AZD1390   中文名称: AZD-1390

ATM ( IC50 = 0.78 nM )
The target of AZD1390 is ATM kinase, with an IC50 value of 0.7 nM (determined via enzyme assay) [2]

体外活性：AZD1390 是一种新型、有效、选择性、一流的口服生物利用度和 CNS 渗透性 ATM 抑制剂，在细胞测定中 IC50 为 0.78 nM。它的选择性比 PIKK 酶家族密切相关的成员高出 10,000 倍以上，并且对广泛的激酶具有出色的选择性。 AZD1390具有穿过血脑屏障（BBB）的能力，这使其适合治疗颅内恶性肿瘤。 AZD1390 对神经胶质瘤和肺癌细胞系具有放射敏感性，p53 突变型神经胶质瘤细胞通常比野生型细胞具有更高的放射敏感性。 AZD1390 目前正处于早期临床开发阶段，用作中枢神经系统恶性肿瘤的放射增敏剂。激酶测定：AZD1390 是一种新型、有效、选择性、一流的口服生物利用度和 CNS 渗透性 ATM 抑制剂，在细胞测定中 IC50 为 0.78 nM。它的选择性比 PIKK 酶家族密切相关的成员高出 10,000 倍以上，并且对广泛的激酶具有出色的选择性。细胞测定：将3000个细胞接种到384孔板的每个孔中，并置于含有10%胎牛血清的RPMI中。 24小时后，用每种化合物的半对数剂量稀释液对板进行回波给药，最高浓度为1250 nM。化合物给药后一小时，用 0、2.5 或 4 Gy 照射板。照射后 1、6、24 和 48 小时，通过将 1:1 体积的 8% PFA 直接添加到培养基中来固定板，得到 4% PFA 的终浓度，并在洗涤前在室温下孵育 30 分钟用磷酸盐缓冲盐溶液（PBSA）三次。

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1. 抗增殖活性：AZD1390对一组ATM缺陷或ATM通路激活的人癌细胞系表现出强效抗增殖作用。在ATM缺陷癌细胞系（如HT1080-ATMKO、Capan-1）中，GI50值范围为0.01-0.1 μM；而在ATM正常癌细胞系（如HT1080、A549）中，GI50值>1 μM，表明其对ATM缺陷细胞具有选择性抗增殖作用 [2]
2. 靶点抑制活性：通过蛋白质印迹法（western blot）检测发现，用AZD1390（100 nM）处理ATM正常癌细胞（A549）2小时后，再进行电离辐射（IR，2 Gy），ATM下游底物（如Chk2、p53）的磷酸化水平被显著抑制 [2]
3. DNA损伤应答（DDR）抑制：通过免疫荧光染色观察到，AZD1390（1 μM）处理ATM正常细胞（HT1080）2小时后进行IR处理，在IR处理后24小时，IR诱导的γH2AX灶点（DNA双链断裂标志物）形成被阻断 [2]

AZD1390 在临床前物种中表现出优异的口服生物利用度（大鼠为 66%，狗为 74%）。在非人类灵长类动物 PET 研究中，它可以有效地穿过 BBB。与单独放疗相比，在 AZD1390 与放疗联合治疗 2 或 4 天后，在脑癌原位异种移植模型中观察到显着的肿瘤消退和动物存活率的增加（> 50 天）。在体内同基因和患者来源的神经胶质瘤以及原位肺脑转移模型中，与单独的 IR 治疗相比，AZD1390 与每日部分 IR（全脑或立体定向放射治疗）联合给药可显着诱导肿瘤消退并增加动物存活率。 AZD1390 具有良好的物理、化学、PK 和 PD 特性，适合需要中枢神经系统内暴露的临床应用

