Benzamil

别名: Benzamil; 2898-76-2; Benzylamiloride; 3,5-Diamino-N-(N-benzylcarbamimidoyl)-6-chloropyrazine-2-carboxamide; N-(N-Benzylamidino)-3,5-diamino-6-chloropyrazine carboxamide; UNII-04659UUJ94; CHEBI:34558; 3,5-diamino-N-(N'-benzylcarbamimidoyl)-6-chloropyrazine-2-carboxamide;
目录号: V37989 纯度: ≥98%
Benzamil 是一种阿米洛利类似物,作为 Na+/Ca2+ 交换器 (NCX) 抑制剂 (IC50~100 nM),具有治疗囊性纤维化的潜力。
Benzamil CAS号: 2898-76-2
产品类别: Sodium Channel
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
Other Sizes

Other Forms of Benzamil:

  • 苯扎明盐酸盐
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纯度/质量控制文件

纯度: ≥98%

产品描述
Benzamil 是一种阿米洛利类似物,作为 Na+/Ca2+ 交换器 (NCX) 抑制剂 (IC50~100 nM),具有治疗囊性纤维化的潜力。 Benzamil 也是一种非选择性 Deg/上皮钠通道 (ENaC) 阻滞剂,并能增强肌源性血管收缩。 Benzamil 抑制 TRPP3 介导的 Ca2+ 激活电流,IC50 为 1.1 μM。
生物活性&实验参考方法
靶点
Na+/Ca2+ exchanger (NCX) (IC50 = 100 nM)
体外研究 (In Vitro)
Benzamil (Benzylamiloride) 阻断神经元和异源细胞中 Ca2+ 激活的小电导 K2+ 通道 [4]。
体内研究 (In Vivo)
用Benzamil(苯甲米洛利)(0.7 mg/kg/天;皮下注射)治疗的易发生中风的自发性高血压大鼠 (SHRSP) 平均存活至 16.1 周龄[5]。
酶活实验
小电导Ca2+激活的K+(SK)通道在新皮层和海马结构的锥体神经元的胞体和树突中表达,参与膜兴奋性和突触信号的局部调节。SK通道通过与Ca2+通道的相互作用,调节树突中反向传播动作电位引发的Ca2+内流。抑制SK通道会影响Ca2+瞬变的幅度和持续时间,但Ca2+清除机制的作用及其与SK通道活性的联系尚未确定。在这里,我们报告了Na+/Ca2+交换剂(NCX)抑制剂Benzamil对树突Ca2+信号调节中Ca2+挤出和SK通道的影响。Benzamil增加了海马锥体神经元反向传播动作电位引发的树突Ca2+瞬变的持续时间和幅度。这一数据与之前对SK通道阻断剂的研究一致,表明Benzamil除了抑制Na+/Ca2+交换剂外,还抑制SK通道。在这里,我们表明,Benzamil确实抑制了神经元SK介导的IAHP电流和异源表达的SK通道介导的电流。重组SK通道的抑制作用在不同的K+浓度梯度下可见,在负电压下更强。Benzamil对SK通道的抑制与之前关于SK通道在神经元中调节Ca2+信号的发现一致。我们还表明,Benzamil抑制神经元电压门控钙电流。考虑到该化合物在类似浓度范围内靶向的离子通道和交换剂的光谱,这些结果促使人们仔细重新评估Benzamil对天然系统中Ca2+瞬变的影响。[4]
在这项研究中,研究人员发现阿米洛利及其类似物以不同的亲和力抑制TRPP3通道活性。放射性标记的(45)Ca2+摄取表明,TRPP3介导的Ca2+转运受到阿米洛利、苯甲酰胺、苯甲酰亚胺和5-(N-乙基-N-异丙基)阿米洛利(EIPA)的抑制。两个微电极电压钳实验表明,TRPP3介导的Ca2+激活电流被阿米洛利类似物显著抑制,按照苯甲酰胺>BenzamilEIPA>阿米洛利的效力顺序排列,IC50值分别为0.14、1.1、10.5和143微M。抑制效力与抑制剂的大小呈正相关。使用细胞附着膜片钳,我们发现阿米洛利类似物降低了开放概率和平均开放时间,但对单通道电导没有影响。在先前报道的抑制剂四戊基铵存在下,苯甲酰胺的抑制研究表明,阿米洛利和有机阳离子抑制剂竞争结合TRPP3上的同一位点。TRPP3可能有助于先前报道的阿米洛利敏感的体内阳离子转运[3]。
细胞实验
Benzamil是一种ENaC抑制剂,也可阻断Na+/Ca2+交换(NCX),可增强肌源性血管收缩Benzamil和低[Na+]o引起血管收缩;然而,这些反应被地尔硫卓减弱,并与显著的膜去极化有关,这表明除NCX减少外,还有其他机制的作用。Na+补充诱导了在低[Na+]o下预平衡的加压传入小动脉的血管舒张,这是NCX的标志,这种反应减少了10微摩尔/升Benzamil。然而,Benzamil加ouabain的组合消除了扩张,表明电致Na+-K+-ATP酶参与其中。总之,这些发现驳斥了ENaC在大鼠传入小动脉中起重要作用的前提,而是表明减少[Na+](o)和/或Na+进入与膜去极化有关。目前,Na+的这些意外和矛盾效应背后的机制尚未得到解决[2]。
动物实验
Kidneys were allowed to equilibrate for at least 1 h following the establishment of in vitro perfusion. Ibuprofen (10 μmol/l) was added to eliminate the effects of endogenous prostaglandins. Basal renal perfusion pressure was held at 80 mmHg during the equilibration period. In some experiments, myogenic responses were evoked by raising renal arterial pressure and holding pressures at each step for at least 1 min. In these studies, stepped responses were assessed before and after the administration of amiloride or Benzamil. In other experiments, perfusion pressure was maintained at a constant level (60, 80, or 140 mmHg) to assess vasoconstrictor and/or vasodilatory responses. In the studies assessing the impact of low [Na+]o media, the media Na+ concentration ([Na+]) was lowered from 140 to 100 mmol/l by the isosmotic substitution of choline chloride for NaCl. Benzamil, amiloride, and ouabain were obtained commercially. Fresh stock solutions of Benzamil and amiloride were prepared in dimethyl sulfoxide. Ouabain (3 mmol/l in DMEM) was prepared fresh for each experiment. Phentolamine and propranolol (10 μmol/l; Sigma) were added during the ouabain experiments to avoid any effects mediated by neurotransmitter release.[2]
参考文献

