 nM 完全置换了特异性结合，而 CPCCOEt（mGluR1 拮抗剂）在浓度高达 10 μM 时未显示出明显的置换作用。[1]
使用 5 nM [3H]ABP688 (70 Ci/mmol) 对大鼠脑矢状切片进行体外放射自显影显示，伏隔核、尾状核壳核、海马、嗅结节、杏仁核、枕叶和额叶皮层中存在高至中等的特异性结合；丘脑、下丘脑、中脑、脑桥延髓和小脑的结合水平较低或接近背景水平。使用 10 μM MPEP 测定的非特异性结合与背景几乎没有区别。[1]

大鼠脑片放射自显影[1]
体外放射自显影是一种成熟的方法，用于测定放射性配体的结合特性和标记位点的分布。在大鼠脑片中，用5 nM (70 Ci/mmol) 的[3H]ABP688孵育后，产生了区域差异化的结合模式（图6A，左侧面板）。这种结合可被MPEP (10 μM)置换，剩余的（非特异性）结合与背景几乎无法区分（图6）。[1]
在伏隔核、尾状核壳核、海马、嗅结节、杏仁核以及枕叶和额叶皮层中观察到高至中等特异性结合（按降序排列）；在丘脑、下丘脑、中脑、脑桥延髓和小脑中发现了低至接近背景的结合（图 7）。这种模式与使用 [3H]methoxy-PyEP,10 获得的放射自显影结果以及使用 mGluR5 特异性抗体通过免疫细胞化学获得的 mGluR5 表达模式或通过原位杂交确定的 mGluR5 mRNA 分布一致。综上所述，我们目前的研究结果表明[3H]ABP688结合与mGluR5表达之间存在良好的（定性）相关性，且在天然脑组织中非特异性结合较低，这促使我们开展进一步的体内分析。在大鼠静脉注射4 μg/kg [3H]ABP688后，药物迅速且广泛地渗透到大脑，给药后5分钟即达到脑内最大浓度，脑血浆浓度比高达20。脑和血浆中的药物浓度随终末半衰期的延长而下降，分别为1.1小时和1.0小时，表明药物通过被动扩散穿过血脑屏障。给药后5分钟，脑内原药的含量占给药剂量的0.8%。未检测到放射性标记的代谢物进入大脑。[1]

[3H]-M-MPEP 竞争性实验 [1]
\n使用 [3H]-M-MPEP 的放射性配体置换实验基本按照先前描述的方法进行。²² 详细信息见补充材料。\n

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\n\n[3H]ABP688 结合实验 [1]
\n反应在 96 孔微孔板中进行，每孔最终反应体积为 200 μl。反应混合物包含悬浮于反应缓冲液中的膜，该缓冲液由 Na-Hepes (30 mM)、NaCl (110 mM)、MgCl₂ (1.2 mM)、KCl (5 mM) 和 CaCl₂·2H₂O (2.5 mM) 组成，pH 为 8.0。[3H]ABP688 和其他试剂的浓度如下所示。样品在 37 °C 下孵育（时间见下文），然后使用 96 孔板过滤装置，通过玻璃纤维滤膜（Unifilter-96 GF/C 板）过滤。滤膜用冷测定缓冲液冲洗五次，干燥后加入闪烁液（Ultimate Gold XR，每孔 100 μl）。然后将测定板振荡 2-3 小时，随后在液体闪烁计数器中计数。每个测定均重复三次。\n

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\n\n动力学研究 [1]
\n为了评估结合的时间进程，将 [3H]ABP688 (0.4 nM) 和膜（约 20 μg/孔，hmGluR5 40 μg/孔）的混合物在过滤前于 37 °C 下孵育 1 至 90 分钟。在预先用 [3H]ABP688 (0.4 nM) 平衡 60 分钟的膜中评估了解离过程的时间进程，之后在过滤前 1–90 分钟加入 10 μM M-MPEP。使用单指数模型推导观察到的结合速率常数 (kobs) 和解离速率常数 (k−1)。结合速率 (k1) 根据公式 k1 = (kobs − k−1)/[L] 计算，其中 [L] 为添加的放射性配体浓度。\n

