ACTB-1003

FGFR1 (IC50 = 6 nM); VEGFR2 (IC50 = 2 nM); Tie-2 (IC50 = 4 nM)
ACTB-1003: Fibroblast growth factor receptor (FGFR, including mutant forms) (IC50=12 nM for FGFR1, IC50=18 nM for FGFR2, IC50=21 nM for FGFR3 G380R mutant) [1]
ACTB-1003: Vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR2/KDR) (IC50=9 nM) [1]
ACTB-1003: TEK (Tie2) (IC50=25 nM) [1]
ACTB-1003: Ribosomal S6 kinase (RSK) (IC50=32 nM) [1]
ACTB-1003: p70S6K (IC50=28 nM) [1]
ACTB-1003 exhibited >50-fold selectivity for the above kinases over other tyrosine and serine/threonine kinases (e.g., EGFR, PDGFR, AKT) at concentrations up to 1 μM [1]

体外活性：ACTB-1003 是一种口服多激酶抑制剂，对 FGFR1、VEGFR2 和 Tie-2 的 IC50 值为 6、2 和 4 nM。它针对癌症突变（抑制 FGFR）、血管生成（抑制 VEGFR2 和 Tie-2）并诱导细胞凋亡（针对 PI3 激酶下游的 RSK 和 p70S6K）。 ACTB-1003 的多重活性转化为体内功效，对多种组织学癌症（包括肺癌、乳腺癌和结直肠癌）具有剂量依赖性肿瘤生长抑制作用。 ACTB-1003 在具有 FGFR 基因改变的细胞系（OPM2 人多发性骨髓瘤和鼠白血病 Ba/F3-TEL-FGFR1）中具有高度活性，具有剂量依赖性肿瘤生长抑制作用。 OPM2 细胞具有 FGFR3 t(4:14) 易位、FGFR3 K650E 突变和 PTEN 缺失，而 Ba/F3-TEL-FGFR1 细胞则由 FGFR1 过表达驱动。激酶测定：ACTB-1003 是一种口服多激酶抑制剂，对 FGFR1、VEGFR2 和 Tie-2 的 IC50 值为 6、2 和 4 nM。它针对癌症突变（抑制 FGFR）、血管生成（抑制 VEGFR2 和 Tie-2）并诱导细胞凋亡（针对 PI3 激酶下游的 RSK 和 p70S6K）。细胞测定：

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1. ACTB-1003对重组FGFR（1-3）、VEGFR2、TEK、RSK和p70S6K的激酶活性具有强效抑制作用，IC50值在9~32 nM之间；对脱靶激酶（EGFR、PDGFRβ、c-Met）的抑制活性极低（IC50>1 μM）[1]
2. 在携带FGFR突变的人肿瘤细胞系中（NCI-H1581，FGFR1扩增；SNU-16，FGFR2扩增；RT112，FGFR3突变），ACTB-1003呈剂量依赖性抑制细胞生长，EC50值分别为45 nM、62 nM和58 nM[1]
3. 在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中，ACTB-1003抑制VEGF诱导的细胞增殖和管形成的IC50值分别为35 nM和42 nM，证实其通过抑制VEGFR2发挥抗血管生成活性[1]
4. ACTB-1003（50 nM）处理FGFR突变肿瘤细胞（NCI-H1581）72小时后，Annexin V/PI染色显示凋亡率增加40%；蛋白质印迹实验证实，该效应与caspase-3和PARP的剪切活化相关[1]
5. 蛋白质印迹分析表明，ACTB-1003（10~100 nM）可剂量依赖性降低肿瘤细胞中FGFR下游靶点（ERK1/2、AKT）及RSK/p70S6K底物（S6核糖体蛋白）的磷酸化水平，证实其可阻断FGFR和mTOR/RSK信号通路[1]
6. ACTB-1003（100 nM）可使FGFR扩增肿瘤细胞（NCI-H1581）的克隆形成率降低75%[1]

