| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Fluorescent indicator/dye for intracellular pH.
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| 体外研究 (In Vitro) |
完全处理的细胞显示出具有电子致密沉积物的氢化小体,其聚集程度各不相同。在某些情况下,可以在氢化酶体内部观察到染色。显微镜下还可以看到,K+/H+离子载体黑曲霉素不会抑制BCECF-AM的氢质体负载。
pH敏感荧光染料用于测量细胞质pH值。 1.制备2至20mM BCECF-AM在DMSO中的储备溶液 2.在缓冲溶液(如HHBS或PBS)中制备5-50μM BCECF-AM染料负载溶液 3.向细胞板中加入1000μL/孔(6孔板)、100μL/孔(96孔板)或25μL/井(384孔板)BCECF-AM染料负载溶液 4.将染料装载板在细胞培养箱中孵育30-60分钟 5.清洗染料加载溶液,并用缓冲液替换 6.通过监测Ex/Em=490/535nm或430/535nm的荧光进行pH测定,以进行比率测量。 |
| 酶活实验 |
ET-1对Na+/H+交换的影响[2]
使用标准氨脉冲技术测量NHE活性(图2A)。负载BCECF的PASMC以1 mL/min的速率用溶液1灌注,溶液1含有(单位为mmol/L):130 NaCl、5 KCl、1MgCl2、1.5 CaCl2、10葡萄糖和20 HEPES,在37°C下用NaOH将pH值调节至7.4。在细胞短暂暴露于NH4Cl(铵脉冲)之前,使用NaOH在pH 7.4的条件下用溶液2灌注3分钟,测量基线pHi 2分钟。溶液2含有(单位为mmol/L):110 NaCl、20 NH4Cl、5 KCl、1MgCl2、1.5 CaCl2、10葡萄糖、20 HEPES。铵脉冲由于NH3的流入和细胞内H+的缓冲而引起碱化(图2A)。在没有细胞外Na+的情况下,使用含有(以mmol/L计)130氯化胆碱、5 KCl、1MgCl2、1.5 CaCl2、10葡萄糖和20 HEPES的无Na+和NH4+溶液在pH 7.4下用KOH冲洗NH4Cl 10分钟,由于NH3的快速扩散和冲洗,会导致酸化。然后将外部溶液切换回含Na+的溶液1 10分钟。重新添加细胞外Na+可以激活Na+/H+交换,并从酸化恢复到基础水平。Na+依赖性从细胞内酸化(pH值变化超过2分钟)中恢复的速率与NHE活性相对应。 |
| 细胞实验 |
细胞内pH值测量[2]
将PASMC放置在用HBSS灌注的层流细胞室中,pH值调节至7.4。在37°C、20%O2-5%CO2气氛下,用pH敏感荧光染料2′,7′-双(羧乙基)-5(6)-羧基荧光素(BCECF-AM)的膜渗透剂(乙酰氧基甲酯)形式孵育细胞60分钟,测量pHi。然后在37°C下用HBSS洗涤细胞15分钟,以去除细胞外染料,并使细胞溶质染料完全脱酯。BCECF荧光的定量测量在工作站 上进行,该工作站由带有荧光附件的Nikon TSE 100 Ellipse倒置显微镜组成。来自氙弧灯的光束在490和440 nm处被干涉滤光片过滤,并通过20倍荧光物镜 聚焦到受检的PASMCS上。从细胞发出的530nm的光通过物镜返回,并被成像相机检测到。电子快门(萨特仪器公司)用于尽量减少染料的光漂白。使用InCyte软件 执行协议并在线收集数据。每次实验后,通过原位校准估算pHi。用含有(以mmol/L计):105 KCl、1 MgCl2、1.5 CaCl2、10葡萄糖、20 HEPES Tris和0.01黑曲霉素的溶液灌注细胞,使pHi与外部pH平衡。用KOH将pHi从6.5调节到7.5时,根据测量的荧光进行两点校准。细胞内H+离子浓度([H+]i)由pHi确定,公式为:pHi=−log([H+]i)。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
荧光染料2',7'-双-(2-羧乙基)-5(和-6)-羧基荧光素 (BCECF) 已被广泛用作胞质pH的指示剂。本文报道,BCECF定位于阴道毛滴虫的氢化酶体(存在于多个系统发育上不同的厌氧原生生物类群中的产氢细胞器),可通过荧光显微镜观察到。用二氨基联苯胺和过氧化氢处理负载BCECF的细胞,并结合紫外光照射,进一步证实了BCECF的细胞定位。处理后,在氢化酶体基质中生成了嗜锇沉淀,可通过电子显微镜观察到。使用较短的加载时间(7.5 分钟)、冰上加载、使用低至 10 nM 的 BCECF(乙酰氧基甲酯)浓度,以及在加载缓冲液中加入阴离子通道阻滞剂丙磺舒或磺吡酮,或 K+/H+ 离子载体尼日利亚菌素,均未能阻止 BCECF 在氢化酶体中的积累。当用酯形式的 BCECF 加载完整细胞时,这种摄取现象最为明显,但在用游离 BCECF 加载细胞(无论是与破裂细胞孵育还是对完整细胞进行电穿孔)后,也能观察到这种现象。在不含细胞质或代谢底物的洗涤细胞裂解液中,也能观察到氢化酶体对 BCECF 的加载。我们测试了一系列其他用于胞质标记的荧光染料,发现钙指示剂 fura-2(乙酰氧基甲酯)和细胞活力标记物荧光素二乙酸酯也能标记氢化酶体。结果表明 BCECF 可作为氢化酶体的荧光标记物(第一个此类标记物),但同时也警示人们不要随意使用荧光酯染料来测量含氢化酶体生物体细胞质的特性——这些染料也可能指示氢化酶体的特性。[1]
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| 分子式 |
C42H40O21
