| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
kappa opioid receptor
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
HSK21542是一种外周限制性Kappa阿片受体激动剂[2]
为了揭示HSK21542在KOR中的药理学特征，我们进行了[3H]二丙诺啡结合实验，研究HSK21542对[3H]二丙诺啡竞争结合的抑制作用，并确定未标记的HSK21542的结合动力学。阳性对照U69593明显阻止[3H]二丙诺啡与KOR结合，IC50值为14.72 nM （95% CI: 9.08 ~ 22.38 nM）。正如预期的那样，HSK21542显著抑制[3H]二丙诺啡与KOR的结合，IC50值为0.54 nM (95% CI: 0.38-0.75 nM)，而CR845的IC50值为1.16 nM （95% CI: 0.85-1.57 nM，图2A）。结合动力学研究结果显示，HSK21542和CR845与KOR结合的K d值分别为0.068 nM （95% CI: 0.028-0.092 nM）和0.23 nM (95% CI: 0.17-0.26 nM)（图2B，C）。HSK21542的t1 /2值为90.6 min (95% CI: 53.6 ~ 292.7 min)，比CR845的t1 /2值（42.0 min, 95% CI: 28.6 ~ 79.4 min）长。另一方面，HSK21542在稳定表达人κ阿片受体的HEK-293细胞中显著抑制福斯克林诱导的cAMP积累，EC50值为2.41 pM (95% CI: 1.43-4.67 pM)，分别比CR845和U69593低12.4倍和747倍（图2D）。 为了研究HSK21542的特异性，我们在体外观察了HSK21542对多种受体、离子通道、转运体和酶的作用，包括MOR和DOR。在10 μM浓度下，HSK21542与大麻素CB1受体的结合抑制率为47%，其余85个靶点无明显活性（补充表S1）。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
由于Kappa阿片受体（KOR）激动剂具有缓解疼痛和治疗顽固性瘙痒的潜力，因此一直是有希望的治疗候选者。虽然缺乏吗啡样中枢神经系统（CNS）的作用，但KOR激动剂确实引起镇静、烦躁和利尿，严重阻碍了它们的发展。外周限制性KOR激动剂渗透到CNS系统的能力较差，因此可以改善甚至消除CNS相关的不良反应。然而，唯一批准的外周限制性KOR激动剂CR845仍然存在一些常见的中枢神经系统不良事件。在本研究中，我们旨在研究HSK21542的药理学特征，期望为患有疼痛和瘙痒的患者提供一种安全有效的替代药物。体外实验结果表明，HSK21542是一种选择性强效的KOR激动剂，其效价高于CR845，脑/血浆浓度比为0.001，表明其具有外周选择性。在疼痛动物模型中，HSK21542显著抑制醋酸、后爪切开或慢性收缩损伤引起的疼痛相关行为，给药后15分钟的疗效与CR845相当。HSK21542具有持久的镇痛作用，药后24 h扭体试验中位有效剂量为1.48 mg/kg。同时，HSK21542的抗痛觉活性被一种KOR拮抗剂非双萘哌胺有效逆转。此外，HSK21542在化合物48/80致痒模型中具有较强的止痒活性。另一方面，HSK21542在热板实验中产生中枢抗伤害感受作用的能力较弱，对小鼠运动活性的影响较小。HSK21542对小鼠呼吸速率无影响。因此，HSK21542可能是一种安全有效的KOR激动剂，是治疗疼痛和瘙痒的有希望的候选药物。[2]
HSK21542能产生有效的抗伤害感受作用。HSK21542具有显著的抗变动力作用。HSK21542减轻化合物48/80诱导的瘙痒。 HSK21542对中枢神经系统的副作用较少。 |
| 酶活实验 |
体外SafetyScreen Panel：使用SafetyScreen Panel （target selectivity Panel）评估Anrikefon (HSK21542)在86个靶点上的体外脱靶药理活性，相应的方法可在https://www.eurofinsdiscoveryservices.com/上找到。[2]
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| 细胞实验 |
[3H]二丙诺啡结合实验：HEK-293细胞（ATCC）保存在含有10% FBS的Eagle’s Minimum Essential Medium中，在含5% CO2的湿空气中37°C孵育。我们在实验室建立了稳定表达人κ阿片受体的HEK-293细胞，并用于本实验。用50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）制备细胞膜。将相当于30 μg的膜与化合物和0.6 nM [3 H]二丙诺啡（一种阿片拮抗剂）在25°C下孵育60分钟（抑制效果）或多个时间点（结合动力学）。在10 μM纳洛酮存在时，估计非特异性结合。结合馏分和游离馏分通过GF/B过滤器真空过滤分离，该过滤器用0.3%聚醚酰亚胺预处理。用冰冷的缓冲液洗涤滤片，然后计数以确定结合的放射性配体（Olianas等人，2006）。[3H]二丙诺啡结合的抑制百分比计算公式为：抑制率(%)= (CPMtotal−CPMcompound)/(CPMtotal−cpmnonspecific) × 100，其中CPMtotal =总[3H]二丙诺啡结合（膜+0.6 nM [3H]二丙诺啡），CPMnon-specific =非特异性[3H]二丙诺啡结合（膜+0.6 nM [3H]二丙诺啡+ 10 μM纳洛酮）。对于未标记的化合物，通过使用Motulsky和Mahan （Motulsky和Mahan， 1984）描述的方程拟合数据来计算缔合/离解常数。[2]
