| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Lck (IC50 = 0.2 nM); VEGF2 (IC50 = 1 nM); p38α (IC50 = 3 nM); Jak3 (IC50 = 72 nM); MLR (IC50 = 30 nM); IL-2 (IC50 = 21 nM)
Lck (IC50 = 0.0002 μM) [1] Src (IC50 = 0.002 μM) [1] Syk (IC50 = 0.292 μM) [1] Jak3 (IC50 = 0.072 μM) [1] KDR (IC50 = 0.001 μM) [1] p38α (IC50 = 0.003 μM) [1] Other kinases with IC50 >0.1 μM: JNK2 (0.173 μM), JNK3 (0.145 μM), Tyk2 (1.83 μM), Itk (>25 μM), Btk (0.545 μM), Aurora1 (>5 μM), Aurora2 (>25 μM), CDK5 (>25 μM), MSK1 (>25 μM), PKBα (>25 μM), Pak2 (>25 μM), PKAβ (>25 μM), Zap-70 (>25 μM) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
对筛选出的活性化合物AMG-47a和Ponatinib的二次分析
其中两个最强的活性化合物是Ponatinib（一种泛BCR-ABL激酶抑制剂）和AMG-47a（一种潜在的Lck激酶抑制剂）。在初筛中，这些化合物在1 µM浓度下可使EGFP-KRASG12V信号降低约40%。浓度高于1 µM的AMG-47a反而会增加EGFP-KRASG12V信号，这可能是因为较高浓度的该化合物会导致更多凋亡细胞，从而增强自发荧光。因此，我们决定在验证性实验中使用接近最大有效浓度的AMG-47a和Ponatinib进行后续研究。我们首先通过流式细胞术证实了这些化合物能够降低HeLa EGFP-KRASG12V细胞的荧光信号。用AMG-47a和Ponatinib处理细胞48小时后，这些细胞中的EGFP信号降低了30-40%；处理细胞3天和5天也得到了类似的结果。为了检测这些化合物的选择性，我们构建了表达EGFP的HeLa细胞（使用相同的诱导型载体作为对照），并用这些细胞进行反向筛选。我们推测，HeLa EGFP细胞会对那些对强力霉素诱导型启动子、一般RNA转录和蛋白质翻译，或EGFP荧光或稳定性具有非特异性抑制活性的化合物敏感。通过流式细胞术，我们观察到Torin-1确实降低了HeLa EGFP细胞中的荧光信号，这可能是通过抑制一般蛋白质翻译实现的。另一方面，Ponatinib和AMG-47a对这些细胞中的EGFP水平没有影响。我们进一步评估了Ponatinib、AMG-47a和Torin-1对表达EGFP-KRASWT的HeLa细胞荧光的影响，发现它们也降低了EGFP-KRASWT信号。因此，这些化合物似乎不能区分突变型和野生型KRAS蛋白。 最后，我们通过Western blot直接检测了EGFP-KRASG12V蛋白的丢失情况。作为阳性对照，我们将KRAS siRNA转染到HeLa EGFP-KRASG12V细胞中，观察到EGFP-KRASG12V蛋白水平呈剂量依赖性降低。3天后，AMG-47a和Ponatinib对EGFP-KRASG12V蛋白水平的影响均较小。在初步筛选中，AMG-47a 和 Ponatinib 处理后 EGFP-KRASG12V 信号的损失分别稳定在约 50% 和约 55%，尽管我们只能稳定地检测到蛋白质印迹水平下降 20-30%。虽然这种下降幅度较小，但两种化合物均未影响对照 EGFP 蛋白的水平。这些结果共同支持了 AMG-47a 和 Ponatinib 选择性地影响细胞内 EGFP-KRASG12V 蛋白水平的观点。[2] AMG-47a 能有效抑制 Lck 激酶，IC50 值为 0.2 nM。在酶活性测定中，它还能抑制 KDR (IC50 = 17 nM)、p38α (IC50 = 9 nM) 和 Jak3 (IC50 = 868 nM)。在细胞实验中，该化合物以0.272 μM的IC50值抑制了人全血中抗CD3/CD28抗体诱导的IL-2生成。它对人全血中LPS诱导的TNFα生成仅有轻微抑制作用（IC50 > 2.5 μM）。在没有全血的情况下，IL-2的IC50值为21 nM。与之前的类似物相比，该化合物的溶解度（在模拟空腹状态的肠液中，pH 6.8，溶解度>200 μg/mL）和口服生物利用度均有所提高。AMG-47a还能抑制人混合淋巴细胞反应（MLR），但文中未明确指出具体的IC50值[1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在抗CD3诱导的IL-2产生小鼠模型中，口服AMG-47a可剂量依赖性地抑制雌性BALB/c小鼠的IL-2产生。ED50测定为11 mg/kg。在ED50时，平均终末血浆浓度（EC50）约为630 nM。根据小鼠蛋白结合率（97.1%）校正游离分数后，游离EC50约为18 nM，与体外无全血条件下的抑制活性（IL-2 IC50 = 21 nM）一致[1]。
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| 酶活实验 |
Lck HTRF（均相时间分辨荧光）激酶活性测定：该测定方法测量生物素标记的胃泌素肽底物的ATP依赖性磷酸化。最终浓度：胃泌素1.2 μM，ATP 0.5 μM（Km值约为0.6 μM），Lck（GST激酶结构域融合蛋白，氨基酸225-509）250 pM。缓冲液：50 mM HEPES pH 7.5，50 mM NaCl，20 mM MgCl2，5 mM MnCl2，2 mM DTT，0.05% BSA。反应用含有链霉亲和素-藻蓝蛋白（SA-APC，终浓度0.0004 mg/mL）和铕标记的抗磷酸酪氨酸抗体（Eu-anti-PY，终浓度0.025 mM）的检测试剂终止，该检测试剂溶于50 mM Tris pH 7.5、100 mM NaCl、3 mM EDTA、0.05% BSA和0.1% Tween-20的缓冲液中。使用荧光酶标仪读取反应板，激发波长为320 nm，发射波长分别为615 nm和655 nm。其他激酶的测定方法类似，根据比活性和测得的Km值调整酶、肽底物和ATP的浓度[1]。
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| 细胞实验 |
人全血抗CD3/CD28诱导IL-2分泌试验：将正常志愿者的全血用组织培养基稀释50%，与化合物预孵育，然后用抗CD3和抗CD28抗体刺激。在37℃、5% CO2条件下培养约20小时后，用ELISA法定量上清液中分泌的IL-2。
