| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 25mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PME-1 (IC50 = 0.60 μM)
Protein phosphatase methylesterase-1 (PME-1, a serine hydrolase) (IC50 = 600 nM in vitro; IC50 = 3.5 µM in situ) |
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| 体外研究 (In Vitro) |
1. 化合物 AMZ30 在人类细胞裂解液（HEK 293T可溶性蛋白质组）中能选择性灭活PME-1，通过基于凝胶的竞争性活性蛋白质谱分析（使用氟磷酸酯-罗丹明探针）测定其IC50为600 nM。在蛋白质组中对其他丝氨酸水解酶显示出超过100倍的选择性。[1]
2. AMZ30 对PME-1的抑制很可能是共价且不可逆的，因为凝胶过滤层析后酶活性没有恢复。[1] 3. 在HEK 293T细胞可溶性蛋白质组的基于凝胶的竞争性ABPP实验中，AMZ30（浓度高达100 µM）未显示出与其他丝氨酸水解酶的交叉反应性。[1] 4. 通过Western blot分析，AMZ30 (20 µM) 能显著降低稳定过表达PME-1的HEK 293T细胞中去甲基化蛋白磷酸酶2A的水平，并增加甲基化PP2A的水平。对去甲基化PP2A的降低程度与结构无关的抑制剂1 (ABL127) 所引起的效果相似。[1] 5. 在表达基础水平PME-1的未转染HEK 293T细胞中，用AMZ30 (20 µM) 处理也能降低PP2A的去甲基化形式，其程度与用抑制剂1 (500 nM) 处理相似。[1] 6. AMZ30 (100 µM) 不会改变经处理的HEK 293T细胞可溶性蛋白质组中任何蛋白质被氯乙酰胺-罗丹明或磺酸酯-罗丹明活性探针标记的强度，表明它不是一种具有普遍硫醇反应活性的化合物。[1] |
| 酶活实验 |
1. 丝氨酸水解酶活性竞争性ABPP实验： 将可溶性蛋白质组（例如来自HEK 293T或MDA-MB-231细胞）在磷酸盐缓冲盐水（PBS，pH 7.5）中稀释至蛋白浓度为1 mg/mL。蛋白质组样品（总反应体积25 µL）首先与测试化合物（溶于DMSO）或DMSO载体对照在25°C下孵育30分钟。随后，加入氟磷酸酯-罗丹明活性探针至终浓度2 µM，标记反应在25°C下进行45分钟。然后通过加入2× SDS-PAGE上样缓冲液（还原性）终止反应。样品使用10%丙烯酰胺凝胶进行SDS-PAGE分离。标记的丝氨酸水解酶通过平板荧光扫描仪在凝胶内可视化。与DMSO对照相比，PME-1条带荧光强度的降低表明存在抑制作用。[1]
2. IC50测定（体外）： 为测定IC50，将可溶性蛋白质组（1 mg/mL）与一系列浓度的测试化合物（一式三份）在37°C下孵育45分钟。然后样品用FP-罗丹明（2 µM）标记45分钟，进行SDS-PAGE处理，并通过凝胶内荧光扫描可视化。通过使用图像分析软件测量PME-1条带的积分光密度来量化剩余的PME-1活性百分比。通过使用适当软件拟合剂量反应数据来计算IC50值。[1] 3. 抑制可逆性实验： 将纯化的重组PME-1蛋白（500 nM，溶于PBS）与DMSO或抑制剂AMZ30 (50 µM) 在25°C下孵育30分钟。取出等份样品用于直接与FP-罗丹明标记（组分A）。将剩余的反应混合物通过尺寸排阻色谱柱（例如Sephadex G-25）以去除未结合的抑制剂。洗脱出的蛋白（组分B）然后在相同条件下与FP-罗丹明标记。两个组分均通过SDS-PAGE和凝胶内荧光扫描进行分析。与组分A相比，组分B中PME-1活性未恢复表明是不可逆抑制。[1] |
| 细胞实验 |
1. 细胞内抑制及IC50测定： HEK 293T细胞在标准培养基中培养。将测试化合物（AMZ30）直接以不同浓度加入细胞培养介质中，细胞在37°C下孵育指定时间（例如1小时）。然后用冰PBS洗涤细胞，刮取收集，并通过离心获得细胞沉淀。细胞沉淀重悬于PBS中，超声破碎，离心获得可溶性蛋白质组部分。将此可溶性蛋白质组稀释至1 mg/mL蛋白浓度，然后进行前述“酶活性实验”部分描述的标准竞争性ABPP标记流程（使用FP-罗丹明）。根据来自化合物处理细胞的蛋白质组中PME-1条带的荧光强度生成的剂量反应曲线来确定细胞内IC50值。[1]
2. 细胞靶点选择性评估（SILAC-ABPP）： HEK 293T细胞在“轻”或“重”稳定同位素氨基酸标记培养液中生长。“轻”标记细胞用化合物AMZ30 (20 µM) 处理，“重”标记细胞用DMSO载体处理，均在37°C下处理1小时。处理后，收集细胞并制备可溶性蛋白质组。将等量（按蛋白重量计）的“轻”和“重”蛋白质组合并，并用生物素化的氟磷酸酯活性探针标记。标记的蛋白质使用链霉亲和素珠进行富集，接着进行珠上胰蛋白酶消化。所得肽段通过多维液相色谱联用串联质谱进行分析。通过量化“轻”（抑制剂处理）与“重”（对照）样本中丝氨酸水解酶肽段的相对丰度，来评估抑制剂在细胞环境下对整个丝氨酸水解酶家族的选择性。[1] 3. 通过Western Blot分析PP2A甲基化状态： HEK 293T细胞（野生型或稳定过表达PME-1）用化合物（例如AMZ30，20 µM）或DMSO处理指定时间（例如1小时）。收集细胞，通过在PBS中超声制备总细胞裂解液。裂解液在SDS-PAGE上样缓冲液中变性，通过SDS-PAGE（10%丙烯酰胺）分离，并转移至膜上进行Western blot分析。使用识别PP2A催化亚基去甲基化形式、甲基化形式或总PP2A的特异性抗体孵育膜。同时使用针对上样对照蛋白（如α-微管蛋白）的抗体。使用成像系统可视化和量化条带强度，以评估抑制剂处理后PP2A甲基化状态的变化。[1] 4. 评估化合物在细胞中对蛋白质的普遍反应性： 从用AMZ30或DMSO处理的HEK 293T细胞制备的可溶性蛋白质组，与靶向反应性半胱氨酸残基（CA-罗丹明）或其他亲核残基（SE-罗丹明）的广谱活性探针孵育。标记后，样品通过SDS-PAGE和凝胶内荧光扫描进行分析。与DMSO对照相比，抑制剂处理样品中这些探针的标记图谱没有变化，表明该化合物不会混杂地修饰蛋白质上的反应性残基。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 化合物AMZ30（浓度为100 µM）在HEK 293T细胞蛋白质组中未表现出对蛋白质亲核残基（半胱氨酸等）的普遍反应性，这通过CA-罗丹明和SE-罗丹明探针标记未受影响来评估，表明在测试条件下，它不是一种广谱毒性的硫醇反应性亲电试剂。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