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\n\n饱和结合和置换实验 [1]
\n通过向膜中添加不同浓度的 [3H]ABP688 (0.2–50 nM) 来评估饱和结合（大鼠 40 μg/孔，hmGluR5 15 μg/孔）。样品在过滤前于 37 °C 下平衡 60 分钟。[3H]ABP688 的非特异性结合定义为在过量 M-MPEP (10 μM) 存在下孵育的样品的放射性。置换实验的样品包含固定浓度的 [3H]ABP688 (1.5 nM) 和其他配体，最终浓度根据实验需要而定。动力学和平衡结合实验的数据采用 GraphPad Prism 3.03 软件进行非线性曲线拟合分析。抑制常数根据 Cheng-Prussoff 关系式计算。\n

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\n\nDMPK 研究 [1]
\n\n体外血液分布和蛋白结合 [1]
\n使用新鲜的肝素化人血和鼠血进行血液分布研究并获取血浆。\n

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\n血液分布 [1]
\n向鼠血和人血中加入浓度为 5–500,000 pg/mL 的 [3H]ABP688；通过离心（1500g，10 分钟，37 °C）分离血细胞和血浆。在 37 °C 下测量血液分布，并定量血浆和血液中的总放射性；使用微量血细胞比容毛细管（13,000g，5 分钟，n = 3）测定血细胞比容值。血浆中化合物的分数 (fP) 计算公式为 fP (%) = (Cp/Cb) × (1-H) × 100，其中 Cb 为血液浓度，Cp 为血浆浓度，H 为血细胞比容值。\n

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\n血浆蛋白结合 [1]
\n向血浆中加入 [3H]ABP688，使其浓度达到 50–500,000 pg/mL，并在 37 °C 下使用 Centrifree® 装置（分子量截留值为 30 kDa）进行超滤。通过液体闪烁计数法测定超滤液中的总放射性（Cu，游离化合物浓度）以及超滤前引入储液罐的样品中的总放射性（Cp，化合物的总血浆浓度）。血浆中游离（fu）分数计算公式为：fu (%) = Cu/Cp × 100。\n

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\n\n体外生物转化和代谢物[1]
\n\n肝微粒体[1]
\n使用肝微粒体混合物。将[3H]ABP688（0.92 μmol/L）与肝微粒体（0.2 mg 蛋白/mL）在 0.1 M 磷酸钠缓冲液（pH 7.4）中于 37 °C 孵育 40 分钟，该缓冲液含有 4 mM UDPGA、1 mM β-NADPH、5 mM MgCl2 和 12 μg/mL。使用高效液相色谱-放射性检测法在线分析各个样品，以检测未代谢化合物的消耗以及代谢物的生成；根据母体化合物的动力学数据计算每种物质的固有清除率。

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采用放射性配体竞争实验，利用[3H]-M-MPEP测定ABP688与mGluR5变构结合位点的亲和力。将表达重组人mGluR5的L(tk-)细胞膜与2 nM [3H]-M-MPEP和不同浓度的ABP688在室温下于测定缓冲液中孵育60分钟。在1 μM未标记的M-MPEP存在下测定非特异性结合。孵育后，将样品通过玻璃纤维滤膜过滤、洗涤并计数。 ABP688 以浓度依赖的方式完全取代 [3H]-M-MPEP 的结合，IC50 为 7.0 nM（95% CI：6.1-8.1），Hill 系数为 -0.92 ± 0.10，对应的 Ki 为 3.5 nM（95% CI：3.1-4.0 nM）。[1]
为了表征 [3H]ABP688 的结合，将大鼠全脑膜或表达 hmGluR5 的细胞膜与 [3H]ABP688 在测定缓冲液（30 mM Na-Hepes、110 mM NaCl、1.2 mM MgCl2、5 mM KCl、2.5 mM CaCl2，pH 8.0）中孵育。动力学研究：将 0.4 nM [3H]ABP688 与膜在 37°C 下孵育 1-90 分钟以测定结合情况；在平衡 60 分钟后加入 10 μM M-MPEP 并孵育 1-90 分钟以测定解离情况。饱和结合实验在 37°C 下用 0.2-50 nM [3H]ABP688 孵育 60 分钟进行；非特异性结合用 10 μM M-MPEP 测定。数据拟合采用单指数模型和单一位点结合模型。[1]
体外放射自显影：将雄性 Sprague-Dawley 大鼠断头处死，取出脑组织并冷冻。将矢状切片（10 μm）切取，解冻后贴于载玻片上，在室温下用 KRH 缓冲液（pH 7.4：Hepes 20 mM，NaCl 118 mM，KCl 4.8 mM，CaCl2 2.5 mM，MgSO4 1.2 mM，NaOH 10 mM）预孵育 30 分钟，然后在含有 0.05 mg/mL BSA 和 5 nM [3H]ABP688 的 KRH 缓冲液中孵育 15 分钟。使用 10 μM MPEP 测定非特异性结合。切片经洗涤（冰冷的 KRH 缓冲液洗涤 3 次，每次 20 分钟；10 倍稀释的冰冷 KRH 缓冲液洗涤 20 秒；冰冷蒸馏水快速浸洗），干燥后贴于薄膜上，4°C 保存 6 周。采用计算机图像分析法测量光密度。[1]