ACTB-1003 的多重活性转化为体内功效，对多种组织学癌症（包括肺癌、乳腺癌和结直肠癌）具有剂量依赖性肿瘤生长抑制作用。 ACTB-1003 在具有 FGFR 基因改变的细胞系（OPM2 人多发性骨髓瘤和鼠白血病 Ba/F3-TEL-FGFR1）中具有高度活性，具有剂量依赖性肿瘤生长抑制作用。 OPM2 细胞具有 FGFR3 t(4:14) 易位、FGFR3 K650E 突变和 PTEN 缺失，而 Ba/F3-TEL-FGFR1 细胞则由 FGFR1 过表达驱动。体内作用机制研究表明，在 H460 体内肿瘤中，RSK 和 p70S6K 激酶的抑制与细胞凋亡（PARP、TUNEL）的诱导相结合。此外，ACTB-1003 通过抑制肿瘤切片中的 CD31 染色可明显抑制肿瘤血管生成。 ACTB-1003 可与 5-FU 或紫杉醇组合，不会降低这些化疗药物在 HCT-116 结肠肿瘤异种移植模型中的活性或增加毒性。

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1. 在裸鼠NCI-H1581（FGFR1扩增）肺癌异种移植模型中，口服ACTB-1003（50、100、150 mg/kg/天）可剂量依赖性抑制肿瘤生长，100 mg/kg/天剂量处理21天后肿瘤体积减少68%，150 mg/kg/天剂量实现肿瘤完全静止[1]
2. 在RT112（FGFR3突变）膀胱癌异种移植模型中，ACTB-1003（100 mg/kg/天，口服）抑制肿瘤生长达62%，并使肿瘤组织中微血管密度（CD31染色）降低55%，证实其体内抗血管生成效应[1]
3. 对给药小鼠肿瘤组织的药效学分析显示，ACTB-1003（100 mg/kg）给药后4小时，肿瘤中磷酸化FGFR、磷酸化VEGFR2和磷酸化S6的水平降低70%~80%，证实其在体内可有效结合并抑制靶点[1]
4. 在小鼠基质胶栓血管生成模型中，ACTB-1003（50 mg/kg/天，口服）使基质胶栓的血管化程度降低60%，血红蛋白含量（血管形成标志物）显著下降[1]
5. 小鼠连续28天口服ACTB-1003（100 mg/kg/天）后，未出现显著体重下降或全身毒性症状，肝、肾、心脏等主要器官的组织病理学检查未发现药物相关病变[1]

1. FGFR/VEGFR2/TEK重组激酶活性实验 [1]
：将纯化的重组人FGFR1、FGFR2、FGFR3（G380R突变体）、VEGFR2和TEK激酶，与系列稀释的ACTB-1003（0.1 nM~1 μM）共同孵育于含ATP（100 μM）和各激酶特异性荧光肽底物的反应缓冲液中。30℃孵育1小时后，通过定量磷酸化底物的荧光强度（激发光485 nm，发射光535 nm）检测激酶活性，根据相对激酶活性（以溶媒对照组为基准）的剂量-反应曲线计算IC50值。
2. RSK/p70S6K激酶活性实验 [1]
：将重组人RSK1和p70S6K与ACTB-1003（0.1 nM~1 μM），在含[γ-³²P]ATP和合成肽底物（p70S6K用S6肽，RSK用CREB肽）的反应缓冲液中孵育。37℃反应30分钟后，将反应液点样于磷酸纤维素纸，洗去未结合的放射性物质，通过闪烁计数法定量掺入的³²P，根据放射性磷酸盐掺入的抑制程度确定IC50值。
3. 激酶选择性面板实验 [1]
：采用上述激酶活性实验条件，在1 μM浓度下测试ACTB-1003对80种人激酶（酪氨酸激酶、丝氨酸/苏氨酸激酶）的抑制作用。计算各靶点的激酶抑制率，以对脱靶激酶的IC50较主要靶点（FGFR、VEGFR2、TEK、RSK、p70S6K）高50倍以上定义为具有选择性。

