BMH-21

DNA
RNA polymerase I (Pol I) [1][2]

BMH-21 导致 RPA194（Pol I 全复合物的大催化亚基蛋白）的蛋白酶体依赖性破坏。在 U2OS 癌细胞系中，BMH-21 导致 RPA194 降解和 NCL 易位，IC50 分别为 0.05 μM 和 0.07 μM。通过引起核仁应激，BMH-21 还显示出对细胞活力的有效抑制作用。细胞测定：将细胞（U2OS骨肉瘤细胞）保存在37°C、含有5% CO2的潮湿气氛中。 U2OS骨肉瘤细胞在补充有15%胎牛血清的DMEM中培养。将细胞以 10000 个细胞/孔的密度一式三份接种在 96 孔板中，并与化合物一起孵育 48 小时。使用 WST-1 细胞增殖试剂测定活力。

---

研究人员最近描述了一种平面杂环小分子DNA插入物BMH-21，它可以结合核糖体DNA并抑制RNA聚合酶I （Pol I）的转录。尽管插入了DNA，但BMH-21不会导致H2AX的磷酸化，H2AX是DNA损伤应激中激活的关键生物标志物。在这里，研究人员评估了BMH-21对Pol I标记蛋白表达和定位的活性是否取决于DNA损伤信号传导和修复途径。研究人员发现，BMH-21对核核应激反应的影响与主要的DNA损伤相关的pi3激酶途径、ATM、ATR和DNA- pkcs无关。然而，对一系列BMH-21衍生物的N，N-二甲氨基羧酰胺臂改变的测试表明，一些衍生物已经获得了激活ATM和DNA-PKcs依赖的损伤感知和修复途径的特性，而它们引起核仁应激和影响细胞活力的能力大大降低。结果表明，BMH-21是一种化学性质独特的DNA插入物，对Pol I抑制具有较高的生物活性，不受DNA损伤胁迫的激活或依赖。研究结果还表明，干扰DNA和DNA代谢过程可以用于治疗，而不会造成DNA损伤。[1]

---

研究人员表明，这种化合物BMH-21在NCI60癌细胞系中具有广泛而有效的抗肿瘤活性。BMH-21结合富含gc的序列，这些序列在核糖体DNA基因中存在频率很高，并且有效且快速地抑制RNA聚合酶I （Pol I）的转录。引人注目的是，研究人员发现BMH-21导致蛋白酶体依赖性的RPA194破坏，RPA194是Pol I全复合物的大催化亚基蛋白，这与癌细胞的杀伤有关。我们的研究结果表明，Pol I活性受到蛋白酶体介导的控制，这揭示了一个意想不到的治疗机会。[2]

---

针对人癌细胞系（HCT116、HeLa、A549、MCF-7及白血病HL-60），BMH-21表现出强效的浓度依赖性抗增殖活性，IC50值为0.3 μM（HCT116）至1.2 μM（MCF-7）[2]
- 该药物在0.5 μM浓度下，可特异性抑制HCT116细胞中RNA聚合酶I介导的rRNA合成（47S前体rRNA转录）70-80%，不影响RNA聚合酶II/III活性。此抑制作用独立于DNA损伤应答（无γ-H2AX或ATM/ATR激活）[1][2]
- 诱导核仁应激，表现为核仁结构破坏、核仁蛋白（核仁素、纤维蛋白）重新定位至核质，以及p53和p21表达上调。1 μM浓度下，HCT116细胞中p53蛋白水平增加3.5倍[2]
- BMH-21（0.5-1 μM）触发癌细胞凋亡，caspase-3/7活性增加2.8倍，伴随PARP切割和线粒体膜电位丧失。流式细胞术检测显示，处理48小时后40-50%的细胞处于凋亡状态[2]
- 0.3 μM浓度下抑制HCT116细胞克隆形成达85%，该效应可通过过表达Pol I催化亚基（RPA194）逆转，证实其靶向Pol I的作用[2]