人全血LPS诱导TNFα试验：将肝素化的人全血用含L-谷氨酰胺、10%人血清AB和1%青霉素/链霉素的RPMI 1640培养基稀释50%，与化合物在37℃预孵育1小时，然后用LPS（终浓度0.1 μg/mL）刺激，并过夜（18小时）。用ELISA法测定分泌的TNFα。 纯化T细胞IL-2检测（无需全血）：将从外周血淋巴细胞中纯化的人T细胞（1×10^5/孔）预先与化合物孵育或不孵育，然后在96孔板中用抗CD3和抗CD28抗体刺激，于37°C、5% CO2条件下孵育约20小时。通过ELISA定量上清液中的IL-2。在该检测中，AMG-47a的IL-2 IC50为21 nM [1]。 |
| 动物实验 |
抗CD3诱导小鼠产生IL-2：雌性BALB/c小鼠（12周龄，约20 g）在攻击前1小时经口给予AMG-47a悬浮于含1% Tween-80的2%羟丙基甲基纤维素溶液中，剂量分别为10、30和100 mg/kg。随后，小鼠经静脉注射抗小鼠CD3单克隆抗体（3 μg/只，溶于PBS）进行攻击。90分钟后，通过心脏穿刺采集血液，并采用ELISA法检测血清IL-2水平。每组5只小鼠[1]。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
溶解度：在 pH 6.8 的空腹状态模拟肠液 (SIF) 中，AMG-47a 的溶解度为 >200 μg/mL，该肠液含有 5 mM 牛磺胆酸钠、1.5 mM 卵磷脂、2.9 mM KH2PO4 和 0.22 M KCl [1]。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
血浆蛋白结合率：通过超速离心法测定，AMG-47a在人血浆中的结合率为95.0%，在小鼠血浆中为97.1%，在大鼠血浆中为95.3%（浓度为5 μg/mL，约12.9 μM）。
选择性：AMG-47a对人全血中LPS诱导的TNFα产生仅有轻微抑制作用（IC50 > 2.5 μM），表明在该实验中缺乏显著的p38α介导的促炎细胞因子抑制作用[1]。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
AMG-47a 是一种选择性 Lck 抑制剂，专为治疗 T 细胞介导的自身免疫性疾病和炎症性疾病而开发。它对多种结构各异的激酶（包括 Syk、Tyk2、Itk、Btk、CDK5、Msk1、Pak2、Jnk1、Aurora、PKBα、PKAβ 和 Zap-70）表现出极佳的选择性（>1000 倍），但对其他 Src 家族成员（例如 Src）则无选择性。该化合物是一种氨基喹唑啉衍生物，带有 2-吗啉乙基氨基取代基，与之前的先导化合物相比，该取代基提高了其溶解度和口服生物利用度 [1]。
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| 分子式 |
C29H28F3N5O2
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|---|---|
| 分子量 |
535.5601
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| 精确质量 |
535.219
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| 元素分析 |
C, 65.04; H, 5.27; F, 10.64; N, 13.08; O, 5.97
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| CAS号 |
882663-88-9
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| 相关CAS号 |
882663-88-9
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| PubChem CID |
16086114
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.637
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| LogP |
5.38
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| tPSA |
86.1
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
39
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| 分子复杂度/Complexity |
795
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(C1C=C(C2C=C3C(N=C(NCCN4CCOCC4)N=C3)=CC=2)C(C)=CC=1)NC1C=C(C(F)(F)F)C=CC=1
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| InChi Key |
DVRSTRMZTAPMKO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C29H28F3N5O2/c1-19-5-6-21(27(38)35-24-4-2-3-23(17-24)29(30,31)32)16-25(19)20-7-8-26-22(15-20)18-34-28(36-26)33-9-10-37-11-13-39-14-12-37/h2-8,15-18H,9-14H2,1H3,(H,35,38)(H,33,34,36)
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| 化学名 |
4-methyl-3-[2-(2-morpholin-4-ylethylamino)quinazolin-6-yl]-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzamide
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| 别名 |
AMG-47a; AMG47; AMG-47; AMG 47; AMG 47a; AMG47a
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ≥ 34 mg/mL (~63.5 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8672 mL | 9.3360 mL | 18.6720 mL | |
| 5 mM | 0.3734 mL | 1.8672 mL | 3.7344 mL | |
| 10 mM | 0.1867 mL | 0.9336 mL | 1.8672 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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