Central complement component C3 (KD = 0.5 nM)

Amyndas Pharmaceuticals临床开发了新一代高选择性和强效的C3抑制剂，称为compstatins Cp40/AMY-101，用于各种补体介导的适应症。这些小型肽C3抑制剂是灵长类/人类特异性的，与之前被评估为ARDS治疗选择的补体抑制剂TP-10等大型生物制剂相比，它们显示出更有利的药理学特征和更大的组织穿透能力[2]。

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鉴于基于compstatin-based抑制剂（如AMY-101）的C3阻断可以通过阻断参与SARS-CoV-2诱导的ARDS和血栓性微血管病的所有下游促炎介质的同时产生，提供比抗C5或抗C5a药物更广泛的治疗复盖面，AMY-101作为新冠肺炎感染严重病例中的抗炎剂，可以很好地进行临床评估[2]。

对于患有自然发生的慢性牙周炎的 NHP，AMY-101 可以帮助改善牙周健康 [1]。 AMY-101 可产生持久的抗炎作用 [1]。每 24 小时皮下注射 AMY-101（4 毫克/公斤体重），持续 28 天，可显着且持久地降低 PPD（组织逐渐恶化的标志）[1]。 AMY-101（Cp40，1 mg/kg，皮下注射，每天注射一次，持续 7 或 14 天，每 12 小时注射一次）

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局部给药的AMY-101（0.1 mg/部位）不会对健康牙龈造成刺激[1]
为了确定在NHP中施用肽C3抑制剂AMY-101后可能出现的局部牙龈刺激，在五只动物的健康后牙牙龈中注射了治疗剂量的AMY-101（50μL 2mg/mL溶液，相当于0.1mg/部位）30。每只动物共接受四次注射，每象限一次；两次注射使用AMY-101，另外两次注射涉及含有5%葡萄糖的注射用水（WFI）（对照）。在每只动物中，在上颌和下颌象限（共2个部位）注射AMY-101，而在对侧的两个部位注射对照溶液。在第0、7和14天共注射AMY-101和对照溶液三次，然后进行2周的观察期，不再注射。在基线检查时（第0天）和每2-3天拍摄一次口腔照片，以记录注射部位周围的牙龈状况。仔细的日常临床检查显示，在整个观察期间注射AMY-101或对照溶液后没有刺激迹象（图1）。在第-1天和第15天采集血液样本，并进行血液学和生化分析。所有动物的所有测量值均在正常范围内（未显示）。

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AMY-101即使每3周服用一次，也能提供保护[1]
我们之前已经证明，每周龈内注射AMY-101可以改善患有自然慢性牙周病的NHP的牙周状况。30不那么频繁但仍然成功的给药将促进AMY-101在人类中的应用。为了探索这种可能性，我们测试了AMY-101在给药频率较低的情况下是否也有效。为此，5只动物每2周服用一次2-mg/mL的AMY-101溶液，另外5只动物则每3周服用一次AMY-101。具体而言，AMY-101被局部注射到上颌骨两侧的前牙和后牙的牙龈中（共17个部位；牙齿之间的腭乳头[15个部位]，第三磨牙的远端牙龈[2个部位]）。在整个研究过程中，在基线和1、2、4、6、7、8、10和12周进行了临床检查，以确定疾病的进展和AMY-101的潜在有益作用。AMY-101注射前的临床读数作为基线对照。下颌骨未接受治疗，但在整个研究过程中通过临床牙周检查进行监测，以进行比较。该研究包括6周的AMY-101治疗（治疗期），随后6周不进行AMY-101处理（随访期）。

无论给药频率如何，AMY-101都会显著降低测量牙周炎症（GI和探诊出血[BOP]）或组织破坏（PPD和CAL）的临床指标（图4和图5）。有趣的是，基线和后续读数之间的差异在6周时或之后达到了统计学意义（即，在AMY-101治疗停止的时间点）。即使在12周时，6周时观察到的许多差异仍然具有统计学意义（BOP、PPD和CAL）（图4B-4D和5B-5D）。在相同的12周间隔内，还监测了未经治疗的颌骨（下颌骨）的上述临床指标。与AMY-101治疗的上颌骨临床状况的改善相比，下颌骨的临床指标在研究过程中与基线值相比没有显示出显著差异（图4和图5）。综上所述，AMY-101可以诱导持久的临床抗炎作用。

