ROCK2 (IC50 = 105 nM); ROCK1 (IC50 = 24 μM)
Belumosudil mesylate targets ROCK2, a serine/threonine kinase involved in various cellular functions, including cell migration, proliferation, and fibrosis. It inhibits ROCK2 with an IC50 of 105 nM and shows over 200-fold selectivity over ROCK1 (IC50 = 24 µM). This selectivity is crucial for its therapeutic effects and safety profile.

Belumosudil (SLx-2119; 40 µM) 可显著降低 PASMC 中 Tsp-1 和 CTGF mRNA 的水平。与其它芯片相比，用 belumosudil 处理的 HMVEC 的 aRNA 进行微阵列杂交后，背景信号高出五倍[1]。
Belumosudil (KD025, SLx-2119) 选择性：放射性酶活性测定证实，SLx-2119 选择性抑制人 ROCK2 的活性 (IC50 = 105 nM)，而在此无细胞体系中对人 ROCK1 的影响极小 (IC50 = 24 µM)。本研究旨在比较阿托伐他汀与新开发的ROCK2抑制剂贝鲁莫舒地尔（Belumosudil，KD025，SLx-2119）在正常人内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞原代培养物中的基因表达谱。细胞分别用上述化合物处理24小时后，提取总RNA，并使用Illumina芯片获得全基因组基因表达谱。由于已知他汀类药物对肌动蛋白细胞骨架和结缔组织生长因子（一种参与组织纤维化的重要生长因子）有影响，因此本研究还检测了SLx-2119和阿托伐他汀对肌动蛋白细胞骨架和结缔组织生长因子mRNA的影响。这些平滑肌细胞是从放射性纤维化人肠道活检组织中分离出来的，具有纤维化表型。尽管SLx-2119和阿托伐他汀影响了属于同一生物学过程的基因表达，但单个基因大多不同，这与协同或相加特性相符。SLx-2119和阿托伐他汀均能降低结缔组织生长因子mRNA水平，并重塑纤维化来源的平滑肌细胞中的肌动蛋白细胞骨架，表明这两种化合物均具有抗纤维化特性。这些结果为进一步研究联合治疗的潜在疗效奠定了基础[1]。
体外实验表明，贝鲁莫舒地尔甲磺酸盐是一种强效且选择性的ROCK2抑制剂，IC50值为105 nM，具有抗纤维化特性。其对ROCK2相对于ROCK1的高选择性（IC50 = 24 µM）是其关键特征，使其成为研究ROCK2在各种疾病模型中具体作用的宝贵工具。

贝鲁莫舒地尔（KD-025；100、200 或 300 mg/kg，腹腔注射）可剂量依赖性地减少短暂性大脑中动脉阻塞后的梗死体积。贝鲁莫舒地尔在老年、糖尿病或雌性小鼠中的疗效与在健康成年雄性小鼠中的疗效相当[2]。

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贝鲁莫舒地尔（KD025，SLx-2119） 可剂量依赖性地减少短暂性大脑中动脉闭塞后的梗死体积。治疗窗口至少为卒中发作后 3 小时，疗效至少持续 4 周。KD025 在老年、糖尿病或雌性小鼠中的疗效至少与正常成年雄性小鼠相当。与阿托伐他汀同时治疗是安全的，但无叠加或协同作用。KD025 在永久性缺血模型中也是安全的，尽管疗效有所降低。作为一种保护机制，KD025 改善了远端大脑中动脉闭塞模型中的皮质灌注，提示侧支循环增强。与非选择性 ROCK 抑制剂不同，KD025 不会引起显著的低血压，而低血压是急性缺血性卒中中常见的剂量限制性副作用。结论：综上所述，这些数据表明 KD025 在小鼠急性局灶性脑缺血模型中有效且安全，提示 ROCK2 是急性缺血性卒中的相关亚型。数据表明，选择性 ROCK2 抑制剂具有良好的安全性，有利于临床转化[2]。
在体内，甲磺酸贝鲁莫舒地尔用于慢性移植物抗宿主病 (cGVHD) 的研究。作为一种口服活性化合物，它可用于动物模型，以研究其对纤维化和炎症过程的影响。其在临床前模型中的疗效支持将其作为 cGVHD 和其他纤维化疾病的治疗药物进行研究。

