AZ31

ATM ( IC50 = 1.2 nM ); ATM ( IC50 = 46 nM )

体外活性：AZ31 是一种新型、有效、口服生物可利用且可穿透血脑屏障的 ATM 抑制剂，在无细胞测定中 IC50 在 nM 范围内。经过药物筛选分析和先导化合物的精制后，它被鉴定出来。在多形性胶质母细胞瘤 (GBM) 放疗过程中抑制共济失调毛细血管扩张突变 (ATM) 可能会通过缩短对辐射引起的 DNA 损伤的反应来改善肿瘤控制。临床实施的一个主要障碍是现有抑制剂的中枢神经系统（CNS）生物利用度有限；因此，我们的目标是确定具有改善的中枢神经系统渗透性的 ATM 抑制剂 (ATMi)。 AZ31 的功效以及对肿瘤和健康大脑的影响进行了体内测试。 AZ31 在体外阻断 DNA 损伤反应并使 GBM 细胞放射增敏，并增强血脑屏障 (BBB) 穿透力。此外，表达突变体p53或具有检查点缺陷突变的人神经胶质瘤细胞系对ATMi放射增敏特别敏感。这种 p53 效应的机制涉及相对于具有野生型 p53 的细胞而言经历有丝分裂灾难的倾向。激酶测定：AZ31 是下一代血脑屏障 (BBB) 穿透性 ATM 抑制剂。 AZ31 在体外阻断 DNA 损伤反应和放射增敏 GBM 细胞。细胞测定：先前描述了人神经胶质瘤U1242、U87/luc-DsRed-p53(281G)和表达报告基因的细胞衍生物。小鼠神经胶质瘤 GL261 细胞用 Fluc-DsRed2 慢病毒感染并在细胞注射前进行分选。同样，经过认证的 NCI-H2228 非小肺癌细胞是从 ATCC 获得的。这些细胞也经过修饰以表达适合 BLI 的荧光素酶 (NCI-H2228-Luc)。细胞在 2009 年至 2016 年间获得并进行修饰。细胞在补充有 10% FBS 和青霉素-链霉素的完全 DMEM (Gibco) 中在 37°C 和 5% CO2 下生长。培养物维持时间不超过2个月，并且常规支原体检测呈阴性。

AZ31 的功效以及对肿瘤和健康大脑的影响进行了体内测试。在体内，暴露于 AZ32 和低剂量辐射后，肿瘤中的细胞凋亡比健康大脑高 6 倍以上。 AZ31 是第一个具有口服生物利用度的 ATMi，经证明可以使神经胶质瘤放射增敏并提高原位小鼠模型的生存率。这些发现支持开发临床级、BBB 穿透性 ATMi 用于治疗 GBM。重要的是，由于许多 GBM 的 p53 信号传导有缺陷，因此使用 ATMi 与标准放疗同时使用预计将具有癌症特异性，提高治疗率，并在较低辐射剂量下保持完整的治疗效果。

通过声学分配将化合物分配到 100% DMSO 中的测定板中。将 ATM 酶添加到 Hepes 缓冲液（50 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、10 mM、MnCl2 1 mM、DTT、5% v/v 甘油、0.05% v/v Tween 20）中并放置 30 分钟以在添加含有 p53 和 ATP 的底物溶液之前预孵育。两小时后，通过添加检测试剂（33 mM HEPES pH 7.4、20 mM EDTA、0.1 M KF、0.1 mg/mL BSA、13 nM D2 抗 GST 抗体（Cisbio）和 0.5 nM Eu3+ 来停止酶反应。抗 p53 磷酸 S15 抗体）。然后将混合物再孵育一晚，然后在 Pherastar 仪器上使用标准 HTRF 滤块方法进行读数。在测定中，p53、ATP 和 DMSO 的终浓度分别为 50 nM、5 µM 和 1%。数据分析软件的四参数拟合方法或智能拟合模型用于计算IC50值，或抑制50%酶活性的测试化合物的浓度。

在用 AZ31（剂量 1.25、2.5 或 5 μmol/L）、SN38（0.3125 – 20 nM）或 AZ31 + SN38 处理六种 CRC 细胞系后，使用 SRB 测定评估增殖情况。

CRC PDX models (Four-to-six week-old female athymic nude mice with implanted patient-derived colorectal adenocarcinoma tumor)
100 mg/kg-daily × 3
by oral gavage

[1]. Oncotarget. 2017 Dec 19; 8(67): 110904–110913.