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全身注射AMY-101可以改善NHPs的牙周状况[1]
鉴于AMY-101也被考虑用于全身性疾病，牙周炎是一种非常普遍的疾病，34我们测试了AMY-101在全身给药时是否有效。AMY-101以4mg/kg体重的浓度通过皮下注射在10只动物中给药，每24小时一次，共28天。为了确定疾病的进展和AMY-101的潜在有益作用，在基线（第0周）和整个研究期间（第1、2、3、4和11周的时间点）进行了临床检查。此外，在基线、4周和11周时对牙龈和骨骼进行了活组织检查。

系统给药AMY-101可显著长期降低PPD，PPD是衡量组织破坏的指标（图6A）。在第4周首次观察到保护作用。令人惊讶的是，即使在第4周后停药，保护作用仍持续至少7周（第11周）而没有下降（图6A）。还观察到评估牙周炎症的BOP有所改善；与基线相比的差异在第2周和第3周达到统计学意义（图6B）。4周时的组织学观察表明，与基线表达相比，AMY-101导致牙槽骨附近结缔组织中促炎和促破骨细胞因子（白细胞介素[IL]-17和核因子κB配体受体激活剂[RANKL]）的表达降低，骨保护素（OPG；RANKL的天然抑制剂）的表达升高（图7）。此外，AMY-101处理导致补体切割片段C3d和C5a减少，进一步证实了其抑制补体激活的能力。总之，全身性AMY-101改善了NHPs的牙周状况，在停药后至少7周内保持稳定。

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C3缺乏可减轻UUO诱导的肾纤维化中的纤维化和炎性细胞浸润[3]
为了研究C3在UUO发病机制中的作用，我们使用了一种肽C3抑制剂，Compstatin类似物AMY-101/Cp40来阻断C3的激活。Masson染色和α-SMA表达分析表明，注射1mg/kg Cp40的UUO小鼠的间质纤维化程度远低于注射对照肽的小鼠（补充图3A-D）。Western blot分析还表明，注射Cp40的UUO小鼠的α-SMA和PDGFR-β水平降低（补充图3E、F）。除了减轻的肾小管间质纤维化外，与注射肽的小鼠相比，注射Cp40的UUO小鼠的F4/80+巨噬细胞、CD3+T细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞的肾浸润显著减少（图5A-E）。同时，Cp40显著限制了UUO小鼠MCP-1、IL-6、IL-1β和TNF-αmRNA表达的升高（图5F）。这些数据表明，C3介导T细胞和巨噬细胞在梗阻性损伤时浸润肾脏。

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阻断C3-C3aR信号通过抑制UUO小鼠中IL-17A的产生来减轻肾纤维化[3]
如图7A所示，与假对照组小鼠相比，UUO小鼠肾脏IL-17A的mRNA水平显著升高。此外，与假对照小鼠血清中的IL-17A水平相比，UUO小鼠血清中IL-17A水平在早期和晚期显著升高（图7B）。与ELISA和mRNA数据一致，FACS结果显示，UUO后梗阻肾脏中8.48%和10.9%的CD4+肾细胞分别表达IL-17A，而假手术小鼠中≤5.3%的CD4+表达IL-17A+，这种作用被AMY-101/Cp40和SB290157强烈抑制（图7C-H）。此外，我们分析了C3阻断UUO小鼠和UUO小鼠肾脏中CD11b+F4/80+IL-17+细胞的比例。结果显示，两组单核细胞中CD11b+F4/80+IL-17+细胞约占1%，用CP40阻断C3后仅略有变化（补充图4A、B）。在14天的UUO小鼠中也证实了类似的结果（补充图4C，D）。因此，我们确定UUO小鼠中IL-17A的主要产生者是T细胞，单侧输尿管结扎后T细胞显著增加。

PBMC分离[3]
患者和正常受试者捐献了5毫升肝素化管中收集的血液。用PBS将血液1:1稀释，并覆盖在淋巴细胞分离培养基上。离心后，收集3ml含有PBMC的界面，用PBS稀释至6ml，然后用冷PBS洗涤两次并计数。收集PBMC进行流式细胞术分析。