2-(4-氟苯基)磺酰基-3-[1-(3-硝基苯基)磺酰基-2-吡咯基]-2-丙烯腈是一种磺酰胺类化合物。
1. 背景和意义：蛋白磷酸酶甲酯酶-1 (PME-1) 调控蛋白磷酸酶 2A (PP2A) 的甲基化状态，PP2A 是一种参与多种细胞过程的关键酶。PP2A 甲基化异常与癌症和阿尔茨海默病相关，因此 PME-1 是一个潜在的治疗靶点。[1] 2. 化合物类别和探针用途：AMZ30（NIH 探针 ML136）属于磺酰基丙烯腈类共价抑制剂。其结构与先前报道的氮杂-β-内酰胺 (ABL) 类 PME-1 抑制剂（例如化合物 1）无关。这种结构多样性使得AMZ30和ABL抑制剂可作为一对药理学探针，用于可靠地将观察到的细胞效应归因于PME-1抑制，并研究PP2A甲基化的作用。[1] 3. 机制推测：基于结构类似物，推测AMZ30通过1,4-迈克尔加成机制抑制PME-1，其中活化的烯烃作为亲电试剂与PME-1活性位点丝氨酸亲核试剂共价连接。然而，由于样品制备过程中的不稳定性，未获得该加合物的直接质谱证据。 [1] 4. 骨架潜力：几种磺酰丙烯腈铅骨架类似物对其他丝氨酸水解酶（例如，酰基肽水解酶 (APEH)、脯氨酰内肽酶 (PREP)）表现出活性，这表明进一步优化这种化学表型可能产生针对该庞大酶家族其他成员的选择性抑制剂。[1] |
| 分子式 |
C19H12FN3O6S2
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|---|---|
| 分子量 |
461.44348526001
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| 精确质量 |
461.015
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| 元素分析 |
C, 49.46; H, 2.62; F, 4.12; N, 9.11; O, 20.80; S, 13.90
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| CAS号 |
1313613-09-0
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| 相关CAS号 |
1313613-09-0
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| PubChem CID |
44607965
|
| 外观&性状 |
Solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
724.3±70.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
391.9±35.7 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.3 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.655
|
| LogP |
3.58
|
| tPSA |
160
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
963
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
S(C1C=CC=C(C=1)[N+](=O)[O-])(N1C=CC=C1/C=C(\C#N)/S(C1C=CC(=CC=1)F)(=O)=O)(=O)=O
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| InChi Key |
GUCUORSUHTZMBW-YBFXNURJSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H12FN3O6S2/c20-14-6-8-17(9-7-14)30(26,27)19(13-21)11-15-4-2-10-22(15)31(28,29)18-5-1-3-16(12-18)23(24)25/h1-12H/b19-11+
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| 化学名 |
(E)-2-(4-fluorophenyl)sulfonyl-3-[1-(3-nitrophenyl)sulfonylpyrrol-2-yl]prop-2-enenitrile
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| 别名 |
AMZ-30; AMZ 30; AMZ30
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 92~100 mg/mL (199.4~216.7 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1671 mL | 10.8356 mL | 21.6713 mL | |
| 5 mM | 0.4334 mL | 2.1671 mL | 4.3343 mL | |
| 10 mM | 0.2167 mL | 1.0836 mL | 2.1671 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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