| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Fluorescent indicator/dye for intracellular pH.
BCECF-AM does not have a specific biological target as a therapeutic agent. It is a fluorescent probe designed for pH measurement in living cells. The acetoxymethyl ester (AM) group enables cell permeability by masking the negative charges of the carboxyl groups. Once inside the cell, esterases cleave the AM groups, converting BCECF-AM into the charged, membrane-impermeant BCECF, which remains trapped intracellularly. BCECF's fluorescence intensity varies with pH, allowing quantitative pH measurements. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
经充分处理的细胞显示出氢化酶体，其上沉积有电子致密物，聚集程度不一。在某些情况下，氢化酶体内部也观察到了染色。显微镜观察还发现，K+/H+离子载体尼日利亚菌素不抑制BCECF-AM与氢化酶体的结合。
用于测量胞质pH的pH敏感荧光染料。 1. 配制2至20 mM的BCECF-AM DMSO储备液。 2. 配制5-50 μM的BCECF-AM缓冲液（例如HHBS或PBS）。 3. 向细胞培养板中加入1000 μL/孔（6孔板）、100 μL/孔（96孔板）或25 μL/孔（384孔板）的BCECF-AM染料加载液。 4. 将染料加载板置于细胞培养箱中孵育 30-60 分钟。 5. 用缓冲液洗涤并替换染料加载液。 6. 通过监测激发/发射波长为 490/535 nm 或 430/535 nm 时的荧光强度进行 pH 值测定（用于比值测量）。 BCECF-AM 是 BCECF 的一种非荧光细胞渗透性酯，经胞质酯酶水解后，可生成胞内捕获的 pH 指示剂 BCECF。BCECF 具有 pH 依赖性荧光，其激发波长最大值约为 503 nm（pH 非依赖性）和 439 nm（pH 依赖性），发射波长为 530 nm。两个激发波长下的荧光强度比值可用于测量胞内 pH 值，且该比值与染料浓度和细胞厚度无关。该化合物被广泛用作测量胞内 pH 值的荧光标记物/指示剂。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
目前尚无BCECF-AM作为治疗剂的体内活性数据。该化合物是一种研究工具，用于测量分离细胞和组织中的细胞内pH值，并非用于治疗用途。由于BCECF-AM易水解且难以靶向特定组织，其体内应用受到限制。该化合物主要用于离体和体外实验。
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| 酶活实验 |
ET-1 对 Na+/H+ 交换的影响[2]
采用标准氨脉冲技术测量 NHE 活性（图 2A）。将负载 BCECF 的 PASMC 以 1 mL/min 的流速灌注溶液 1，该溶液包含（mmol/L）：130 NaCl、5 KCl、1 MgCl2、1.5 CaCl2、10 葡萄糖和 20 HEPES，并用 NaOH 将 pH 值调节至 7.4，温度为 37°C。在用溶液 2 短暂暴露于 NH4Cl（氨脉冲）3 分钟之前，测量基线 pHi，溶液 2 包含（mmol/L）：110 NaCl、20 NH4Cl、5 KCl、1 MgCl2、1.5 CaCl2、10 葡萄糖和 20 HEPES，并用 NaOH 将 pH 值调节至 7.4。铵脉冲导致细胞内NH3流入和H+缓冲，从而引起碱化（图2A）。在无细胞外Na+的情况下，使用不含Na+和NH4+的溶液（成分为：130 mmol/L氯化胆碱、5 mmol/L氯化钾、1 mmol/L氯化镁、1.5 mmol/L氯化钙、10 mmol/L葡萄糖和20 mmol/L HEPES，用KOH调节pH至7.4）冲洗NH4Cl 10分钟，由于NH3的快速扩散和冲洗，导致酸化。然后将外液切换回含Na+的溶液1，持续10分钟。重新添加细胞外Na+可激活Na+/H+交换，使酸化状态恢复至基础水平。Na+依赖性细胞内酸化恢复速率（2分钟内pH值的变化）与NHE活性相对应。 由于BCECF-AM并非酶抑制剂，因此通常不进行其体外酶活性测定。该化合物可用作酯酶的底物，酯酶可裂解AM基团，释放出荧光BCECF。为进行质量控制和表征，可通过荧光光谱法监测酯酶对BCECF-AM的水解反应。在503 nm激发下，530 nm处的荧光强度增加表明酯化反应成功。该化合物干燥状态下稳定，应避光防潮保存。 |
| 细胞实验 |
细胞内pH值测定[2]
将肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）置于层流细胞室中，并用pH值调至7.4的HBSS缓冲液灌注。在20% O2-5% CO2的气氛下，于37°C孵育细胞60分钟，孵育液为pH敏感荧光染料2′,7′-双(羧乙基)-5(6)-羧基荧光素（BCECF-AM）的膜渗透性（乙酰氧基甲基酯）形式。随后，用HBSS缓冲液于37°C洗涤细胞15分钟，以去除细胞外染料并使胞质染料完全脱酯。使用配备落射荧光附件的尼康TSE 100 Ellipse倒置显微镜工作站进行BCECF荧光比率测量。来自氙弧灯的光束经490 nm和440 nm干涉滤光片过滤后，通过20倍荧光物镜聚焦到待测的PASMCS细胞上。细胞在530 nm处发射的光经物镜反射后由成像相机检测。使用电子快门以最大程度地减少染料的光漂白。实验方案通过InCyte软件在线执行并采集数据。每次实验后，根据原位校准估算细胞内pH值（pHi）。细胞用含有以下成分（mmol/L）的溶液灌注，以使pHi与外部pH值平衡：105 KCl、1 MgCl₂、1.5 CaCl₂、10葡萄糖、20 HEPES-Tris和0.01尼日利亚菌素。通过测量荧光强度，并结合KOH将pHi从6.5调节至7.5，建立两点校准曲线。细胞内H+离子浓度([H+]i)由pHi计算得出，计算公式为：pHi = −log([H+]i)。 采用BCECF-AM进行基于细胞的检测以测量细胞内pH。将细胞与BCECF-AM染料（通常为1-10 μM）在培养基中于37°C孵育15-60分钟，使细胞加载BCECF-AM。细胞内酯酶会裂解AM基团，将BCECF捕获在细胞内。加载后，洗涤细胞以去除细胞外染料。使用荧光显微镜、酶标仪或流式细胞仪测量荧光强度。激发波长为440 nm和490-505 nm，发射波长为530 nm。计算两个激发波长下的发射强度比值，并使用校准曲线将其转换为pH值。 |
| 动物实验 |
由于BCECF-AM是一种荧光染料而非治疗剂，因此目前尚无相关的动物模型研究。该化合物可用于离体组织测量或某些研究应用中的体内成像。对于体内成像，BCECF-AM可局部或全身注射，但其快速水解和清除限制了其应用。该化合物主要用于基于细胞和组织的pH值测量检测。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
BCECF-AM 的分子量约为 880.75，是分子式为 C80H72O38 的异构体混合物。该化合物对光敏感，操作和储存过程中应避光。它可溶于 DMSO，应以 DMSO 溶液的形式储存于 -20°C，并避光防潮。该化合物具有吸湿性，应在干燥条件下操作。溶液应在使用前新鲜配制。由于含有 AM 酯基团，该染料可透过细胞膜。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无关于BCECF-AM的具体毒性数据记录。该化合物是一种用于细胞生物学研究的荧光染料，在pH测量常用浓度（1-10 μM）下通常被认为无毒。然而，AM基团可能发生水解释放甲醛，高浓度甲醛可能具有毒性。处理该化合物时应遵循标准的实验室安全操作规程。该化合物仅供研究使用，未经批准用于人体治疗。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
荧光染料2',7'-双-(2-羧乙基)-5(和-6)-羧基荧光素（BCECF）已被广泛用作细胞质pH的指示剂。本文报道BCECF定位于阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis）的氢化酶体（存在于多个系统发育不同的厌氧原生生物类群中的产氢细胞器），并且可以通过荧光显微镜观察到。用二氨基联苯胺和过氧化氢处理负载BCECF的细胞，并结合紫外线照射，进一步证实了BCECF的细胞定位。处理后，在氢化酶体基质中生成了富含锇的沉淀物，这可以通过电子显微镜观察到。较短的加载时间（7.5 分钟）、冰上加载、使用低至 10 nM 的 BCEF（乙酰氧基甲酯）浓度，以及在加载缓冲液中添加阴离子通道阻滞剂（如丙磺舒或磺吡酮）或 K+/H+ 离子载体尼格瑞恩，均未能阻止 BCEF 在氢化酶体中的积累。当用酯化形式的 BCECF 加载完整细胞时，这种摄取最为显著，但当用游离的 BCECF 加载细胞时（无论是与破裂细胞孵育还是与完整细胞进行电穿孔），也观察到了这种现象。在不含细胞质或代谢底物的洗涤细胞裂解液中，也观察到了氢化酶体与 BCECF 的结合。我们测试了一系列其他用于细胞质标记的荧光染料，发现钙指示剂 fura-2（乙酰氧基甲酯）和细胞活力标记物荧光素二乙酸酯也能标记氢化酶体。研究结果表明，BCECF 可作为氢化酶体的荧光标记物（首个此类标记物），但同时也警示人们不应滥用荧光酯类染料来测量含氢化酶体生物的细胞质特性——这些染料也可能指示氢化酶体的特性。[1]
BCECF-AM 又名 2',7'-双-(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素乙酰氧基甲酯。它是一种广泛用于测量活细胞内 pH 值的荧光探针。该化合物可透过细胞膜，经酯酶水解后滞留在细胞内。BCECF 具有 pH 依赖性荧光，可用于比率式 pH 值测量。该化合物常用于细胞生理学、细胞凋亡、药物转运和 pH 值调节的研究。本品仅供研究使用。 |
| 分子式 |
C42H40O21
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|---|---|
| 分子量 |
880.754400000001
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| 精确质量 |
880.206
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| CAS号 |