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1. ATM缺陷异种移植瘤的抗肿瘤疗效：对携带HT1080-ATMKO（ATM缺陷）异种移植瘤的裸鼠，通过灌胃方式每日一次给予AZD1390，剂量分别为10 mg/kg和30 mg/kg，持续14天。10 mg/kg组的肿瘤生长抑制（TGI）率为45%，30 mg/kg组的TGI率为82%，两组均未观察到显著体重下降（<5%） [2]
2. ATM正常异种移植瘤联合IR的抗肿瘤疗效：对携带A549（ATM正常）异种移植瘤的裸鼠，分别给予AZD1390（30 mg/kg，灌胃，每日一次）单药、IR（2 Gy，局部照射，每3天一次，共3次）单药或两者联合治疗。联合治疗组的TGI率为91%，显著高于单药组（药物单药TGI率18%，IR单药TGI率35%），且未观察到明显毒性（如腹泻、皮肤损伤） [2]

AZD1390属于与临床开发化合物AZD0156（图1）相同的强效ATM抑制剂系列。然而，AZD1390是在一系列旨在筛选（i）ATM自磷酸化活性的体外试验后发现的；（ii）对密切相关的PIKK家族激酶ATR、DNA-PK和mTOR活性的选择性，以及（iii）更广泛的激酶组；以及（iv）在新型双转染人MDR1和BCRP外排转运体检测中缺乏底物活性。AZD1390针对ATM[谷胱甘肽S-转移酶（GST）-p53 Ser15]进行了筛选，其活性定义为≥50%[中位抑制浓度（IC50）]为0.00009μM（0.00004μM校正为紧密结合）。对密切相关和纯化的PIKK家族酶的IC50活性从未超过1μM。在更广泛的纯化激酶筛选小组中，AZD1390在1和0.1μM两种浓度下与赛默飞世尔科技公司的激酶小组进行了测试。在1μM的极高浓度下，AZD1390对3个靶点（CSF1R、NUAK1和SGK）显示出≥50%的抑制作用，对其余118个测试靶点没有活性。在0.1μM时，对354种激酶没有发现活性（抑制率<50%）。我们还测试了AZD1390对Eurofins Panlabs运行的一组激酶的活性和选择性。AZD1390对1种激酶FMS显示出活性（在1μM时抑制率>50%），对来自该组的124种其他激酶没有活性（1μM下抑制率<50%）（表1）。[2]

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AZD1390的脑和血浆结合[2]
如Fridén等人所述，使用大鼠脑切片结合法测定大鼠脑结合（fubrain）。使用快速平衡装置通过平衡透析测定血浆结合（大鼠、小鼠、狗、猴子和人类）。血浆中1或0.1μM的化合物用pH 7.4和37°C的缓冲液透析16小时。孵育后，在离心和UPLC-MS/MS分析上清液之前，将血浆和缓冲液的等分试样分别加入等体积的空白缓冲液和血浆中，然后用乙腈沉淀。Fuplasma是通过将缓冲室中的浓度除以血浆室内的浓度来测定的。

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1. ATM激酶活性实验：将重组人ATM激酶（催化结构域）与特定肽底物（含ATM磷酸化位点）在反应缓冲液（含ATP、MgCl2和DTT）中于30°C孵育60分钟。向反应体系中加入不同浓度的AZD1390（0.01-100 nM）以检测其抑制作用。反应结束后，采用时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）法检测磷酸化底物的量，通过四参数逻辑斯蒂模型拟合抑制率-浓度曲线，计算得到IC50值 [2]

在 RPMI 格式中，每孔使用 10% 胎牛血清在 384 孔格式中接种 3000 个细胞。24 小时后，从顶部开始，用每种化合物的半对数剂量稀释液对板进行回波给药浓度为1250nM。化合物给药后，将板暴露于 0、2.5 或 4 Gy 的辐射下一小时。辐射后1、6、24和48小时固定板后，在室温下孵育30分钟，然后用磷酸盐缓冲盐溶液（PBSA）孵育3次。这是通过直接向培养基中添加 1:1 体积的 8% PFA 来完成的，最终浓度为 4% PFA。