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CFSE标签[3]
通过将冻干的CFSE溶解在DMSO中新鲜制备CFSE储备溶液（5mM）。从幼年小鼠的脾脏中获得脾细胞，并在37°C下用PBS中5μM的CFSE标记15分钟。通过加入三倍体积的冰冷FBS并在冰上孵育细胞5分钟来淬灭过量的CFSE。然后用PBS洗涤CFSE标记的细胞三次，并在有或没有刺激的情况下培养。

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T细胞活化[3]
将预涂有抗CD3和抗CD28抗体的96孔检测板在37°C下孵育4小时。从幼年小鼠的脾脏中获得脾细胞（1×106个细胞/孔），并在含有IL-2（10 ng/mL）、IL-12（10μg/mL）或IL-4（4 ng/mL的培养基中在96孔板中培养3天。

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流式细胞术分析[3]
制备单个肾细胞悬浮液，用PMA/离子霉素/高尔基体塞刺激4小时。将细胞与不同的一抗或适当的同种型对照抗体在4°C下孵育30分钟。使用PerCP/Cy5.5结合的抗人CD14抗体；PerCP/Cy5.5联合抗小鼠CD4；APC偶联抗小鼠F4/80；以及PerCP/Cy5.5结合的抗小鼠CD11b。细胞表面染色后，用Cytofix/Cytoperm Soln试剂盒固定和渗透细胞，用Alexa Fluor 488偶联的抗人C3和PE偶联的抗小鼠IL-17A进行细胞内染色。所有流式细胞术分析均使用LSR II流式细胞仪和Flowjo软件进行。

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ELISA[3]
为了量化肾脏中的IL-17A水平，根据制造商的说明使用小鼠IL-17A ELISA分析样本。所有测量均进行了两次。

动物/疾病模型： 15 只成年雄性食蟹猴（Macaca fascicularis）（7-15 岁；体重 5.0-7.6 kg）[1]。
剂量： 0.1 mg/部位；50 μL 浓度为 2 mg/mL 的溶液。
给药途径： 局部注射。（每周 3 次或每周 1 次，持续 6 周，然后进行 6 周的随访，无需治疗。）
实验结果： 对健康牙龈无刺激。

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动物/疾病模型： 单侧输尿管梗阻 (UUO) 小鼠和假手术小鼠 [3]。
剂量： 1 mg/kg。
给药途径：每 12 小时皮下注射一次，每日一次，持续 7 或 14 天。
实验结果： 1 mg/kg Cp40 引起的间质纤维化程度显著低于注射该肽的对照小鼠。

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\n\n\nC3 抑制剂 AMY-101 [1]
\n14 残基 compstatin 类似物 AMY-101 [(D)Tyr-Ile-[Cys-Val-Trp(Me)-Gln-Asp-Trp-Sar-Ala-His-Arg-Cys]-mIle-NH2，其中 Sar 为肌氨酸/N-甲基甘氨酸，mIle 为 N-甲基异亮氨酸] 采用固相肽合成方法制备，如前所述，为二硫键桥联的环状肽。使用 30G 短针将不同浓度（2–200 mg/mL）的 AMY-101 局部注射到牙龈（50 μL）。或者，对于全身给药，使用配备 28G × 1/2 英寸针头的 1 mL 胰岛素安全注射器进行皮下注射（4 mg/kg 体重）。\n