磷酸肌醇积累测定 [1]
在 l-hmGlu5a 或 CHO-hmGlu1b 细胞中测定磷酸肌醇水解，方法是在锂存在下测定肌醇单磷酸的积累，基本与之前发表的方法相同。详细信息见补充信息。

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膜制备 [1]
表达 hmGluR5 的细胞膜由 CMT 根据先前建立的方案定制制备。大鼠脑膜购自 ABS。用于受体结合实验的所有细胞膜均购自 Perkin-Elmer 或 Euroscreen。详细信息见补充信息。

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功能测定使用表达重组人 mGluR5 或 mGluR1 的 L(tk-) 细胞。磷酸肌醇 (PI) 积累测定：将细胞与 [3H]肌醇孵育，然后与测试化合物和奎斯奎酸（mGluR5 为 0.3 μM，mGluR1 为 40 μM）或 ATP (10 μM) 孵育 30 分钟。通过阴离子交换色谱法分离并计数总 [3H]肌醇磷酸酯。ABP688 完全抑制了 hmGluR5 细胞中奎斯奎酸刺激的 PI 积累，IC50 为 2.4 nM，但对 ATP 刺激的 PI 积累或基础 PI 水平没有影响。在 hmGluR1 细胞中，浓度高达 10 μM 的 ABP688 对奎斯奎酸刺激或基础 PI 积累没有影响。[1]
对于钙释放测定，将表达 hmGluR5 的细胞加载钙敏感染料，并用谷氨酸刺激； ABP688 完全抑制谷氨酸诱导的钙释放，IC50 为 2.3 nM（95% CI：2.1-2.5 nM）。[1]

脑片放射自显影[1]
雄性Sprague-Dawley大鼠（RA238；190-220 g）单独饲养于II型聚碳酸酯笼中。动物房温度可控，并配备人工照明（6:00-18:00，开灯）。动物可自由摄取水和食物。动物断头处死后，取出脑组织，立即用干冰冷冻，并保存在-80℃。使用冰冻切片机从冷冻脑组织中切取10 μm厚的矢状脑片，用于离体受体放射自显影，并将切片解冻后贴于硅烷涂层载玻片上。受体放射自显影按以下步骤进行：将切片在室温下于含20 mM HEPES（2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸）、pH 7.4、118 mM NaCl、4.8 mM KCl、2.5 mM CaCl₂、1.2 mM MgSO₄和10 mM NaOH的KRH缓冲液（Krebs-Ringer HEPES缓冲液）中预孵育30分钟后，将切片在室温下于添加了0.05 mg/mL BSA（牛血清白蛋白）和5 nM [³H]ABP688（70 Ci/mmol）的KRH缓冲液中孵育15分钟。通过在相邻切片中加入10 μM MPEP进行孵育，测定非特异性结合。标记切片的洗涤步骤如下：先用冰冷的KRH缓冲液（不含配体）洗涤三次，每次20分钟；再用冰冷的10倍稀释KRH缓冲液洗涤20秒；最后用冰冷的蒸馏水快速浸洗以去除盐分。最后，将切片在冷风流下干燥。将标记的组织与BioMax MR胶片在4℃下贴附6周，生成放射自显影图。切片最后用0.5%甲酚紫进行复染，并根据Paxinos和Watson的方法³¹进行细胞核定位。结合数据通过计算机图像分析系统对BioMax MR胶片的光密度进行分析。对于给定的标记区域，测量总结合和非特异性结合对应的光密度（OD）。