放射性截短酶 ROCK1 和 ROCK2 活性测定[1]
采用无细胞酶活性测定法测定 SLx-2119 对 ROCK1 和 ROCK2 的选择性抑制作用。反应在非结合表面微孔板上进行。使用 4 mU 的人源 ROCK1 和 ROCK2 磷酸化 30 µM 的合成 ROCK 肽底物 S6 Long（序列：KEAKEKRQEQIAKRRRLSSLRASTSKSGGSQK），该底物由 American Peptide 公司制备，并添加了 10 µM ATP，其中含有 33P-ATP，反应体系包含 10 mM Mg2+、50 mM Tris（pH 7.5）、0.1 mM EGTA 和 1 mM DTT，反应在室温下进行。一个单位的激酶活性是指每分钟催化 1 nmol 磷酸基团转移至肽链所需的激酶量。反应进行45分钟后，加入3%磷酸终止反应，使其最终浓度达到1%。反应产物收集于磷酸纤维素过滤微孔板上，并使用真空歧管以75 mM磷酸和甲醇洗涤。磷酸化活性在Perkin-Elmer MicroBeta 1450上测定。

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重组ROCK1和ROCK2活性测定[2]
化合物稀释和反应在96孔聚苯乙烯低吸附板中进行。过滤在含有亲水性磷酸纤维素阳离子交换膜的96孔滤板中进行。重组ROCK1和ROCK2的酶活性在50 μL反应混合物中进行放射性测定，该反应混合物包含测定缓冲液（50 mmol/L Tris，pH 7.5，0.1 mmol/L乙二醇四乙酸，10 mmol/L乙酸镁和1 mmol/L二硫苏糖醇）。将长链S6肽（KEAKEKRQEQIAKRRRLSSLRASTSKSGGSQK，30 μmol/L）、ROCK（每反应4 mU）、ATP（10 μmol/L，1 μCi [γ-33P]ATP）和待测化合物用二甲基亚砜稀释至终浓度为1%。反应在室温下孵育45分钟，并用25 μL 3%磷酸终止反应。使用Millipore Multiscreen®真空歧管系统，通过P30磷酸纤维素滤板过滤终止反应后的反应液，将磷酸化的长链S6肽与未反应的[γ-33P]ATP分离。每个滤膜先用75 μL 75 mmol/L磷酸洗涤三次，再用30 μL 100%甲醇洗涤一次。将滤板干燥后，向每个孔中加入30 μL OptiPhase“SuperMix”闪烁液。使用I450 MicroBeta闪烁计数器定量测定³³Phosphorous，并通过扣除背景样品的放射性进行校正。数据分析结果以抑制率表示，计算公式为((U − B)/(C − B)) × 100，其中U为未知值，B为星形孢菌素背景孔的平均值，C为对照孔的平均值。使用GraphPad Prism软件，采用S型剂量反应（可变斜率）方程进行曲线拟合，生成IC₅₀值。 Ki 值由公式 Ki = IC50/(1 + [S]/Km) 计算得出，其中 [S] 和 Km 分别为 ATP 浓度和 ATP 的 Km 值。
贝鲁莫舒地尔甲磺酸盐的体外激酶活性测定旨在评估其抑制 ROCK2 酶活性的能力。该测定使用纯化的 ROCK2 激酶和合适的肽底物进行。测定化合物抑制底物磷酸化的能力，并计算 IC50 值。选择性通过测试化合物对包括 ROCK1 在内的一系列其他激酶的抑制作用来确定。

