BCECF-AM

Fluorescent indicator/dye for intracellular pH.

完全处理的细胞显示出具有电子致密沉积物的氢化小体，其聚集程度各不相同。在某些情况下，可以在氢化酶体内部观察到染色。显微镜下还可以看到，K+/H+离子载体黑曲霉素不会抑制BCECF-AM的氢质体负载。
pH敏感荧光染料用于测量细胞质pH值。
1.制备2至20mM BCECF-AM在DMSO中的储备溶液
2.在缓冲溶液（如HHBS或PBS）中制备5-50μM BCECF-AM染料负载溶液
3.向细胞板中加入1000μL/孔（6孔板）、100μL/孔（96孔板）或25μL/井（384孔板）BCECF-AM染料负载溶液
4.将染料装载板在细胞培养箱中孵育30-60分钟
5.清洗染料加载溶液，并用缓冲液替换
6.通过监测Ex/Em=490/535nm或430/535nm的荧光进行pH测定，以进行比率测量。

ET-1对Na+/H+交换的影响[2]
使用标准氨脉冲技术测量NHE活性（图2A）。负载BCECF的PASMC以1 mL/min的速率用溶液1灌注，溶液1含有（单位为mmol/L）：130 NaCl、5 KCl、1MgCl2、1.5 CaCl2、10葡萄糖和20 HEPES，在37°C下用NaOH将pH值调节至7.4。在细胞短暂暴露于NH4Cl（铵脉冲）之前，使用NaOH在pH 7.4的条件下用溶液2灌注3分钟，测量基线pHi 2分钟。溶液2含有（单位为mmol/L）：110 NaCl、20 NH4Cl、5 KCl、1MgCl2、1.5 CaCl2、10葡萄糖、20 HEPES。铵脉冲由于NH3的流入和细胞内H+的缓冲而引起碱化（图2A）。在没有细胞外Na+的情况下，使用含有（以mmol/L计）130氯化胆碱、5 KCl、1MgCl2、1.5 CaCl2、10葡萄糖和20 HEPES的无Na+和NH4+溶液在pH 7.4下用KOH冲洗NH4Cl 10分钟，由于NH3的快速扩散和冲洗，会导致酸化。然后将外部溶液切换回含Na+的溶液1 10分钟。重新添加细胞外Na+可以激活Na+/H+交换，并从酸化恢复到基础水平。Na+依赖性从细胞内酸化（pH值变化超过2分钟）中恢复的速率与NHE活性相对应。

细胞内pH值测量[2]
将PASMC放置在用HBSS灌注的层流细胞室中，pH值调节至7.4。在37°C、20%O2-5%CO2气氛下，用pH敏感荧光染料2′，7′-双（羧乙基）-5（6）-羧基荧光素（BCECF-AM）的膜渗透剂（乙酰氧基甲酯）形式孵育细胞60分钟，测量pHi。然后在37°C下用HBSS洗涤细胞15分钟，以去除细胞外染料，并使细胞溶质染料完全脱酯。BCECF荧光的定量测量在工作站 上进行，该工作站由带有荧光附件的Nikon TSE 100 Ellipse倒置显微镜组成。来自氙弧灯的光束在490和440 nm处被干涉滤光片过滤，并通过20倍荧光物镜 聚焦到受检的PASMCS上。从细胞发出的530nm的光通过物镜返回，并被成像相机检测到。电子快门（萨特仪器公司）用于尽量减少染料的光漂白。使用InCyte软件 执行协议并在线收集数据。每次实验后，通过原位校准估算pHi。用含有（以mmol/L计）：105 KCl、1 MgCl2、1.5 CaCl2、10葡萄糖、20 HEPES Tris和0.01黑曲霉素的溶液灌注细胞，使pHi与外部pH平衡。用KOH将pHi从6.5调节到7.5时，根据测量的荧光进行两点校准。细胞内H+离子浓度（[H+]i）由pHi确定，公式为：pHi=−log（[H+]i）。

[1]. Analysis of the uptake of the fluorescent marker 2',7'-bis-(2-carboxyethyl)-5(and-6)-carboxyfluorescein (BCECF) by hydrogenosomes in Trichomonas vaginalis. Eur J Cell Biol. 1998 Jun;76(2):139-45.

[2]. Endothelin-1 Augments Na+/H+ Exchange Activity in Murine Pulmonary Arterial Smooth Muscle Cells via Rho Kinase. PLoS One. 2012; 7(9): e46303.

The fluorescent dye 2',7'-bis-(2-carboxyethyl)-5(and-6)-carboxyfluorescein (BCECF) has been widely used as an indicator of cytosolic pH. Here we report that BCECF localizes to hydrogenosomes (hydrogen-generating organelles found in several phylogenetically separate groups of anaerobic protists) in Trichomonas vaginalis, where it was observable by fluorescence microscopy. Its cellular location was confirmed by treatment of BCECF-loaded cells with diaminobenzidine and hydrogen peroxide together with UV illumination. This produced an osmiophilic precipitate in the matrix of hydrogenosomes, observable by electron microscopy. Use of a short (7.5 min) loading period, loading on ice, use of concentrations of BCECF (acetoxymethyl ester) down to 10 nM, and inclusion of the anion channel blockers probenicid or sulfinpyrazone, or the K+/H+ ionophore nigericin in the loading buffer all failed to prevent hydrogenosomal accumulation of BCECF. This uptake was best observed when intact cells were loaded with the ester form of BCECF, but could also be seen using free BCECF following either incubation with ruptured cells or electroporation of intact cells. Hydrogenosomal BCECF loading was also obtained with washed cell lysates, without cytoplasm or metabolic substrates. We tested a range of other fluorogenic dyes designed for cytosolic labeling, and found that the calcium indicator fura-2 (acetoxymethyl ester) and the cell viability marker fluorescein diacetate also labeled hydrogenosomes. The results illustrate a novel use for BCECF as a fluorescent marker for hydrogenosomes (the first such marker), but present a warning against the indiscriminate use of fluorogenic ester dyes to measure properties of the cytosol in hydrogenosome-containing organisms - the dyes may also be indicating the properties of the hydrogenosome.[1]

C42H40O21

880.754400000001

880.206

117464-70-7

53229972

Orange to red solid powder

1.5±0.1 g/cm3

939.2±65.0 °C at 760 mmHg

368.9±34.3 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.602

0.9

264.39

0

21

27

63

1610

0

NTECHUXHORNEGZ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C42H40O21/c1-22(43)52-17-57-34-15-36-32(13-27(34)7-10-38(48)59-19-54-24(3)45)42(31-9-6-29(12-30(31)41(51)63-42)40(50)61-21-56-26(5)47)33-14-28(8-11-39(49)60-20-55-25(4)46)35(16-37(33)62-36)58-18-53-23(2)44/h6,9,12-16H,7-8,10-11,17-21H2,1-5H3

acetyloxymethyl 3',6'-bis(acetyloxymethoxy)-2',7'-bis[3-(acetyloxymethoxy)-3-oxopropyl]-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-5-carboxylate

BCECF-acetoxymethyl; MFCD00036969; acetyloxymethyl 3',6'-bis(acetyloxymethoxy)-2',7'-bis[3-(acetyloxymethoxy)-3-oxopropyl]-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-5-carboxylate; Spiro[isobenzofuran-1(3H),9'-[9H]xanthene]-2',7'-dipropanoic acid, 3',6'-bis(acetyloxy)-5(or 6)-[[(acetyloxy)methoxy]carbonyl]-3-oxo-, 2',7'-bis[(acetyloxy)methyl] ester; ...; BCECF/AM - CAS 117464-70-7;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。