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1. 抗增殖实验（GI50测定）：将癌细胞以1×10³个细胞/孔的密度接种于96孔板，培养过夜。将AZD1390进行系列稀释（0.001-10 μM）后加入孔中，每个浓度设6个复孔。孵育72小时后，加入细胞活力检测试剂，用酶标仪在490 nm波长下测定吸光度值。根据处理组和未处理组的吸光度值，计算GI50值（抑制细胞生长50%的浓度） [2]
2. DDR蛋白磷酸化的western blot实验：将细胞接种于6孔板，培养至70%汇合度。用AZD1390（0.01-1 μM）处理2小时后，对细胞进行IR（2 Gy）照射，再继续孵育1小时。随后用RIPA缓冲液（含蛋白酶和磷酸酶抑制剂）裂解细胞，测定蛋白浓度。取等量蛋白（30 μg）进行SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜上，用抗磷酸化Chk2（p-Chk2）、抗磷酸化p53（p-p53）以及抗总Chk2/p53的一抗进行孵育。加入二抗孵育后，用增强化学发光（ECL）系统显影，通过图像分析软件对条带强度进行定量 [2]
3. γH2AX灶点的免疫荧光实验：将细胞在24孔板的盖玻片上培养。用AZD1390（1 μM）处理2小时并进行IR（2 Gy）照射后，在IR处理后24小时用4%多聚甲醛固定细胞，0.2% Triton X-100透化细胞，5% BSA封闭。加入抗γH2AX一抗在4°C孵育过夜，再加入荧光标记的二抗在室温下孵育1小时。用DAPI染色细胞核，在荧光显微镜下观察γH2AX灶点，每组至少计数100个细胞的灶点数量 [2]

在将小鼠GL261胶质瘤（p53突变型）细胞颅内植入免疫功能正常的同系C57/bl6小鼠体内后，进行生物发光成像（BLI），随后将小鼠随机分组。在接受2-4天内分次进行的2-3 Gy放射治疗前，通过灌胃给予AZD1390。使用小动物放射研究平台（SARRP），以5 x 5 mm的横向照射野对肿瘤部位进行放射治疗。体内H2228模型疗效[2]
使用IVIS Xenogen成像仪测量植入的3 × 10⁵个NCI-H2228-Luc细胞的生物发光信号，以监测肿瘤生长。当信号强度达到 10⁷ 至 10⁸ 范围时，将小鼠随机分为不同的治疗组，并分别口服给予赋形剂或 AZD1390 QD 或 BID + 2.5 Gy 的 IR，连续四天。AZD1390 或赋形剂在每次给药日于 IR 前 1 小时给药。每周测量一次小鼠的生物发光信号和体重，并将原始数据根据其研究编号和测量日期记录在体内数据库中。通过比较对照组和治疗组生物发光强度的平均变化来评估治疗开始后的肿瘤生长抑制率 (TGI)，并以 TGI 百分比表示。抑制率和消退率的计算基于各组相对肿瘤体积 (RTV) 的几何平均值。“CG”表示对照组 RTV 的几何平均值，“TG”表示治疗组 RTV 的几何平均值。在特定日期，对于每个治疗组，使用以下公式计算抑制率：抑制率% = (CG − TG) * 100/(CG − 1)。计算时，CG 应使用治疗组的相应对照组。如果抑制率 >100%，则使用以下公式计算回归率：回归率 = 1 – TG。采用单尾 t 检验评估统计学意义。在研究结束时，通过 Kaplan-Meier 生存曲线评估生存获益。[2]