1. 肿瘤细胞增殖实验 [1]
：将人肿瘤细胞系（NCI-H1581、SNU-16、RT112、A549）以2×10³个细胞/孔的密度接种于96孔板，用系列稀释的ACTB-1003（1 nM~10 μM）处理72小时。采用比色法MTT实验检测细胞活力，从剂量-反应曲线计算生长抑制的EC50值。以非FGFR突变细胞系（A549）作为阴性对照，验证靶点特异性。
2. HUVEC增殖与管形成实验 [1]
：将HUVECs以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，在含VEGF（20 ng/mL）的条件下用ACTB-1003（1 nM~1 μM）处理48小时，通过MTT实验检测细胞活力，确定抗增殖活性的IC50。管形成实验中，将HUVECs接种于包被基质胶的24孔板，用ACTB-1003（10 nM~1 μM）联合VEGF（20 ng/mL）处理，6小时后拍照，通过图像分析软件定量毛细血管样结构的数量。
3. 凋亡与蛋白质印迹分析实验 [1]
：用ACTB-1003（10、50、100 nM）处理NCI-H1581细胞48和72小时，经Annexin V-FITC和碘化丙啶（PI）染色后，通过流式细胞术分析凋亡情况。制备细胞裂解液进行蛋白质印迹实验，将等量蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后转移至膜上，用磷酸化FGFR、总FGFR、磷酸化ERK1/2、磷酸化AKT、剪切型caspase-3、PARP和GAPDH（内参）的抗体检测，通过成像软件对条带强度定量，分析通路抑制和凋亡标志物表达情况。
4. 克隆形成实验 [1]
：将NCI-H1581细胞以500个细胞/孔的密度接种于含ACTB-1003（10、50、100 nM）或溶媒的软琼脂培养基中，37℃、5% CO₂条件下培养14天形成集落，经结晶紫染色后在显微镜下计数，计算相对于溶媒对照组的集落形成百分比。

HCT-116 colon tumor xenograft model.

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1. Xenograft tumor model (NCI-H1581 and RT112) [1]
: Female nude mice (6-8 weeks old) were injected subcutaneously with NCI-H1581 (5×10⁶ cells/mouse) or RT112 (1×10⁷ cells/mouse) cancer cells into the right flank. When tumors reached a volume of 100-150 mm³, mice were randomized into treatment groups (vehicle, 50, 100, 150 mg/kg ACTB-1003) and dosed orally once daily for 21 days. ACTB-1003 was formulated as a suspension in 0.5% methylcellulose/0.1% Tween 80. Tumor volume was measured every 3 days using calipers (volume = length × width² / 2), and body weight was recorded to monitor toxicity.
2. Matrigel plug angiogenesis model [1]
: C57BL/6 mice were injected subcutaneously with Matrigel (0.5 mL/mouse) containing VEGF (50 ng/mL) and heparin (10 U/mL) into the ventral region. ACTB-1003 (50 mg/kg/day) or vehicle was administered orally daily for 7 days. Matrigel plugs were excised, weighed, and homogenized to measure hemoglobin content using a colorimetric assay (Drabkin’s reagent) as an indicator of vascularization.
3. Pharmacodynamic analysis in xenografts [1]
: Mice bearing NCI-H1581 xenografts were dosed orally with ACTB-1003 (100 mg/kg), and tumor tissues were collected at 2, 4, 8, and 24 hours post-administration. Tumor lysates were prepared, and western blot analysis was performed to measure phospho-FGFR, phospho-VEGFR2, and phospho-S6 levels. Plasma samples were also collected to determine ACTB-1003 concentrations by LC-MS/MS.

1. ACTB-1003 had an oral bioavailability of 58% in mice, with a peak plasma concentration (Cmax) of 1.2 μM and an area under the curve (AUC₀-24h) of 9.8 μM·h following a single oral dose of 100 mg/kg [1]
2. The elimination half-life (t₁/₂) of ACTB-1003 in mice was 6.2 hours, and the drug showed good tissue distribution, with a tumor/plasma concentration ratio of 1.8 at 4 hours post-administration [1]
3. ACTB-1003 was metabolized primarily by hepatic CYP3A4 in human liver microsomes, with an intrinsic clearance of 15 μL/min/mg protein; it was not a substrate for P-glycoprotein (P-gp) [1]
4. The plasma protein binding of ACTB-1003 was 91% in mouse plasma and 94% in human plasma, with no concentration-dependent binding over the range of 0.1-10 μM [1]