[2]. J. Med. Chem. 2016, 59, 13, 6281–6292

C24H28N4O3

420.51

420.22

C, 68.55; H, 6.71; N, 13.32; O, 11.41

2088113-98-6

Solid powder

C[C@@H](C1CCOCC1)NC2=C3C=C(C=CC3=NC=C2C(=O)N)C4=CN=C(C=C4)COC

DISRGUXSEDBDDN-HNNXBMFYSA-N

InChI=1S/C24H28N4O3/c1-15(16-7-9-31-10-8-16)28-23-20-11-17(18-3-5-19(14-30-2)26-12-18)4-6-22(20)27-13-21(23)24(25)29/h3-6,11-13,15-16H,7-10,14H2,1-2H3,(H2,25,29)(H,27,28)/t15-/m0/s1

6-[6-(methoxymethyl)pyridin-3-yl]-4-[[(1S)-1-(oxan-4-yl)ethyl]amino]quinoline-3-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Note: Listed below are some common formulations that may be used to formulate products with low water solubility (e.g. < 1 mg/mL), you may test these formulations using a minute amount of products to avoid loss of samples.

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Injection Formulation 1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (i.e. 100 μL DMSO stock solution → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH ₂ O to obtain a clear solution.
Injection Formulation 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (i.e. 100 μL DMSO → 400 μLPEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
Injection Formulation 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (i.e. 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
Example: Take the Injection Formulation 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) as an example, if 1 mL of 2.5 mg/mL working solution is to be prepared, you can take 100 μL 25 mg/mL DMSO stock solution and add to 900 μL corn oil, mix well to obtain a clear or suspension solution (2.5 mg/mL, ready for use in animals).

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Injection Formulation 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in saline = 10 : 90 [i.e. 100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in saline)]
*Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution.
Injection Formulation 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (i.e. 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin → 500 μL Saline)
Injection Formulation 6: DMSO : PEG300 : castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (i.e. 50 μL DMSO → 100 μLPEG300 → 200 μL castor oil → 650 μL Saline)
Injection Formulation 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (i.e. 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
Injection Formulation 8: Dissolve in Cremophor/Ethanol (50 : 50), then diluted by Saline
Injection Formulation 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (i.e. 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
Injection Formulation 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (i.e. 100 μL EtOH → 400 μLPEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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Oral Formulation 1: Suspend in 0.5% CMC Na (carboxymethylcellulose sodium)
Oral Formulation 2: Suspend in 0.5% Carboxymethyl cellulose
Example: Take the Oral Formulation 1 (Suspend in 0.5% CMC Na) as an example, if 100 mL of 2.5 mg/mL working solution is to be prepared, you can first prepare 0.5% CMC Na solution by measuring 0.5 g CMC Na and dissolve it in 100 mL ddH2O to obtain a clear solution; then add 250 mg of the product to 100 mL 0.5% CMC Na solution, to make the suspension solution (2.5 mg/mL, ready for use in animals).

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Oral Formulation 3: Dissolved in PEG400
Oral Formulation 4: Suspend in 0.2% Carboxymethyl cellulose
Oral Formulation 5: Dissolve in 0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose
Oral Formulation 6: Mixing with food powders

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Note: Please be aware that the above formulations are for reference only. InvivoChem strongly recommends customers to read literature methods/protocols carefully before determining which formulation you should use for in vivo studies, as different compounds have different solubility properties and have to be formulated differently.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。