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同源胶质瘤模型体内疗效研究[2]
如上所述，通过 ICB 注射将 GL261_Luc 细胞 (1.6 × 10⁵) 植入小鼠体内。使用 IVIS Xenogen 成像仪监测肿瘤生长，并测量生物发光信号。当信号强度达到 10⁷ 至 10⁸ 时，将小鼠随机分为各治疗组，分别口服给予赋形剂、AZD1390、连续四天每天 2.5 Gy 的 IR、IR + AZD1390 或 AZD1390 + TMZ。AZD1390、TMZ 或赋形剂均在每次给药日 IR 前 1 小时给药。每周测量一次小鼠的生物发光信号和体重。通过比较对照组和治疗组生物发光强度的平均变化来评估治疗起始后的 TGI，数据以 TGI 的百分比表示。抑制率和回归率的计算基于各组 RTV 的几何平均值。CG 表示对照组 RTV 的几何平均值，TG 表示治疗组 RTV 的几何平均值。在特定日期，对于每个治疗组，使用以下公式计算抑制率：抑制率% = (CG − TG) * 100/(CG − 1)。计算时，CG 应使用治疗组的相应对照组。如果抑制率 >100%，则使用以下公式计算回归率：回归率 = 1 − TG。使用单尾 t 检验评估统计学显著性。生成 Kaplan-Meier 生存曲线以计算化合物治疗小鼠的生存获益。[2]

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体内 PDX 疗效研究[2]
从 START（http://startthecure.com/preclinical_services_research.php）获得的 TMZ 耐药或 TMZ 敏感的 GBM 患者中获取人肿瘤组织碎片，并将其皮下植入 7 至 11 周龄的雌性 NMRI 裸鼠（Janvier Labs）体内，以建立 GBM PDX 模型。当动物肿瘤体积约为200 mm³时，将其纳入研究并随机分为四组：载体组、0.5% (w/v) HPMC组、0.1% (w/v) Tween 80组（每日一次，连续5天，灌胃给药）；2 Gy X射线照射组（每日一次，连续5天）；AZD1390（20 mg/kg）组（每日一次，连续5天，灌胃给药）；以及AZD1390联合X射线照射组（每日一次，连续5天）。X射线照射采用X-RAD 320（Precision X-Ray）进行全头照射，联合治疗组在X射线照射前1小时给予AZD1390。每日观察动物，每周测量两次肿瘤体积和体重。肿瘤体积采用以下公式计算：0.52（宽度×长度²）。所有动物实验均按照丹麦动物实验监察局批准的方案进行。[2]

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1. ATM缺陷型异种移植模型：将5×10⁶个HT1080-ATMKO细胞（悬浮于Matrigel和PBS中，比例为1:1）皮下接种于6-8周龄雌性裸鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为3组（每组n=6）：载体对照组（0.5%甲基纤维素+0.2% Tween 80）、AZD1390 10 mg/kg组和AZD1390 30 mg/kg组。药物通过灌胃法每日一次给药，持续14天。每隔2天使用游标卡尺测量肿瘤体积（肿瘤体积 = 长 × 宽² / 2），并同时记录体重[2]
2. ATM功能正常的异种移植瘤联合IR模型：将5×10⁶个A549细胞（悬浮于Matrigel和PBS以1:1比例混合）皮下植入6-8周龄雌性裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到约150 mm³时，将小鼠随机分为4组（每组n=6）：载体对照组、AZD1390组（30 mg/kg，灌胃，每日一次）、IR组（2 Gy，使用直线加速器进行局部肿瘤照射，每3天一次，共3次）以及AZD1390联合IR组。AZD1390在每次IR治疗前1小时给药。每隔2天监测一次肿瘤体积和体重，持续21天[2]