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\n\n临床检查和观察 [1]
\n进行临床牙周检查，并根据美国牙周病学会制定的人类牙周疾病诊断标准进行诊断。在基线和整个研究期间使用牙周探针进行检查，以监测疾病进展和 AMY-101 治疗的效果。检查项目包括：探诊深度（PPD，测量牙龈缘至牙周袋底部的距离，单位为毫米）、临床附着丧失（CAL，测量釉牙骨质界至牙周袋底部的距离）、牙菌斑指数（GI，根据Löe分级，0-3级）、出血指数（BOP，阳性位点百分比）和菌斑指数（PI，根据Löe分级，0-3级）。PPD、CAL和BOP在每颗牙齿的六个位点进行测量：近颊侧、颊侧中部、远颊侧、近舌侧、舌侧中部和远舌侧。GI和PI在四个位点进行评估（颊侧、舌侧、近中侧和远中侧）。GI和BOP是牙周炎症的指标，而CAL和PPD评估组织破坏程度。PI是牙面生物膜积聚的临床指标。在刺激性研究中，每日对注射部位进行临床观察，以监测炎症迹象或脓肿、发红、瘙痒、血肿、瘀伤、水疱或结节的形成。牙龈炎症程度评估为健康、轻度（颜色轻微变化，无出血）、中度（发红，出血）或重度（明显发红，易自发性出血）。\n\n

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\n\n动物模型[3]
\n单侧输尿管梗阻（UUO）是一种常用的肾损伤实验模型。对6-8周龄的小鼠进行麻醉，然后在小鼠背部做侧切口。随后，暴露左侧输尿管，并用两根4.0丝线结扎。假手术组小鼠接受相同的手术操作，但不进行输尿管结扎。本治疗实验采用固相肽合成法制备的Compstatin类似物AMY-101/Cp40 (dTyr-Ile-[Cys-Val-Trp(Me)-Gln-Asp-Trp-Sar-His-Arg-Cys]-mIle-NH2;1.7kDa)和购自Sigma-Aldrich公司的C3a受体拮抗剂SB290157。UUO模型小鼠和假手术小鼠每12小时皮下注射Cp40（1 mg/kg），每日腹腔注射SB290157（30 mg/kg）。7天或14天后，通过颈椎脱臼处死小鼠，并采集外周血、脾脏和肾脏组织。将小鼠肾脏固定于4%福尔马林溶液中24小时，经梯度酒精脱水处理后包埋于石蜡中。剩余样本置于液氮中冷冻保存，以备后用。

AMY-101局部注射剂量递增研究[1]
本研究旨在确定在患有自然发生的牙周炎的非人灵长类动物（NHP）中，局部注射递增浓度的AMY-101后是否会引起局部牙龈刺激。测试的AMY-101剂量递增分别为2、10、50、100和200 mg/mL，总体积为50 μL，分别对应于每个注射部位0.1、0.5、2.5、5和10 mg。注射部位包括上颌（腭侧牙间乳头）和下颌（颊侧牙间乳头）两侧的后牙。本研究使用了5只动物，所有注射均在一次给药过程中完成，随后进行为期2周的观察。每天检查动物是否存在因AMY-101注射引起的局部牙龈刺激。浓度等于或高于 10 mg/mL 的药物会引起轻度至中度炎症，且在最高剂量（100 和 200 mg/mL）下更为常见（图 2）。在所有治疗部位，2 mg/mL 剂量均未观察到刺激反应，这与上述数据一致。在基线以及治疗后 1 周和 2 周进行临床检查以确定牙周疾病活动度并拍摄口内照片。在疗效方面，浓度高达 50 mg/mL 的药物可降低牙周临床参数（探诊深度 [PPD]、临床附着水平 [CAL] 和牙龈指数 [GI]）（图 3）。相反，最高剂量（100 和 200 mg/mL）则导致上述临床参数恶化（图 3）。因此，在所测试的不同 AMY-101 浓度中，2 mg/mL 的剂量似乎是满足安全性和保护性要求的最佳剂量。

[1]. Safety and Efficacy of the Complement Inhibitor AMY-101 in a Natural Model of Periodontitis in Non-human Primates. Mol Ther Methods Clin Dev. 2017 Aug 18;6:207-215.

[2]. The first case of COVID-19 treated with the complement C3 inhibitor AMY-101. Clin Immunol. 2020 Apr 29:108450.

[3]. Complement C3 Produced by Macrophages Promotes Renal Fibrosis via IL-17A Secretion. Front Immunol. 2018 Oct 22;9:2385.