ROCK2抑制剂SLx-2119溶于DMSO，配制成20 mM的储备液。[1] 将传代7次的人类微血管内皮细胞（PASMC和NHDF）以及传代4次的N-SMC和RE-SMC以1×10⁶个细胞/皿的密度接种于含3 ml培养基的6 cm培养皿中。2天后（细胞汇合度达90%），将细胞置于含以下成分的3 ml培养基中孵育24小时：载体（10 µl无菌PBS）、10 µM阿托伐他汀、10 µM阿托伐他汀与500 µM甲羟戊酸的组合、10 µM SLx-2119或40 µM SLx-2119。重复进行三次独立实验，每个处理组设置3个培养皿。 [1] RNA 分离[1] 将 HMVEC、PASMC 和 NHDF 分别用载体、SLx-2119、阿托伐他汀或阿托伐他汀联合甲羟戊酸处理 24 小时后，使用 Ultraspec RNA 分离试剂盒，按照制造商的说明分离总 RNA。取 2 µg RNA 用于微阵列分析（包括质量控制分析），另取 2 µg 用于实时 PCR。[1] 将 N-SMC 和 RE-SMC 分别用载体、SLx-2119、阿托伐他汀或阿托伐他汀联合甲羟戊酸处理 24 小时后，按照上述方法分离总 RNA。该 RNA 用于实时 PCR。
体外细胞研究采用与纤维化和炎症相关的细胞系进行。用贝鲁莫舒地尔甲磺酸盐处理细胞，以评估其对 ROCK2 介导的信号通路的影响。这包括测量下游靶点的磷酸化、评估细胞迁移和增殖以及评估纤维化标志物的表达。

动物和药物处理[2]
所有实验均使用青年成年小鼠（C57BL/6，2-3月龄，雄性22-30克，雌性16-23克）、老年小鼠（C57BL/6，12月龄，33-52克）或2型糖尿病小鼠（db/db，B6.BKS(D)-Lepr db/J，2-3月龄，雄性，33-50克）。仅一只小鼠因技术故障（分配至载体组的db/db小鼠在进行线栓大脑中动脉闭塞[fMCAO]过程中发生出血）而被排除。KD025（原名SLx-2119）由Kadmon公司（纽约州纽约市）友情提供。每12小时通过口胃管灌注给予赋形剂（0.4%甲基纤维素）或KD025（100、200或300 mg/kg）。给药方案的选择基于小鼠口服给药后的药代动力学特征（见下文）。阿托伐他汀（4 mg/mL）溶解于含45% 3-羟丙基-β-环糊精和10%乙醇的磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中，并以20 mg/kg/天的剂量，每日一次腹腔注射，持续2周，如前所述。

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药代动力学研究[2]
我们测定了雄性小鼠血浆和脑组织中KD025的浓度。动物每天两次通过口胃管灌注给予100或200 mg/kg的KD025，共五次。在末次给药后不同时间点采集血液和脑组织。每个时间点处死一组不同的实验小鼠（每组 n = 5）。通过颈静脉采集全血至 K3 乙二胺四乙酸 (EDTA) 抗凝管中，并在 4°C 下以 1000 g 离心 3 分钟。采血后立即通过左心室灌注生理盐水以清除血管内血液，并取出脑组织。所有样本均保存于 -80°C 直至分析。采用高分辨率质谱法测定血浆和组织中 KD025 的浓度。使用 PKSolver.22 计算药代动力学参数。进行非房室模型分析。采用最佳拟合法计算浓度-时间曲线末端对数线性部分的斜率 (λz)。此外，还对零级或一级动力学模型进行了单室分析。

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溶于0.4%甲基纤维素；300 mg/kg；灌胃给药
2型糖尿病小鼠
在慢性移植物抗宿主病（cGVHD）模型中进行体内动物实验。动物经口给予不同剂量的化合物。通过临床评分、受累组织（例如皮肤、肝脏、肺）的组织病理学以及炎症和纤维化标志物的测量来评估疾病严重程度。