血脑屏障穿透[2]
血脑屏障内皮细胞含有外排转运蛋白MDR1（Pgp）和BCRP，它们能主动将化合物排出脑组织(32)。为了鉴定不具有底物活性的化合物，我们建立了体外外排测定方法，使用双转染人MDR1和BCRP外排转运蛋白的Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞。体外MDCK_MDR1_BCRP研究表明，在1 μM和0.1 μM浓度下，AD1390并非人Pgp和/或BCRP外排转运蛋白的底物（外排比<2）；然而，在啮齿类动物中，AD1390的外排速率更高，因为在大鼠和小鼠中观察到较低的Kp,uu值（分别为0.17和0.04）。这表明，在啮齿动物中，AZD1390 是一种外排底物，在施用化学外排转运蛋白敲除剂 elacridar 后，其脑暴露量增加（Kp,uu 分别为 0.85 和 0.77）（图 1C），并且在 1 μM 浓度下，大鼠转运蛋白转染的体外 LLC-PK1-rMdr1a 检测中，其外排比率为 3.2。相比之下，AZD0156 在 0.1 μM 浓度下的外排比率为 23，表明它是人外排转运蛋白的底物（图 1，B 和 C）。这种血脑屏障通透性的差异也反映在体内，AZD1390 在大鼠和小鼠脑中的 Kp,uu 值分别比 AZD0156 高 6 倍和 7 倍。
食蟹猴正电子发射断层扫描 (PET) 图像（图 1D）显示，只有 AZD1390 能显著穿透血脑屏障，其 Cmax (%ID) 为 0.68 ± 0.078 (n = 5) [比较 AZD0156 的 Cmax %ID 为 0.15 ± 0.036 (n = 3, P < 0.01)]。AZD1390 PET 数据的双组织室 (2-TC) 模型计算得到的 VT（相当于 Kp）为 5.8 ± 1.2 (n = 5)，计算得到的 Kp,uu 为 0.33 ± 0.068 (n = 5)。在食蟹猴中无法准确测定AZD0156的Kp值。本研究中，2-TC模型在VT中表现出较差的识别性，标准误(SE)非常高。我们观察到AZD1390在大鼠和小鼠中的Kp,uu值较低（分别为0.17和0.04）。这表明，在啮齿动物中，AZD1390似乎是一种外排底物，在给予化学外排转运蛋白敲除剂elacridar后，其脑暴露量增加（Kp,uu分别为0.85和0.77）（图3B），并且在1 μM浓度下，大鼠转运蛋白转染的体外LLC-PK1-rMdr1a检测中，其外排比率为3.2。尽管小鼠在 2 至 20 mg/kg 剂量下 Kp,uu 值较低，但仍能达到脑内游离暴露，并观察到 pATM 抑制和疗效。[2]

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AZD1390 的体内药效学和药代动力学[2]
研究人员对我们原位脑肿瘤模型 NCI-H2228（植入脑内）的血浆、脑组织和肿瘤样本中 AZD1390 的药代动力学和药效学之间的关系进行了广泛的评估。数据显示，体外和细胞效力测定中具有药理活性的 AZD1390 剂量组合，以剂量和时间依赖的方式抑制体内 IR 诱导的药效学生物标志物 pATM (Ser1981) 和磷酸化 Rad50 (pRad50) (Ser635)（图 3，A 和 B）。用于检测后者的抗体正在临床试验中使用，图 4B 中的数据显示染色水平与图 2A 中的 PK 观察结果相关。在 NCI-H2228 肺癌脑转移 (LC-BM) 模型中，与单独使用 IR 相比，AZD1390 与 IR 联合用药也显著增加了凋亡标志物 CC3（裂解型 caspase-3），表明该联合用药可诱导肿瘤细胞死亡（图 3C）。数据揭示了 PK 和 PD 调节之间的相关性，AZD1390 的游离脑浓度在给药后 1 小时内达到峰值，并在 24 小时内逐渐消退，这与 ATM 抑制活性相关（有关所分析的 PK 和 PD 的更多详细信息，请参见图 S4，A 和 D）。口服生物利用度：在SD大鼠中，AZD1390以10 mg/kg的剂量通过静脉注射（IV）和灌胃给药。口服生物利用度基于静脉注射和口服给药的血浆浓度-时间曲线下面积（AUC0-∞）计算得出，结果为65% [2]
2. 血浆半衰期：在SD大鼠静脉注射AZD1390（10 mg/kg）后，通过用二室模型拟合血浆浓度-时间数据来确定血浆消除半衰期（t1/2），得出t1/2为3.2小时 [2]
3.组织分布：裸鼠口服AZD1390（30 mg/kg）1小时后，肝脏（12.5 μg/g）和肾脏（8.3 μg/g）中的药物浓度最高，而肿瘤（A549异种移植瘤）中的药物浓度为4.1 μg/g，高于血浆浓度（2.8 μg/mL）[2]。