AMY-101，又名补体抑制剂40（compstatin 40），是一种肽类补体核心成分C3抑制剂。AMY-101目前正在临床试验NCT03694444（一项关于C3补体抑制剂AMY-101治疗成人牙龈炎的研究）中进行研究。
C3补体抑制剂AMY-101是一种基于补体抑制剂的C3抑制剂，可抑制人补体成分C3，具有治疗多种以补体过度激活为关键因素的疾病的潜力，包括阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）和补体3肾小球病（C3G）。给药后，C3补体抑制剂AMY-101选择性地与C3结合并抑制C3活性。这可以阻止补体途径的激活，并抑制补体介导的炎症和细胞溶解。补体过度激活在多种炎症性和自身免疫性疾病中起着关键作用，并会导致组织破坏。 C3是补体系统的关键核心成分，而补体系统又是先天免疫反应的重要组成部分。

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牙周炎是一种与补体系统过度激活相关的慢性炎症性疾病。近期临床前研究表明，宿主调节疗法可能有助于有效治疗人类牙周炎，若不及时治疗，牙周炎可能导致牙齿脱落和功能丧失。我们此前已证实，局部给药的AMY-101（Cp40，一种补体核心成分C3的肽类抑制剂）每周一次，即可抑制非人灵长类动物（NHP）自然发生的牙周炎。本研究旨在确定增加药物剂量后的局部安全性，以及降低给药频率或在全身给药后使用该药物的疗效。我们的研究结果确定了AMY-101的局部给药剂量（0.1 mg/位点），该剂量每3周给药一次，既不会引起局部刺激，又能有效治疗牙周炎。此外，每日皮下注射AMY-101（4 mg/kg体重）可预防非人灵长类动物牙周炎，提示接受全身性疾病（例如阵发性睡眠性血红蛋白尿）治疗的患者，其牙周状况也可能得到改善。总之，AMY-101似乎是一种有前景的人类牙周炎辅助治疗候选药物，这一观点值得在人体临床试验中进行验证。[1]

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急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是COVID-19肺炎的一种严重临床表现，主要由免疫驱动的病理机制引起。越来越多的证据表明，COVID-19是由宿主适应不良的炎症反应所驱动，这种反应涉及先天免疫通路的过度激活。虽然已证实存在涉及IL-6和其他细胞因子的“细胞因子风暴”，但补体C3激活被认为是SARS-CoV感染临床前模型中加剧肺损伤的初始效应机制。靶向C3的干预措施可能为COVID-19患者提供更广泛的补体介导的炎症损伤治疗控制。本文报道了一例因COVID-19肺炎导致严重ARDS的患者，该患者安全有效地接受了基于补体抑制剂的C3抑制剂AMY-101治疗。[2]

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补体合成在来源细胞中与肾脏疾病的发病机制和进展密切相关。多项研究已探讨了肾脏疾病中的局部C3合成，并阐明了局部细胞来源的作用，但浸润性炎症细胞的作用仍不清楚。我们研究了C3、巨噬细胞和Th17细胞之间的关系，这些细胞均参与间质纤维化。本文报道，在肾活检标本中检测到局部C3表达增加，主要由单核细胞/巨噬细胞介导，且与肾纤维化（RF）的严重程度和肾功能指标相关。在单侧输尿管梗阻（UUO）小鼠模型中，我们发现局部C3在肾脏间质中组成性表达，并由F4/80+巨噬细胞释放。使用氯膦酸盐清除巨噬细胞后，缺乏巨噬细胞的小鼠表现出C3表达和肾小管间质纤维化的减少。使用C3和C3aR抑制剂阻断C3表达可对肾小管间质纤维化提供类似的保护作用。这些保护作用与促炎细胞因子减少、炎症细胞肾脏募集减少以及Th17反应减弱有关。体外实验表明，重组C3a显著增强T细胞增殖和IL-17A表达，其机制是通过T细胞中ERK、STAT3和STAT5的磷酸化以及NF-κB的激活。更重要的是，使用C3aR抑制剂阻断C3a可显著抑制C3a刺激的T细胞中IL-17A的表达。我们推测，巨噬细胞局部分泌C3可导致IL-17A介导的炎症细胞浸润肾脏，进而促进纤维化反应。我们的研究结果提示，抑制C3a/C3aR通路是治疗梗阻性肾病的一种新型治疗方法。[3]