吸收、分布和排泄
口服后，贝鲁莫舒地尔的平均生物利用度为 64%，达峰时间 (Tmax) 中位数为 1.26 至 2.53 小时。与空腹给药相比，与高脂高热量餐同服可使贝鲁莫舒地尔的血浆峰浓度 (Cmax) 和曲线下面积 (AUC) 分别增加 2.2 倍和 2 倍。贝鲁莫舒地尔主要经粪便排泄。在健康受试者中，口服放射性标记的贝鲁莫舒地尔后，约 85% 的放射性物质从粪便中回收，其中 30% 为未代谢的母体药物，不到 5% 从尿液中回收。健康受试者单次口服贝鲁莫舒地尔后的平均几何分布容积为 184 L。贝鲁莫舒地尔的平均清除率为 9.83 L/h。

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代谢/代谢物
体外实验表明，贝鲁莫舒地尔主要通过 CYP3A4 代谢，其次是 CYP2C8、CYP2D6 和 UGT1A9。贝鲁莫舒地尔代谢的具体代谢物尚不明确。

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生物半衰期
口服贝鲁莫舒地尔后的平均消除半衰期为 19 小时。

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药代动力学特征[2]
为了指导剂量和给药间隔的选择，我们测定了 KD025 在小鼠体内的药代动力学特征。我们连续两天通过口服导管每日两次给药，并在预定的时间点测量血液和脑组织中的药物浓度，从最后一次给药前48小时（时间0；图2）开始。我们采用非房室模型分析以及零级和一级动力学吸收模型进行单室模型分析（表2）。血浆药物浓度更符合一级吸收模型（R² = 0.98，赤池信息准则[AIC] = 8.31），而脑组织药物浓度更符合零级吸收模型（R² = 0.98，AIC = 6.52）。血浆和脑组织中的药物峰浓度均在给药后2小时内达到，且比体外IC50值高近10倍。根据脑/血浆浓度-时间曲线下面积（AUC）比值，脑暴露量约为血浆暴露量的5%。脑组织中的半衰期短于血浆中的半衰期（2 小时 vs. 5 小时），这可能是由于脑组织中消除常数、分布容积和清除率较高所致。观察到的脑组织和血浆中的平均停留时间分别为 4 小时和 7 小时，表明该化合物在本研究选择的给药间隔内未发生体内蓄积（血浆和脑组织中的蓄积因子 [R] 分别为 1.15 和 1.02）。尽管如此，200 mg/kg 的剂量水平仍能维持血浆和组织中的药物浓度至少 12 小时。总之，这些数据表明，所选剂量水平和每日两次给药方案适用于在缺血模型中测试该药物的疗效和安全性。
甲磺酸贝鲁莫舒地尔的分子式为 C26H28N6O3•CH4O3S，分子量为 580.66 g/mol。它可溶于 DMSO。该药物可口服给药，且具有口服生物利用度。用于体内研究时，通常将其配制成合适的载体。应将其以粉末形式储存在-20°C下，避光防潮。

肝毒性
在贝鲁莫舒地尔治疗难治性慢性移植物抗宿主病 (GvHD) 患者的开放标签上市前临床试验中，高达 7% 的受试者出现血清转氨酶升高。这些升高通常较轻且短暂，仅有 1% 至 2% 的患者升高超过正常值上限 (ULN) 的 5 倍。这些升高有时会导致提前终止治疗，但在大多数情况下，无需调整剂量即可自行恢复正常。上市前研究中未观察到与贝鲁莫舒地尔相关的具有临床意义的肝损伤。自贝鲁莫舒地尔获批并广泛使用以来，尚未有与其使用相关的肝毒性报告发表。概率评分：E（不太可能引起具有临床意义的肝损伤）。蛋白质结合：Berumosudil 似乎能与血浆中的多种蛋白质广泛结合——体外研究显示，其与血清白蛋白的结合率为 99.9%，与 α1-酸性糖蛋白的结合率为 98.6%。

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与他汀类药物联合使用的安全性[2]
他汀类药物通过减少胆固醇代谢中异戊二烯中间体的合成来抑制 ROCK 信号通路，而异戊二烯中间体是 Rho 激活所必需的。这被认为至少部分解释了他汀类药物的多效性。因此，Belumosudil (KD025, SLx-2119) 可能与他汀类药物产生叠加或协同作用，这可能构成潜在的安全风险。我们在预先用阿托伐他汀（20 mg/kg/天）治疗 2 周的小鼠中进行了测试。KD025 在预先用阿托伐他汀治疗的小鼠中是安全的，但未显示出叠加或协同作用（图 8A）。