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| 动物实验 |
在体内实验中，所有测试化合物（例如Anrikefon (HSK21542)）均溶于生理盐水，并以10 μL/g的剂量进行静脉注射，吗啡和去甲双氢吗啡酮除外（皮下注射），前提是动物未麻醉且处于清醒状态。除非另有说明，所有其他试剂均为分析纯。
大鼠体内Anrikefon (HSK21542)的脑/血浆分布[2] SD大鼠（雌雄各半）单次静脉注射0.3 mg/kg的Anrikefon (HSK21542)。分别于给药后0.083、0.5、1.5和4小时采集样本。大鼠用异氟烷麻醉后，通过腹主动脉取血处死。迅速取出完整脑组织。将脑组织在4℃下以2000×g离心10分钟，分离血浆（约100 μL）。用冰冷的生理盐水冲洗脑组织，吸干水分，称重后放入塑料管中。对于1.0 g脑组织样本，向管中加入4 ml乙腈-超纯水溶液（1:4，v/v）。然后将脑组织样本在50 Hz下匀浆120秒，并进行5分钟的超声处理。血浆和脑组织样本均采用LC-MS/MS分析，具体方法详见补充材料。 LC-MS/MS分析[2] 将血浆或脑组织匀浆液冰冻解冻。将30 μL血浆或脑匀浆转移至离心管中，加入50 μL内标（D4-HSK21542，50 ng/ml）和120 μL乙腈。混合物涡旋振荡10 min，并在4°C下以2000 ×g离心10 min。收集上清液150 μL，置于96孔板中，并在氮气下干燥。残余物用150 μL超纯水复溶，并涡旋振荡10 min。将所得溶液置于液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）系统中进行分析，以测定Anrikefon (HSK21542)的浓度。该系统由DGU-20A5R脱气机、LC-30AD泵、SIL-30AC自动进样器、CTO-20A柱温箱（日本岛津公司）和AB Sciex Triple Quad 5500质谱仪（加拿大Sciex公司）组成。液相色谱系统与质谱仪通过电喷雾电离（ESI）源联用（Yang et al., 2011; Dong et al., 2018）。色谱分离在反相色谱柱（Venusil ASB C18，4.6 mm × 50 mm）上进行，采用三元梯度洗脱。自动进样器和色谱柱的温度分别保持在4℃和40℃。流动相A为0.3%甲酸的2 mM乙酸溶液，流动相B为0.2%甲酸的乙腈溶液。流速保持恒定（0.7 mL/min），进样量为20 μL。定量分析采用正离子模式。使用m/z 704.4→295.2的MRM离子对对HSK21542进行定量。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
此外，HSK21542 极难渗透到脑组织中，脑/血浆浓度比为 0.001（补充图 S2）。[2]
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
由于其在缓解疼痛和治疗顽固性瘙痒方面的潜力，κ阿片受体（KOR）激动剂一直是极具前景的治疗候选药物。尽管KOR激动剂缺乏类似吗啡的中枢神经系统（CNS）作用，但它们会引起镇静、烦躁和利尿等不良反应，严重阻碍了其研发。外周限制性KOR激动剂穿透中枢神经系统的能力较弱，因此可以减轻甚至消除中枢神经系统相关的不良反应。然而，目前唯一获批的外周限制性KOR激动剂CR845仍存在一些常见的中枢神经系统不良反应。本研究旨在探讨HSK21542的药理学特性，以期为疼痛和瘙痒患者提供一种安全有效的替代疗法。体外实验结果表明，HSK21542 是一种选择性强效的 κ 阿片受体 (KOR) 激动剂，其效力高于 CR845，脑/血浆浓度比为 0.001，表明其具有外周选择性。[2] 综上所述，体外研究结果表明 HSK21542 是一种选择性 κ 阿片受体 (KOR) 激动剂，其效力高于 CR845。脑/血浆分布研究表明，HSK21542 极难穿透中枢神经系统。体内药理活性支持 HSK21542 作为一种安全有效的镇痛止痒候选药物的转化应用潜力。总的来说，HSK21542 能够避免与中枢穿透性 κ 阿片受体 (KOR) 激动剂和 μ 阿片受体 (MOR) 激动剂相关的中枢神经系统不良反应，可能为治疗疼痛或瘙痒患者提供一种有效的替代方案。[2]
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| 分子式 |
C39H57N7O5
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|---|---|
| 分子量 |
703.913789510727
|
| 精确质量 |
703.442
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| 元素分析 |
