| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Braf (Ki = 2 nM); JNK1 (IC50 = 45 nM); JNK2 (Ki = 4 nM); JNK2 (Ki = 160 nM); JNK3 (Ki = 52 nM)
BI-882370 is a highly potent and selective RAF kinase inhibitor. It binds to the DFG-out (inactive) conformation of BRAF kinase. Biochemical inhibitory potencies (IC₅₀) are: BRAFV600E 0.4 nM, BRAFWT 0.8 nM, CRAF 0.6 nM. Dissociation constants (KD) determined by SPR are: BRAFV600E 4 nM, BRAFWT 6 nM, CRAF 3 nM. [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
BI-882370（0.9-6000 nM；3 天）的 EC50 范围为 1-10 nM，可抑制具有 BRAF 突变的人类黑色素瘤和结直肠癌细胞的增殖[1]。 BI 882370（0.1-100 nM，0.1-3000 nM；2 小时）降低 BRAFV600E 突变 A375 细胞中 p-MEK1/2、p-ERK1/2 和细胞周期蛋白 D1/D2 的表达；在 WT BRO 细胞中，它会增加 ERK1/2 的磷酸化并磷酸化 MEK1/2 (3–300 nM)[1]。在 BRAFV600E 突变 A375 细胞中，浓度为 1 nM 或更高的 BI 882370（0.1-100 nM、0.1-3000 nM；24 小时）可抑制细胞周期蛋白 D1/D2 表达并增加 Kip1/p27 表达。 WT BRO 细胞中细胞周期蛋白 D1/D2 或 Kip1/p27 的表达不受影响。
BI-882370 抑制人 BRAF 突变黑色素瘤细胞（如 A375, SK-MEL-28, G-361）的增殖，EC₅₀ 值在 0.9 至 6 nM 范围内，其效力比威罗菲尼强约 100 倍。野生型 BRAF 细胞系（如 BRO, HCT-116）在浓度高达 1,000 nM 时不受影响，EC₅₀ 值 > 5,000 nM。[1] 在 A375 黑色素瘤细胞（BRAFV600E）中，用 BI-882370 处理 2 小时导致免疫印迹中磷酸化 MEK1/2 和磷酸化 ERK1/2 水平呈剂量依赖性降低，在 3 nM 时观察到完全抑制。处理 24 小时后，它抑制了细胞周期蛋白 D1/D2 的表达并诱导了 Kip1/p27 的表达，表明细胞周期阻滞在 G1 期。[1] 在基于细胞的 ELISA 实验中，BI-882370 抑制 ERK 磷酸化，在 A375 细胞中的 EC₅₀ 为 0.5 nM，在 SK-MEL-28 细胞中为 0.7 nM。[1] BI-882370 在药理学相关浓度下，不会在 BRAF 野生型、NRAS 突变的 BRO 黑色素瘤细胞中诱导显著的 RAF 异二聚体（CRAF/BRAF 或 CRAF/ARAF）形成，这与工具化合物 GDC-0879 不同。然而，在 3 至 300 nM 的浓度下，它确实在这些细胞中诱导了 MEK 和 ERK 的磷酸化，但不影响细胞周期蛋白 D1/D2 或 Kip1/p27 的表达。[1] BI-882370 对通路抑制的作用是持久的。在 A375 细胞中进行 2 小时处理并随后洗脱后，ERK 磷酸化的抑制持续存在，洗脱后 24 小时 EC₅₀ 值仍在 10-20 nM 范围内。这与威罗菲尼形成对比，后者的通路活性在洗脱后 1 小时内恢复至基线水平。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
BI-882370（口服给药；25 mg/kg、50 mg/kg；每天两次；2 周）在多种结直肠和 BRAF 突变黑色素瘤小鼠模型中比 Vemurafenib、Dabrafenib 或 Trametinib 更有效[1]。 BI-882370（口服；25 mg/kg；每天两次；40 天）在三周内出现耐药性，但曲美替尼辅助二线治疗五周并未显示出耐药性[1]。通过临床化学、血液学、病理学和毒理基因组学测量，BI-882370（口服；60 mg/kg；每天一次；2 周）显示对大鼠没有毒性[1]。
在 BRAFV600E 黑色素瘤（A375）的小鼠异种移植模型中，口服 BI-882370（25 mg/kg，每日两次）可诱导所有肿瘤完全或部分消退，显示出优于威罗菲尼（120 mg/kg，每日一次）和达拉菲尼（60 mg/kg，每日一次）的疗效。[1] 在 G-361 黑色素瘤模型（杂合 BRAFV600V/E）中，BI-882370（12.5 或 25 mg/kg，每日两次）诱导肿瘤消退，而威罗菲尼仅导致初始稳定，随后再生长。[1] 在获得性耐药模型中，对初始威罗菲尼治疗后进展的 A375 肿瘤进行再治疗。BI-882370（25 mg/kg，每日两次）作为单药诱导了肿瘤消退，但耐药性在 2-3 周内出现。BI-882370（25 mg/kg，每日两次）与 MEK 抑制剂曲美替尼（0.25 mg/kg，每日两次）的联合治疗导致了更明显的消退，在为期 5 周的二线治疗期间未观察到再生长。[1] 在 BRAFV600E 结直肠癌模型中，BI-882370（25 mg/kg，每日两次）在 COLO 205 肿瘤中诱导完全或部分消退，并在敏感性较低的 HT-29 模型中显示出显著的肿瘤生长抑制作用。[1] BI-882370 与 EGFR 抑制剂西妥昔单抗或 ErbB 抑制剂阿法替尼，或与曲美替尼的联合治疗，在 HT-29 结直肠癌模型中协同提高了疗效。[1] 对治疗小鼠肿瘤样本的免疫组织化学分析显示，磷酸化 ERK 信号被强烈抑制。[1] |