[1]. Characterization of a Na(+)-Ca(2+) exchanger in podocytes. Nephrol Dial Transplant. 2002 Oct;17(10):1742-50.

[2]. Effects of amiloride, benzamil, and alterations in extracellular Na+ on the rat afferent arteriole and its myogenic response. Am J Physiol Renal Physiol. 2008 Jul;295(1):F272-82.

[3]. Inhibition of TRPP3 channel by amiloride and analogs. Mol Pharmacol. 2007 Dec;72(6):1576-85.

[4]. Benzamil inhibits neuronal and heterologously expressed small conductance Ca2+-activated K+channels. Neuropharmacology. 2019 Nov 1;158:107738.

[5]. Epithelial sodium channel inhibition in cardiovascular disease. A potential role for amiloride. Am J Hypertens. 2007 Jan;20(1):109-17.

其他信息
Benzamil is a member of pyrazines and a member of guanidines.
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C13H14N7OCL
分子量
319.74956
精确质量
355.072
CAS号
2898-76-2
相关CAS号
Benzamil hydrochloride;161804-20-2
PubChem CID
108107
外观&性状
Typically exists as solid at room temperature
LogP
3.594
tPSA
145.3
氢键供体(HBD)数目
4
氢键受体(HBA)数目
6
可旋转键数目(RBC)
4
重原子数目
22
分子复杂度/Complexity
413
定义原子立体中心数目
0
SMILES
N=C(NC(C1=NC(Cl)=C(N=C1N)N)=O)NCC2=CC=CC=C2
InChi Key
KXDROGADUISDGY-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C13H14ClN7O/c14-9-11(16)20-10(15)8(19-9)12(22)21-13(17)18-6-7-4-2-1-3-5-7/h1-5H,6H2,(H4,15,16,20)(H3,17,18,21,22)
化学名
3,5-diamino-N-(N'-benzylcarbamimidoyl)-6-chloropyrazine-2-carboxamide
别名
Benzamil; 2898-76-2; Benzylamiloride; 3,5-Diamino-N-(N-benzylcarbamimidoyl)-6-chloropyrazine-2-carboxamide; N-(N-Benzylamidino)-3,5-diamino-6-chloropyrazine carboxamide; UNII-04659UUJ94; CHEBI:34558; 3,5-diamino-N-(N'-benzylcarbamimidoyl)-6-chloropyrazine-2-carboxamide;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.1274 mL 15.6372 mL 31.2744 mL
5 mM 0.6255 mL 3.1274 mL 6.2549 mL
10 mM 0.3127 mL 1.5637 mL 3.1274 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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