C, 66.54; H, 8.16; N, 13.93; O, 11.36
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| CAS号 |
2269511-95-5
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| 相关CAS号 |
Anrikefon acetate;2584931-05-3
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| PubChem CID |
137433038
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| LogP |
2.6
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| tPSA |
180
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
5
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
17
|
| 重原子数目 |
51
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| 分子复杂度/Complexity |
1150
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| 定义原子立体中心数目 |
4
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| SMILES |
CC(C)C[C@H](C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC2(CC1)CN(C2)C(=O)C)NC(=O)[C@@H](CC3=CC=CC=C3)NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)N
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| InChi Key |
VWXDZAZSCZVCPV-YFRBGRBWSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C39H57N7O5/c1-27(2)22-33(36(49)42-32(16-10-11-19-40)38(51)45-20-17-39(18-21-45)25-46(26-39)28(3)47)44-37(50)34(24-30-14-8-5-9-15-30)43-35(48)31(41)23-29-12-6-4-7-13-29/h4-9,12-15,27,31-34H,10-11,16-26,40-41H2,1-3H3,(H,42,49)(H,43,48)(H,44,50)/t31-,32-,33-,34-/m1/s1
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| 化学名 |
(2R)-N-[(2R)-1-(2-acetyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-yl)-6-amino-1-oxohexan-2-yl]-2-[[(2R)-2-[[(2R)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanamide
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| 别名 |
Anrikefon; Anrikefon [INN]; 22SCY98BXV; 2269511-95-5; UNII-22SCY98BXV; 1-(7-(D-Phenylalanyl-D-phenylalanyl-D-leucyl-D-lysyl)-2,7-diazaspiro(3.5)non-2-yl)ethanone; 1-(7-(D-Phenylalanyl-D-phenylalanyl-D-leucyl-D-lysyl)- 2,7-diazaspiro(3.5)nonan-2-yl)ethan-1-one; Ethanone, 1-(7-(D-phenylalanyl-D-phenylalanyl-D-leucyl-D-lysyl)-2,7-diazaspiro(3.5)non-2-yl)-;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.4206 mL | 7.1032 mL | 14.2064 mL | |
| 5 mM | 0.2841 mL | 1.4206 mL | 2.8413 mL | |
| 10 mM | 0.1421 mL | 0.7103 mL | 1.4206 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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