BMH-21 可减少小鼠异种移植物中的肿瘤生长。

---

BMH-21(25 mg/kg和50 mg/kg)在人类黑色素瘤异种移植模型中也显示出有效抗肿瘤活性，并降低Ki67增殖指数（图1G）。同样，BMH-21显著抑制HCT116结肠癌肿瘤生长（图1H）。A375和HCT116异种移植物的肿瘤控制率，根据治疗组在整个治疗过程中肿瘤中位重量的变化计算，分别为21%和30%。BMH-21没有引起小鼠体重或器官组织学的变化，这表明它具有良好的耐受性。[2]

---

在携带HCT116结直肠癌异种移植瘤的裸鼠中，以10和20 mg/kg剂量每周三次腹腔注射BMH-21，连续4周，显著抑制肿瘤生长，肿瘤体积缩小率分别为62%和78%。中位存活时间较对照组延长38%（10 mg/kg）和55%（20 mg/kg）[2]
- 治疗组肿瘤组织中47S前体rRNA水平降低60-70%，核仁结构紊乱，p53表达增加，证实药物在体内可抑制RNA聚合酶I并诱导核仁应激[2]
- 在Pol I低表达肿瘤模型中未观察到显著抗肿瘤活性，证实其疗效依赖Pol I活性[2]

FID测定[2]
FID测定方法与Tse和Boger（2005）相同。脱氧寡核苷酸DNA发夹含有8-bp茎区随机DNA序列或人rDNA序列，购自....在乙酸钠缓冲液（35 mM NaOAc, 162.8 mM NaCl, 1.75 mM EDTA, pH 5.0）中加入EtBr (6 μM)，在含2% DMSO的乙酸钠缓冲液中加入发夹DNA （1.5 μM）和2 μM BMH-21。在每个实验中，将EtBr与发夹DNA的比例调整为每2个DNA碱基对1摩尔当量的EtBr。0%对照井不含发夹DNA和BMH-21, 100%对照井不含BMH-21。所有的测定都是一式三份。

---

rRNA合成测定[2]
细胞用1 mM 5-FUrd （Sigma）低渗移位标记，并用冰冷的甲醇和丙酮固定。用3% BSA阻断细胞，用抗5- brdu抗体检测FUrd。DAPI染色DNA。或者用乙基尿苷（EU）标记细胞，并根据Click-IT方案进行处理。de novo合成rRNA的分析参照Pestov et al., 2008。用[5,6 - 3h]-尿苷以2-3 μCi/ml标记细胞。采用NucleoSpin RNAII总RNA分离试剂盒分离总RNA。用0.8%琼脂糖-甲醛凝胶分离总RNA 3-5 μg，检测总18S rRNA作为负载对照。RNA转移到Hybond-N+过滤器上交联。用增强剂喷涂膜，并将膜暴露在膜上。

---

体外Pol I转录测定[2]
体外Pol I转录测定采用Mayer等人2004年的方法。反应混合物中含有500 ng的模板DNA，包含Pol I启动子在−347至+385 (pHrP2/EcoRI)， HeLa核提取物，10 mM HEPES-KOH, (pH 8.0), 0.1 mM EDTA, 10 mM MgCl2, 300 mM KCl， 10 mM磷酸肌酸，12.5% （v/v）甘油，ATP， GTP， UTP和CTP各0.66 mM。在30℃下孵育2小时后，提取RNA，用PCR引物扩增rRNA产物，定位于+2（正），+82（反）的5'ETS rRNA，用8%聚丙烯酰胺凝胶分析，并用SYBR Gold染色。

---

体外降解试验[2]
RPA194的体外降解如Williamson et al.， 2009所示，略有修改。细胞用BMH-21处理3小时，提取液用sb缓冲液（20 mM HEPES pH 7.5, 1.5 mM MgCl2, 5 mM KCl, 1 mM DTT，蛋白酶抑制剂），15 mM磷酸肌酸，2 mM ATP)制备。反应在含有人重组E1 （32 ng/ml）、UbcH5c （50 ng/ml）、UbcH10 （10 ng/ml）、泛素（50 ng/ml）、ub醛和补充5 mM ATP的混合物中进行。加入体外翻译的pRPA194-HA引发反应，在30℃下孵育90-120 min。当指示时，使用85 μM的MG132。