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|---|---|
| 分子量 |
880.754400000001
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| 精确质量 |
880.206
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| CAS号 |
117464-70-7
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| PubChem CID |
53229972
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| 外观&性状 |
Orange to red solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
939.2±65.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
368.9±34.3 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±0.3 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.602
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| LogP |
0.9
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| tPSA |
264.39
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
21
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| 可旋转键数目(RBC) |
27
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| 重原子数目 |
63
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| 分子复杂度/Complexity |
1610
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
NTECHUXHORNEGZ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C42H40O21/c1-22(43)52-17-57-34-15-36-32(13-27(34)7-10-38(48)59-19-54-24(3)45)42(31-9-6-29(12-30(31)41(51)63-42)40(50)61-21-56-26(5)47)33-14-28(8-11-39(49)60-20-55-25(4)46)35(16-37(33)62-36)58-18-53-23(2)44/h6,9,12-16H,7-8,10-11,17-21H2,1-5H3
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| 化学名 |
acetyloxymethyl 3',6'-bis(acetyloxymethoxy)-2',7'-bis[3-(acetyloxymethoxy)-3-oxopropyl]-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-5-carboxylate
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| 别名 |
BCECF-acetoxymethyl; MFCD00036969; acetyloxymethyl 3',6'-bis(acetyloxymethoxy)-2',7'-bis[3-(acetyloxymethoxy)-3-oxopropyl]-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-5-carboxylate; Spiro[isobenzofuran-1(3H),9'-[9H]xanthene]-2',7'-dipropanoic acid, 3',6'-bis(acetyloxy)-5(or 6)-[[(acetyloxy)methoxy]carbonyl]-3-oxo-, 2',7'-bis[(acetyloxy)methyl] ester; ...; BCECF/AM - CAS 117464-70-7;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意: (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。 (2). 该产品在溶液状态不稳定,请现配现用。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.1354 mL | 5.6770 mL | 11.3540 mL | |
| 5 mM | 0.2271 mL | 1.1354 mL | 2.2708 mL | |
| 10 mM | 0.1135 mL | 0.5677 mL | 1.1354 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。