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[3H]ABP688 在大鼠体内的分布 [1]
本研究使用 220–250 g 的雄性 Wistar 大鼠。注射液由 28 μg [3H]ABP688 溶于 7.0 mL 5% 乙醇/葡萄糖溶液（1:99 v/v）配制而成。在轻度异氟烷麻醉下，将剂量（1 mL/kg）注射到手术暴露的股静脉中。大鼠（每个采样时间点 n = 3）经异氟烷吸入处死，采集肝素化血液并离心以获得血浆；解剖组织（肺、心脏、肝脏、肾脏、脂肪、肌肉、皮肤和脑）。所有样本的放射性均采用液体闪烁计数法测定。采用液相色谱-放射性同位素示差折光检测器（LC-RID）测定血浆和组织匀浆中未标记的[3H]ABP688的浓度，以5 μg未标记的ABP688作为内标：在LC-18色谱柱（Supelcosil 5 μm，4.6 × 150 mm，40 °C，10 mM NH4OAc-乙腈 (45:55 v/v)，1.0 mL/min，紫外检测，λ = 312 nm）上，将[3H]ABP688与代谢物和内源性化合物分离。收集[3H]ABP688对应的峰并定量放射性。最后，根据洗脱液中放射性与未放射性标记的ABP688紫外峰面积的比值计算[3H]ABP688的浓度。在体内分布研究中，使用雄性Wistar大鼠（220-250 g）。将[3H]ABP688溶解于乙醇/5%葡萄糖溶液（1:99 v/v）中，配制成浓度为28 μg/7.0 mL的溶液。在轻度异氟烷麻醉下，将4 μg/kg（1 mL/kg）的剂量经手术暴露的股静脉静脉注射。在不同时间点，用异氟烷吸入法处死大鼠（每个采样时间点n=3）。收集肝素化血液并离心以获得血浆。解剖组织（肺、心脏、肝脏、肾脏、脂肪、肌肉、皮肤、脑）。[1]
用于放射自显影的雄性Sprague-Dawley大鼠（190-220 g）单独饲养，在温度和人工光照（6:00-18:00开灯）条件下自由摄取水和食物。断头处死动物，取出脑组织，立即用干冰冷冻，并保存在-80°C。 [1]

大鼠静脉注射 4 μg/kg [3H]ABP688 后，血浆浓度迅速下降，呈双相半衰期，半衰期分别约为 5 分钟 (t1/2,1) 和 1 小时 (t1/2,2)；与第二个半衰期相关的 AUC 占比为 59%。血清除率为 60 mL/min，接近大鼠心输出量，表明存在显著的肝外代谢。稳态分布容积 (VSS) 为 11 L/kg。[1]
体外血液分布：[3H]ABP688 在 37°C 时迅速在血浆和血细胞之间达到平衡。大鼠血浆浓度为 76%，人血浆浓度为 92%；血血浆浓度比分别为 0.74（大鼠）和 0.57（人）。 [1]代谢稳定性：与大鼠和人肝微粒体（0.2 mg 蛋白/mL，37°C 孵育 40 分钟）显示中等至高的固有清除率（约 150 μL/min/mg）。主要代谢途径为氧化羟基化，生成氚化水和四种单羟基化代谢物。与大鼠相比，未检测到人特异性代谢物。[1]静脉微剂量给药后，血浆中未代谢的母体化合物在 5 分钟时降至血浆放射性的 34%；母体药物的 AUC 仅占总放射性 AUC 的 1.4%。消除几乎完全通过代谢进行。未观察到放射性标记代谢物进入脑组织。[1]

血浆蛋白结合：[3H]ABP688 与血浆蛋白的结合与浓度无关，浓度范围为 50 至 500,000 pg/mL。大鼠血浆中平均游离分数为 6.8%，人血浆中为 4.4%。[1]
未观察到 ABP688 从脑部到脑部的主动转运。[1]

[1]. ABP688, a novel selective and high affinity ligand for the labeling of mGlu5 receptors: identification, in vitro pharmacology, pharmacokinetic and biodistribution studies. Bioorg Med Chem. 2007 Jan 15;15(2):903-14.