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永久性缺血的安全性[2]
尽管大多数脑动脉闭塞最终会再通，但无法预测闭塞是否会在超急性期持续存在。如果药物在未发生再灌注的情况下不安全，这将阻碍其在超急性期现场给药，进一步延迟治疗开始，直至影像学证实再通。因此，我们在永久性fMCAO模型中测试了Belumosudil（KD025，SLx-2119）的安全性。鉴于该模型中死亡率随时间推移较高，我们在缺血后24小时评估了梗死体积，以尽量减少额外损失。正如预期的那样，永久性模型（图8B）的梗死体积大于短暂性fMCAO模型（见图3、5）。KD025是安全的，但在动脉持续闭塞的情况下失去了疗效。

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其他安全性终点[2]
所有试验均记录到出血性转化、体重减轻和死亡。除贝鲁莫舒地尔（KD025，SLx-2119）与阿托伐他汀联合用药时体重减轻增加（表3；图S1）外，贝鲁莫舒地尔（KD025，SLx-2119）在任何试验组中均未显著改变这些安全性终点。由于我们没有假手术组，因此尚不清楚这种体重减轻是否与缺血直接相关。
甲磺酸贝鲁莫舒地尔的毒理学数据来源于临床前和临床研究。作为一种选择性激酶抑制剂，它目前用于研究，并正在开发为治疗药物。其在人体中的安全性已通过临床试验确定。常见副作用可能包括疲劳、胃肠道问题和潜在的肝毒性，这些都是激酶抑制剂的典型副作用。

[1]. Blood Coagul Fibrinolysis . 2008 Oct;19(7):709-18.

[2]. Ann Clin Transl Neurol . 2014 Jan 1;1(1):2-14.

甲磺酸贝鲁莫舒地尔是一种小分子药物，已完成最多IV期临床试验（涵盖所有适应症），并于2021年首次获批用于治疗移植物抗宿主病（GVHD），另有一项适应症正在研究中。贝鲁莫舒地尔用于治疗慢性GVHD，目前也在研究其治疗肺动脉高压的潜力。它是一种Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶（ROCK）抑制剂，对ROCK2的选择性显著高于ROCK1（IC50值分别为100 nM和3 μM）。在GVHD的治疗中，同种异体造血干细胞移植（HSCT）后，供体T细胞开始攻击受体组织，而贝鲁莫舒地尔通过调节Th17细胞和调节性T细胞之间的平衡来帮助解决免疫失调，从而抑制有时会致命的炎症级联反应。贝鲁莫舒地尔（Berumoshudil）于2021年7月首次获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准，商品名为Rezurock，用于治疗至少接受过两种系统性治疗失败的慢性移植物抗宿主病（GVHD）患者。2022年7月，贝鲁莫舒地尔获得加拿大卫生部批准，商品名为RHOLISTIQ，用于治疗12岁及以上成人和儿童的同类疾病。贝鲁莫舒地尔是一种口服生物利用度高的Rho相关卷曲螺旋激酶2（ROCK2；ROCK-II）抑制剂，具有潜在的免疫调节活性。口服后，贝鲁莫舒地尔与ROCK2的丝氨酸/苏氨酸激酶活性结合并抑制其活性。这抑制了ROCK2介导的信号转导通路，并通过调节信号转导和转录激活因子3和5（STAT3/STAT5）的磷酸化，来调节多种促炎和抗炎免疫细胞反应。贝鲁莫舒地尔可下调促炎性Th17细胞，并增加调节性T细胞（Tregs）的数量。贝鲁莫舒地尔还能抑制ROCK2介导的纤维化过程，包括应力纤维形成、肌成纤维细胞活化和促纤维化基因的转录。ROCK2在多种疾病中表达上调，包括各种纤维化疾病、神经退行性疾病和自身免疫性疾病。贝鲁莫舒地尔似乎能抑制多种促纤维化和促炎过程，从而预防和治疗移植物抗宿主病造成的损伤。鉴于其作用机制和动物研究结果，贝鲁莫舒地尔被认为具有胚胎-胎儿毒性，孕妇服用此药可能对发育中的胎儿造成严重损害。育龄女性患者或伴侣为育龄女性的男性患者应被告知，在贝鲁莫舒地尔治疗期间以及末次给药后一周内采取有效的避孕措施。