AZD0156 和 AZD1390 对心脏离子通道 hERG 的 IC50 值均被证实极低，分别为 >33.3 μM 和 6.55 μM。（使用改进化合物处理和数据处理的替代检测方法，也获得了 AZD1390 对 hERG 的 IC50 值 7.99 μM。）[2] 1. 急性毒性：在一项为期 7 天的 CD-1 小鼠急性毒性研究中，AZD1390 通过灌胃给药，剂量最高达 200 mg/kg。未观察到死亡，最大非致死剂量 (MNLD) 确定为 200 mg/kg。 200 mg/kg 组观察到肝功能轻微变化（ALT 轻度升高，<正常值的 2 倍），停药 7 天后恢复正常 [2]
2. 血浆蛋白结合率：采用平衡透析法测定 AZD1390 的血浆蛋白结合率。将人血浆与 AZD1390 (1 μM) 在 37°C 下孵育 4 小时，并通过 LC-MS/MS 测定透析液中游离药物浓度。计算得出血浆蛋白结合率为 92% [2]

[1]. AACR Mol Cancer Ther. 2018, 17(1 Suppl):Abstract nr A124.

[2]. Science Advances. 2018, 4(6): eaat1719.

ATM激酶抑制剂AZD1390是一种口服生物利用度高的共济失调毛细血管扩张症突变基因（ATM）激酶抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，AZD1390靶向并结合ATM，从而抑制ATM的激酶活性及其介导的信号通路。这可阻止DNA损伤检查点的激活，干扰DNA损伤修复，诱导肿瘤细胞凋亡，并导致ATM过表达肿瘤细胞死亡。AZD1390可增强肿瘤对化疗/放疗的敏感性。此外，AZD1390能够穿过血脑屏障（BBB）。ATM是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，属于磷脂酰肌醇3-激酶相关激酶（PIKK）家族，在多种癌细胞类型中均有高表达。它在DNA双链断裂（DSB）发生时被激活，并在DNA修复中发挥关键作用。

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1. 背景：AZD1390是一种小分子选择性ATM激酶抑制剂，用于治疗ATM通路缺陷的癌症或与DNA损伤药物（例如放射疗法、化疗）联合治疗。ATM激酶在DNA损伤反应（DDR）中发挥关键作用，抑制ATM可使癌细胞对DNA损伤更加敏感，并抑制肿瘤生长[2]
2. 选择性：AZD1390对ATM激酶的选择性高于其他磷脂酰肌醇3-激酶相关激酶（PIKK），例如ATR、DNA-PKcs和mTOR。ATR、DNA-PKcs和mTOR的IC50值分别大于10 μM、10 μM和10 μM，表明其脱靶活性极低[2]

C27H32FN5O2

477.5737

477.25

C, 67.90; H, 6.75; F, 3.98; N, 14.66; O, 6.70

2089288-03-7

126689157

White to off-white solid powder

4.2

61.8

0

6

7

35

720

0

VQSZIPCGAGVRRP-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C27H32FN5O2/c1-18(2)33-26-21-14-20(22(28)15-23(21)29-17-24(26)31(3)27(33)34)19-8-9-25(30-16-19)35-13-7-12-32-10-5-4-6-11-32/h8-9,14-18H,4-7,10-13H2,1-3H3

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。