| 酶活实验 |
采用 RAF-MEK-ERK 级联测定法来测定 RAF 激酶抑制活性。使用 Z-LYTE 技术测量 ERK 对荧光底物的活性。简言之，将测定组分（RAF、MEK、ERK 激酶和底物）在缓冲液中混合，并以剂量反应方式加入化合物。孵育后，测量荧光信号，并通过非线性回归计算 IC₅₀ 值。[1]
使用表面等离子体共振技术测定化合物与纯化的 BRAF 和 CRAF 激酶结构域的结合亲和力（KD）。将蛋白质固定在传感器芯片上，使不同浓度的化合物流过表面。实时监测结合和解离速率，并计算平衡解离常数。[1] |
| 细胞实验 |
对于增殖实验，将细胞接种到 96 孔板中。第二天，加入连续稀释的化合物（最终 DMSO 浓度 1%）。处理 3 天后，测定抗增殖效果。对于大多数细胞系，使用 alamarBlue 试剂测量剩余细胞的代谢活性。读取荧光值，并通过非线性回归计算 EC₅₀ 值。对于 HT-29 和 COLO 205 细胞，改用 3H-胸腺嘧啶掺入实验。化合物处理 3 天后，加入 3H-胸腺嘧啶 16 小时。然后裂解细胞，将 DNA 收集到滤膜板上，并使用微孔板闪烁计数器测量放射性以确定 EC₅₀。[1]
对于磷酸化 ERK 的基于细胞的 ELISA，铺板 A375 或 SK-MEL-28 细胞，用化合物处理 2 小时，然后固定。将细胞透化、封闭，并与抗磷酸化 ERK 一抗孵育过夜。洗涤后，加入 HRP 偶联的二抗，然后是 TMB 底物。终止反应，并在 450 nm 处测量吸光度以确定 EC₅₀ 值。[1] 对于免疫印迹，用化合物处理细胞 2 或 24 小时，裂解，通过 SDS-PAGE 分离蛋白质。转印至膜后，用针对磷酸化 MEK、MEK、磷酸化 ERK、ERK、细胞周期蛋白 D1/2、Kip1/p27 和 α-微管蛋白（上样对照）的抗体进行探测，然后进行 ECL 检测。[1] 对于评估 RAF 二聚化的免疫共沉淀，将细胞处理 1 小时，裂解，并使用特异性抗体免疫沉淀 CRAF。然后使用针对 ARAF、BRAF 和 CRAF 的抗体通过 Western blotting 分析免疫沉淀物。[1] |
| 动物实验 |
将携带 BRAF 突变型黑色素瘤和结直肠癌细胞（A375、COLO 205；G-361、HT-29 细胞）的人黑色素瘤异种移植到裸鼠体内[1]
25 mg/kg；50 mg/kg 口服给药；25 mg/kg，50 mg/kg；每日两次；持续 2 周 在小鼠异种移植模型中进行疗效研究时，将肿瘤细胞（例如 A375、COLO 205）皮下注射到雌性免疫缺陷小鼠体内。当肿瘤形成良好（约 50-100 mm³）后，将小鼠随机分为治疗组。[1] BI-882370 配制成 0.5% Natrosol（羟乙基纤维素）溶液，用柠檬酸调节 pH 至 3。 [1] 化合物以10 mL/kg体重的剂量经口（胃内灌注）给药。BI-882370通常每日两次给药，剂量分别为6.25、12.5或25 mg/kg。治疗持续时间根据实验而定，为2至6周。[1] 每周测量肿瘤直径3次，并计算肿瘤体积。监测体重作为耐受性的指标。[1] 为了进行药效学和药代动力学分析，在末次给药后的特定时间点采集血样和肿瘤组织，用于药物浓度测定或免疫组织化学分析。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在荷瘤小鼠中，以 25 mg/kg 的剂量每日两次，持续 2-3 周接受 BI-882370 治疗，治疗结束时药物暴露量（AUC0-24h）范围为 12,000 至 25,000 nmol·h/L。[1]
小鼠单次口服 BI-882370（50 mg/kg）后，在所有检测时间点，肿瘤组织中的药物浓度均高于血浆中的药物浓度，表明其组织分布良好。[1] 在大鼠中，每日一次，60 mg/kg 的剂量，持续 2 周，导致药物暴露量（AUC）达到 43,000 nmol·h/L。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在小鼠中，以高达 50 mg/kg 的剂量每日两次给药，持续数周，BI-882370 耐受性良好，未观察到明显的体重减轻或毒性临床症状。这些研究未确定最大耐受剂量 (MTD)。[1]
对荷瘤小鼠进行多器官（皮肤、心脏、肺、膀胱、胃、肝脏、肾脏）的组织病理学检查，这些小鼠接受了高效剂量（25 mg/kg，每日两次）的 BI-882370 治疗，持续 2 周，结果显示未发现药物诱导的增生或其他病理改变。 [1] 在一项为期两周的雄性大鼠探索性毒理学研究中，每日口服剂量高达 60 mg/kg 的 BI-882370（导致 AUC > 43,000 nmol·h/L）未引起任何不良临床表现，也未在肝脏和皮肤的临床化学、血液学、组织病理学或毒理基因组学分析中发现任何相关结果。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