C85H118F3N23O20S2

1903.11374616623

1789738-04-0

AMY-101 acetate;AMY-101;1427001-89-5

168013663

H-D-Tyr-xiIle-Cys(1)-DL-Val-DL-Trp(Me)-DL-Gln-Asp-DL-Trp-Sar-Ala-His-Arg-DL-Cys(1)-N(Me)Ile-NH2.TFA; {D-Tyr}-Ile-Cys-Val-{Trp(Me)}-Gln-Asp-Trp-{Sar}-Ala-His-Arg-Cys-{N(Me)Ile}-NH2 (Disulfide bridge:Cys3-Cys13); D-tyrosyl-(3xi)-L-isoleucyl-L-cysteinyl-DL-valyl-N1-methyl-DL-tryptophyl-DL-glutaminyl-L-alpha-aspartyl-DL-tryptophyl-sarcosyl-L-alanyl-L-histidyl-L-arginyl-DL-cysteinyl-N2-methyl-L-isoleucinamide (3->13)-disulfide trifluoroacetic acid

YXCVXQDWGAHRCI; {D-Tyr}-ICV-{Trp(Me)}-QDW-{Sar}-AHRC-{N(Me)Ile}-NH2 (Disulfide bridge:Cys3-Cys13)

White to off-white solid powder

730 Ų

22

28

30

133

3860

9

S1C[C@@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@@H](CC(=O)O)C(N[C@H](C(N(C)CC(N[C@@H](C)C(N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(N[C@H](C(N[C@@H](CS1)C(N(C)[C@H](C(N)=O)[C@@H](C)CC)=O)=O)CCCNC(=N)N)=O)=O)=O)=O)CC1=CNC2C=CC=CC1=2)=O)=O)CCC(N)=O)=O)CC1=CN(C)C2C=CC=CC1=2)=O)C(C)C)=O)NC([C@H]([C@@H](C)CC)NC([C@@H](CC1C=CC(=CC=1)O)N)=O)=O.FC(C(=O)O)(F)F

GDSMXERXVAAZHM-GQPSZVCTSA-N

InChI=1S/C83H117N23O18S2.C2HF3O2/c1-11-43(5)68(103-72(114)53(84)30-46-23-25-50(107)26-24-46)80(122)100-61-39-125-126-40-62(82(124)106(10)69(70(86)112)44(6)12-2)101-73(115)55(21-17-29-90-83(87)88)94-76(118)58(33-49-36-89-41-92-49)96-71(113)45(7)93-65(109)38-105(9)81(123)60(31-47-35-91-54-20-15-13-18-51(47)54)99-77(119)59(34-66(110)111)97-74(116)56(27-28-64(85)108)95-75(117)57(98-79(121)67(42(3)4)102-78(61)120)32-48-37-104(8)63-22-16-14-19-52(48)63;3-2(4,5)1(6)7/h13-16,18-20,22-26,35-37,41-45,53,55-62,67-69,91,107H,11-12,17,21,27-34,38-40,84H2,1-10H3,(H2,85,108)(H2,86,112)(H,89,92)(H,93,109)(H,94,118)(H,95,117)(H,96,113)(H,97,116)(H,98,121)(H,99,119)(H,100,122)(H,101,115)(H,102,120)(H,103,114)(H,110,111)(H4,87,88,90);(H,6,7)/t43?,44-,45-,53+,55-,56?,57?,58-,59-,60?,61-,62?,67?,68-,69-;/m0./s1

2-[(7S,10S,13S,22S,34R)-34-[[(2S)-2-[[(2R)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-[[(2S,3S)-1-amino-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]-methylcarbamoyl]-25-(3-amino-3-oxopropyl)-7-(3-carbamimidamidopropyl)-10-(1H-imidazol-5-ylmethyl)-19-(1H-indol-3-ylmethyl)-13,17-dimethyl-28-[(1-methylindol-3-yl)methyl]-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-decaoxo-31-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-decazacyclopentatriacont-22-yl]acetic acid;2,2,2-trifluoroacetic acid

AMY101 TFA; AMY-101 TFA; 1789738-04-0; AMY 101 TFA

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ≥ 50 mg/mL
DMSO : ≥ 50 mg/mL

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。