117464-70-7
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| PubChem CID |
53229972
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| 外观&性状 |
Orange to red solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
939.2±65.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
368.9±34.3 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±0.3 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.602
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| LogP |
0.9
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| tPSA |
264.39
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
21
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| 可旋转键数目(RBC) |
27
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| 重原子数目 |
63
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| 分子复杂度/Complexity |
1610
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC(=O)OCOC1=CC2=C(C=C1CCC(=O)OCOC(=O)C)C3(C4=C(C=C(C=C4)C(=O)OCOC(=O)C)C(=O)O3)C5=C(O2)C=C(C(=C5)CCC(=O)OCOC(=O)C)OCOC(=O)C
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| InChi Key |
NTECHUXHORNEGZ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C42H40O21/c1-22(43)52-17-57-34-15-36-32(13-27(34)7-10-38(48)59-19-54-24(3)45)42(31-9-6-29(12-30(31)41(51)63-42)40(50)61-21-56-26(5)47)33-14-28(8-11-39(49)60-20-55-25(4)46)35(16-37(33)62-36)58-18-53-23(2)44/h6,9,12-16H,7-8,10-11,17-21H2,1-5H3
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| 化学名 |
acetyloxymethyl 3',6'-bis(acetyloxymethoxy)-2',7'-bis[3-(acetyloxymethoxy)-3-oxopropyl]-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-5-carboxylate
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| 别名 |
BCECF-acetoxymethyl; MFCD00036969; acetyloxymethyl 3',6'-bis(acetyloxymethoxy)-2',7'-bis[3-(acetyloxymethoxy)-3-oxopropyl]-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-5-carboxylate; Spiro[isobenzofuran-1(3H),9'-[9H]xanthene]-2',7'-dipropanoic acid, 3',6'-bis(acetyloxy)-5(or 6)-[[(acetyloxy)methoxy]carbonyl]-3-oxo-, 2',7'-bis[(acetyloxy)methyl] ester; ...; BCECF/AM - CAS 117464-70-7;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。 (2). 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.1354 mL | 5.6770 mL | 11.3540 mL | |
| 5 mM | 0.2271 mL | 1.1354 mL | 2.2708 mL | |
| 10 mM | 0.1135 mL | 0.5677 mL | 1.1354 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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