基于选择性拮抗剂MPEP的结构框架寻找mGluR5选择性PET示踪剂的初步尝试均告失败。直到最近，才报道了MTEP和MTEB（2-甲基-4-苯乙炔基噻唑）的¹¹C和¹⁸F衍生物可用于恒河猴的体内PET成像。[1]
我们的目标是找到一种比MPEP家族具有更优异示踪性能的分子，特别是更高的亲和力、选择性和更低的亲脂性。通过对原始结构进行靶向化学修饰，我们鉴定出了ABP688，它是MPEP家族芳香环被功能化环己烯酮部分取代的衍生物。[1]
与之前报道的具有取代芳香环的配体相比，这些修饰显著改善了其理化性质，例如log P值小于4，以及更高的水溶性（120 mg/L）。因此，ABP688显著改善了其理化性质，同时保持了对mGlu5受体变构位点的优异选择性和亲和力。其放射合成过程简便。在合成的最后一步，通过肟-7与碘甲烷烷基化引入标记，可以高放射化学产率和比活度地生成[3H]-或[11C]ABP688。[1] 体外实验表明，ABP688是hmGlu5受体的高效功能性抑制剂，能够以高亲和力（Ki = 3.5 nM）与人mGlu5受体结合。氚标记类似物[3H]ABP688的结合特性分析表明，它能以高特异性与人（表达hmGluR5的细胞）或大鼠（全脑）mGlu5受体结合。这种结合可被MPEP和M-MPEP完全取代，且是可逆的，非特异性结合水平极低。在大鼠全脑膜中，[3H]ABP688 的饱和结合实验显示其最大结合量 (Bmax) 为 0.87 ± 0.1 pmol/mg，解离常数 (Kd) 为 1.9 nM。ABP688 与一系列中枢神经系统受体的亲和力分析进一步证实了其对 mGluR5 的优异选择性。大鼠脑片放射自显影显示，[3H]ABP688 与纹状体、皮层和海马等脑区具有高度特异性结合，而与小脑或中脑区域的结合较低或不存在，这与已知的 mGlu5 受体分布一致。 [1] 在大鼠中，尽管[3H]ABP688与血浆蛋白广泛结合，但仍能快速且广泛地穿过血脑屏障（BBB），脑血浆浓度比高达20。静脉注射后5分钟内即可达到脑内最大浓度。重要的是，尽管代谢广泛，但在脑组织中未检测到任何可能干扰成像质量的代谢物。[1] 总之，ABP688的特性支持其用于[11C]放射性标记，并可进一步开发为PET示踪剂，用于脑组织中mGlu5受体的体内成像。此类示踪剂的预期临床益处是多方面的，包括研究受体表达、受体占有率以及选择作用于患者体内mGlu5受体的候选药物的临床剂量。

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ABP688 (2) 是一种选择性、非竞争性、可穿透血脑屏障的mGlu5受体拮抗剂，被开发为用于mGlu5受体体内成像的PET示踪剂。它是从一系列环己烯酮肟衍生物中筛选出来的，其理化性质优于MPEP系列。计算的logP值为2.4，实测的logP和logD（pH 6.8）均为3.4。pKa值为3.8。在pH 6.8的水溶性为120 mg/L。该化合物在80°C下，以粉末形式或在pH 7.4的缓冲液悬浮液中可稳定保存一周。用碘甲烷烷基化肟前体 7 可实现 11C 或 3H 的放射性标记。E-异构体效力更强。该化合物符合 PET 示踪剂的标准：logP<4、高亲和力（<10 nM）、选择性 >100 倍、脑摄取和清除迅速，且无可穿透脑组织的放射性标记代谢物。[1]

C15H16N2O

240.3

240.126

C, 74.87; H, 6.74; N, 11.71; O, 6.69

924298-51-1

1224977-89-2; 924298-51-1

11481862

Light brown to brown solid-liquid Mixture

2.854

34.48

0

3

3

18

411

0

CC1=NC(=CC=C1)C#CC2=CC(=NOC)CCC2

CNNZLFXCUQLKOB-BMRADRMJSA-N

InChI=1S/C15H16N2O/c1-12-5-3-7-14(16-12)10-9-13-6-4-8-15(11-13)17-18-2/h3,5,7,11H,4,6,8H2,1-2H3/b17-15+

3-[2-(6-Methyl-2-pyridinyl)ethynyl]-2-cyclohexene-1-one O-methyloxime

ABP-688; ABP 688; 871362-31-1; 2-chloro-4-((2,5-dimethyl-1-(4-(trifluoromethoxy)phenyl)-1H-imidazol-4-yl)ethynyl)pyridine; mGluR5 inhibitor; CTEP (RO4956371); 2-chloro-4-[2-[2,5-dimethyl-1-[4-(trifluoromethoxy)phenyl]imidazol-4-yl]ethynyl]pyridine; E3BWG5775S; CHEMBL3410223; ABP688

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~83.33 mg/mL (~346.77 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。