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吸收
口服后，贝鲁莫舒地尔的平均生物利用度为64%，达峰时间（Tmax）中位数为1.26至2.53小时。与空腹给药相比，与高脂高热量餐同服可使贝鲁莫舒地尔的血浆峰浓度（Cmax）和药时曲线下面积（AUC）分别增加2.2倍和2倍。
排泄
贝鲁莫舒地尔主要经粪便排泄。健康受试者口服放射性标记的贝鲁莫舒地尔后，约85%的放射性物质从粪便中回收，其中30%为未代谢的原药，尿液中回收的放射性物质不足5%。
分布容积
健康受试者单次口服贝鲁莫舒地尔后的平均几何分布容积为184 L。
清除率
贝鲁莫舒地尔的平均清除率为9.83 L/h。
代谢/代谢物
体外研究表明，贝鲁莫舒地尔主要通过CYP3A4代谢，其次是CYP2C8、CYP2D6和UGT1A9。贝鲁莫舒地尔代谢产生的具体代谢物尚不明确。
生物半衰期
口服贝鲁莫舒地尔后的平均消除半衰期为19小时。
蛋白结合
贝鲁莫舒地尔似乎能与血浆中的多种蛋白质广泛结合——体外研究显示，其与血清白蛋白和α1-酸性糖蛋白的蛋白结合率分别为99.9%和98.6%。作用机制
慢性移植物抗宿主病 (GVHD) 是同种异体造血干细胞移植的一种危及生命的并发症，其特征是移植的供体 T 细胞将受体组织识别为异物并触发免疫反应。在移植前预处理方案（例如，包括放疗或化疗）期间，受体组织可能受损，导致下游炎症反应和炎症介质（如 TNF-α 和 IL-1）的产生。这些细胞因子可以增加受体主要组织相容性复合体 (MHC) 抗原和黏附分子的表达，从而增强成熟供体 T 细胞识别这些分子的能力。这些供体 T 细胞的激活会导致单核吞噬细胞的激活，而单核吞噬细胞的效应功能则由治疗预处理阶段损伤产生的刺激分子触发。活化的巨噬细胞和细胞毒性 T 淋巴细胞开始直接裂解靶细胞和/或诱导其凋亡，最终导致局部组织损伤和进一步的炎症反应。贝鲁莫舒地尔是一种Rho相关卷曲螺旋激酶2 (ROCK2)抑制剂，ROCK2是一种在免疫和纤维化疾病发病机制中起关键作用的蛋白质。研究表明，ROCK2抑制剂可通过调节STAT3和STAT5的磷酸化、下调促炎性Th17细胞和上调调节性T细胞来改善免疫失调。Rho激酶(ROCK)抑制剂是一类相对较新的药物，在肿瘤、神经系统疾病、纤维化和心血管疾病领域具有潜在的治疗价值。ROCK抑制剂可以调节多种细胞功能，其中一些功能与他汀类药物的多效性相似，提示可能存在叠加或协同效应。目前的研究主要集中于能够同时抑制ROCK1和ROCK2亚型的化合物。本研究旨在比较阿托伐他汀和新开发的ROCK2抑制剂SLx-2119在正常人内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞原代培养物中的基因表达谱。将细胞分别用上述化合物处理24小时后，提取总RNA，并使用Illumina微阵列技术获得全基因组基因表达谱。由于已知他汀类药物会影响肌动蛋白细胞骨架和结缔组织生长因子（一种参与组织纤维化的重要生长因子），本研究还检测了SLx-2119和阿托伐他汀对肌动蛋白细胞骨架和结缔组织生长因子mRNA的影响。这些平滑肌细胞具有纤维化表型，是从放射性纤维化的人类肠道活检组织中分离得到的。尽管SLx-2119和阿托伐他汀均影响了属于同一生物学过程的基因表达，但单个基因的表达大多存在差异，这与协同或累加效应相符。SLx-2119和阿托伐他汀均能降低结缔组织生长因子mRNA的表达，并重塑纤维化平滑肌细胞中的肌动蛋白细胞骨架，表明这两种化合物均具有抗纤维化特性。这些结果为进一步研究联合治疗的潜在疗效奠定了基础。[1]