1. In acute toxicity studies in mice, the oral LD50 of ACTB-1003 was >500 mg/kg, and the intraperitoneal LD50 was >200 mg/kg, indicating low acute toxicity [1]
2. Repeated oral administration of ACTB-1003 (100 mg/kg/day for 28 days) in rats did not cause significant changes in body weight, food intake, or clinical chemistry parameters (ALT, AST, creatinine, BUN); no histopathological abnormalities were observed in the liver, kidney, heart, or bone marrow [1]
3. ACTB-1003 did not inhibit major CYP450 enzymes (CYP3A4, CYP2D6, CYP2C9) at concentrations up to 10 μM, suggesting a low risk of drug-drug interactions [1]
4. In hematological toxicity assessments, ACTB-1003 (100 mg/kg/day for 21 days) did not reduce peripheral blood leukocyte, red blood cell, or platelet counts in mice [1]
5. The most common dose-limiting toxicity in preclinical studies was mild diarrhea at doses >150 mg/kg/day in mice, which was reversible upon dose reduction [1]

[1]. ACTB-1003: An oral kinase inhibitor targeting cancer mutations (FGFR), angiogenesis (VEGFR2, TEK), and induction of apoptosis (RSK and p70S6K). Journal of Clinical Oncology 28, no. 15 DOI: 10.1200/jco.2010.28.15_suppl.e13665.

Multi-mode Kinase Inhibitor EOC317 is an orally available, small molecule, multi-mode kinase inhibitor (MMKI), with potential antineoplastic activity. Upon oral administration, MMKI EOC317 targets, binds to and inhibits the activity of a variety of kinases, such as phosphatidylinositol 3 kinase (PI3K), and the receptor tyrosine kinases, fibroblast growth factor receptor (FGFR), angiopoietin-1 receptor (TIE 2), and vascular endothelial growth factor receptor-2 (VEGFR-2). This inhibition may result in an induction of apoptosis of susceptible tumors cells in which these kinases are overexpressed.

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1. ACTB-1003 is an oral, multi-targeted small-molecule kinase inhibitor designed to simultaneously target cancer-driving FGFR mutations, tumor angiogenesis (VEGFR2/TEK), and pro-survival signaling pathways (RSK/p70S6K) [1]
2. The dual mechanism of ACTB-1003 (direct anti-tumor activity via FGFR inhibition and anti-angiogenic activity via VEGFR2/TEK inhibition) provides a synergistic approach to cancer treatment, particularly for FGFR-amplified or mutant solid tumors [1]
3. At the time of publication, ACTB-1003 was being evaluated in a Phase I clinical trial (NCT01226146) for patients with advanced solid tumors harboring FGFR alterations (amplifications, mutations, or fusions) [1]
4. The Phase I trial of ACTB-1003 aimed to determine the maximum tolerated dose (MTD), safety profile, pharmacokinetics, and preliminary anti-tumor activity in patients with refractory solid cancers (lung, bladder, gastric, breast cancer) [1]
5. ACTB-1003 is distinguished from other FGFR inhibitors by its additional activity against RSK and p70S6K, which are key mediators of cancer cell survival and resistance to targeted therapy [1]

C27H26F5N7O3

591.53

591.202

C, 54.82; H, 4.43; F, 16.06; N, 16.58; O, 8.11

939805-30-8

23653175

White to off-white solid powder

1.51±0.1 g/cm3 (20 °C, 760 mmHg)

5.563

119.04

3

12

7

42

901

0

O=C(NC1C(F)=CC=C(C(F)(F)F)C=1)NC1C(F)=CC(C2C(COC)=C(CN3CCOCC3)N3C=2C(N)=NC=N3)=CC=1

GZPJCJKUZPUFAL-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C27H26F5N7O3/c1-41-13-17-22(12-38-6-8-42-9-7-38)39-24(25(33)34-14-35-39)23(17)15-2-5-20(19(29)10-15)36-26(40)37-21-11-16(27(30,31)32)3-4-18(21)28/h2-5,10-11,14H,6-9,12-13H2,1H3,(H2,33,34,35)(H2,36,37,40)

1-[4-[4-amino-6-(methoxymethyl)-7-(morpholin-4-ylmethyl)pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-5-yl]-2-fluorophenyl]-3-[2-fluoro-5-(trifluoromethyl)phenyl]urea

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。