泛RAF抑制剂XP-102是一种口服生物利用度高的第二代Raf家族丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂，可抑制包括A-Raf、B-Raf和C-Raf在内的所有Raf蛋白激酶，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，泛RAF激酶抑制剂XP-102特异性结合于处于非活性DFG-out构象的Raf激酶的ATP结合位点，抑制Raf的活性，包括B-Raf突变体，例如B-Raf V600E突变。这可阻止Raf介导的信号转导通路的激活，从而抑制肿瘤细胞的生长。 Raf蛋白激酶在RAF/丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）/细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路中发挥关键作用，该通路在人类癌症中常发生异常激活，并在肿瘤细胞增殖和存活中起着重要作用。BRAF基因突变主要由第600位氨基酸残基缬氨酸替换为谷氨酸引起。致癌产物BRAF(V600E)激酶活性升高，过度激活MAPK信号通路。
BI-882370是一种DFG-out（II型）激酶抑制剂，与第一代抑制剂如达拉非尼和维莫非尼（DFG-in（I型）结合剂）不同，它与BRAF的非活性构象结合。 [1] 其结合模式通过特定的氢键和与Phe595的T-堆积相互作用稳定DFG-out构象，从而增强其效力。[1] BI-882370的一个关键特征是，在药理学相关浓度下，它不会诱导BRAF野生型细胞形成RAF异二聚体，而其他一些RAF抑制剂则会导致MAPK通路的反常激活和过度增殖的副作用（如皮肤损伤）。[1] BI-882370在细胞和体内均表现出持久的作用，能够持续抑制相关通路。[1] 在多种BRAF突变异种移植模型中，当给药剂量达到与患者体内相当的暴露量时，BI-882370作为单药治疗的疗效优于维莫非尼、达拉非尼和曲美替尼。 [1] BI-882370与曲美替尼联合用药在获得性维莫非尼耐药模型中显示出良好的活性。[1] |
| 分子式 |
C28H33F2N7O2S
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|---|---|
| 分子量 |
569.669131040573
|
| 精确质量 |
569.238
|
| 元素分析 |
C, 59.03; H, 5.84; F, 6.67; N, 17.21; O, 5.62; S, 5.63
|
| CAS号 |
1392429-79-6
|
| 相关CAS号 |
1392429-79-6
|
| PubChem CID |
60152613
|
| 外观&性状 |
Off-white to gray solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
666.8±65.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
357.0±34.3 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.0 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.660
|
| LogP |
2.59
|
| tPSA |
105
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
10
|
| 可旋转键数目(RBC) |
9
|
| 重原子数目 |
40
|
| 分子复杂度/Complexity |
913
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
S(CCC)(NC1=CC=C(C(=C1F)N1C=C(C2=CN=CN=C2)C2=C1C=CC(=N2)N(C)C1CCN(CC)CC1)F)(=O)=O
|
| InChi Key |
AEJACXAFHXBVHF-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C28H33F2N7O2S/c1-4-14-40(38,39)34-23-7-6-22(29)28(26(23)30)37-17-21(19-15-31-18-32-16-19)27-24(37)8-9-25(33-27)35(3)20-10-12-36(5-2)13-11-20/h6-9,15-18,20,34H,4-5,10-14H2,1-3H3
|
| 化学名 |
N-[3-[5-[(1-ethylpiperidin-4-yl)-methylamino]-3-pyrimidin-5-ylpyrrolo[3,2-b]pyridin-1-yl]-2,4-difluorophenyl]propane-1-sulfonamide
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| 别名 |
BI882370; BI 882370; BI-882370
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~5 mg/mL (~8.78 mM)
H2O : < 0.1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7554 mL | 8.7770 mL | 17.5540 mL | |
| 5 mM | 0.3511 mL | 1.7554 mL | 3.5108 mL | |
| 10 mM | 0.1755 mL | 0.8777 mL | 1.7554 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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RAF-IN-2
BRAF ligand-1
CST905
BRAFV600E-IN-2
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