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目的：Rho相关激酶（ROCK）是多种细胞类型中许多过程的关键调节因子，这些过程与卒中的病理生理密切相关。ROCK抑制剂已在急性缺血性或出血性卒中的实验模型中改善了预后。然而，与急性卒中相关的ROCK亚型（ROCK1或ROCK2）仍不清楚。 [2]
方法：我们对一种新型选择性ROCK2抑制剂KD025（原名SLx-2119）的药效学和药代动力学进行了表征，并在局灶性脑缺血小鼠模型中测试了其疗效和安全性。[2]
结果：KD025以剂量依赖的方式减少了短暂性大脑中动脉闭塞后的梗死体积。治疗窗口期至少为卒中发作后3小时，疗效至少持续4周。在老年、糖尿病或雌性小鼠中，KD025的疗效至少与正常成年雄性小鼠相当。与阿托伐他汀联合治疗是安全的，但未观察到叠加或协同作用。在永久性缺血模型中，KD025也是安全的，尽管疗效有所降低。作为一种保护机制，KD025改善了远端大脑中动脉闭塞模型中的皮质灌注，提示侧支循环增强。与非选择性ROCK抑制剂不同，KD025不会引起显著的低血压，而低血压是急性缺血性卒中常见的剂量限制性副作用。[2] 结论：总之，这些数据表明KD025在急性局灶性脑缺血小鼠模型中有效且安全，提示ROCK2是急性缺血性卒中的一个相关亚型。这些数据表明，选择性ROCK2抑制剂具有良好的安全性，有利于临床转化。
甲磺酸贝鲁莫舒地尔也称为甲磺酸KD025，是一种具有抗纤维化特性的选择性ROCK2抑制剂。它被用于慢性移植物抗宿主病（cGVHD）和其他纤维化和炎症性疾病的研究。它是研究ROCK2信号通路的重要工具。

C27H28N6O5S

548.6134

548.184189

C, 59.11; H, 5.14; N, 15.32; O, 14.58; S, 5.84

2109704-99-4

Belumosudil;911417-87-3

146681181

Light yellow to yellow solid powder

168 Ų

4

9

7

39

770

0

CC(C)NC(=O)COC1=CC=CC(=C1)C2=NC3=CC=CC=C3C(=N2)NC4=CC5=C(C=C4)NN=C5.CS(=O)(=O)O

ILQJXEIRBCHLOM-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C26H24N6O2.CH4O3S/c1-16(2)28-24(33)15-34-20-7-5-6-17(13-20)25-30-23-9-4-3-8-21(23)26(31-25)29-19-10-11-22-18(12-19)14-27-32-22;1-5(2,3)4/h3-14,16H,15H2,1-2H3,(H,27,32)(H,28,33)(H,29,30,31);1H3,(H,2,3,4)

2-(3-(4-(1H-indazol-5-ylamino)quinazolin-2-yl)phenoxy)-N-(propan-2-yl)acetamide

Belumosudil mesylate; KD-025; Belumosudil mesylate (KD025 mesylate); Belumosudil (mesylate); Rezurock; Belumosudil/KD-025; CHEMBL4802130;KD 025; KD025; WHO-11343; WHO 11343; WHO11343; SLx2119; SLx-2119; SLx 2119

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~12.5 mg/mL (~22.8 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。