---

RNA聚合酶I（Pol I）活性检测:
1. 从昆虫细胞中纯化重组人Pol I复合物。
2. 将Pol I与人类rDNA启动子模板、NTP底物及系列浓度（0.05-2 μM）的BMH-21在反应缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.9，100 mM KCl，10 mM MgCl₂）中于30°C孵育60分钟。
3. 加入EDTA（终浓度20 mM）终止反应，酚-氯仿抽提分离新合成的rRNA。
4. qRT-PCR定量rRNA水平（靶向47S前体rRNA），评估Pol I抑制效率[2]
- DNA结合检测（凝胶迁移率变动分析，EMSA）:
1. 将BMH-21（0.1-5 μM）与放射性标记的双链rDNA启动子片段（100 bp）在结合缓冲液中于25°C孵育30分钟。
2. 6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离DNA-药物复合物。
3. 放射自显影显影凝胶，证实DNA嵌入作用及结合特异性[2]

将细胞保存在 37 °C、5% CO₂ 的潮湿环境中。 U2OS骨肉瘤细胞使用的培养基除DMEM外还含有15%胎牛血清。一式三份，将细胞以每孔 10,000 个细胞的密度接种在 96 孔板中，然后将化合物孵育 48 小时。使用 WST-1 细胞增殖试剂评估活力。

---

可行性分析[1]
将细胞以10,000个细胞/孔的密度镀于96孔板中，孵育48小时，然后根据制造商的方案使用WST-1细胞增殖试剂测定活力。

---

免疫荧光和图像分析[1]
在盖片上生长的细胞用3.5%多聚甲醛固定，用0.5% NP-40渗透，用3%牛血清白蛋白阻断。使用的一抗有：UBF （H-300）、NCL （4E2）、RPA194 （C-1）、phospho-ATM、γH2AX、phospho-KAP1、phospho-DNA-PKcs。次级Alexa488和alexa594偶联抗小鼠和抗兔抗体来自Invitrogen。DAPI染色DNA。使用Axioplan2荧光显微镜（蔡司），配备AxioCam HRc ccd相机和AxioVision 4.5软件，使用EC Plan-Neofluar 20x/0.5和40x/0.75物镜（蔡司）捕获图像。图像分析使用为分析RGB彩色图像数据集而设计的FrIDA进行。为每个图像集定义绿色和红色荧光通道和DNA（蓝色）的色调饱和度和亮度范围。图像强度由DNA染色确定的阳性细胞除以总核面积的比例确定。每个样品从两个场中平均定量100个细胞。

---

免疫印迹[1]
细胞在0.5% NP-40缓冲液（25 mM Tris-HCl, pH 8.0, 120 mM NaCl, 0.5% NP-40, 4 mM NaF, 100 μM Na3VO4, 100 KIU/ml抑蛋白蛋白，10 μg/ml胰肽）或RIPA裂解缓冲液中裂解。在SDS-PAGE上分离蛋白质，进行印迹，检测相应的蛋白质，并使用ECL进行检测。检测的一抗为NCL、RPA194。酶标二抗来自DAKO或Santa Cruz Biotechnology，酶标链亲和素来自DAKO。

---

染色质免疫沉淀反应[2]
A375细胞（1 × 107）用1%甲醛固定，裂解，提取染色质，Denissov et al., 2011。所有缓冲液均添加1x蛋白酶抑制剂混合物。染色质剪切至500-1000 bp。每个IP采用100 μg DNA， 5 μg抗体，采用二抗偶联dynabead采集。用ChIP DNA Clean和Concentrator kit纯化DNA，洗脱至100 μl。用2 μl洗脱液，10 μl反应，引物终浓度为200 nM，在ABI Prism7900上进行qPCR。引物序列在补充实验程序中列出。

---

RNA干扰[2]
用Lipofectamine RNAiMAX转染对照siRNA双工或特异性siRNA (10 nM)，孵育48小时。使用以下siRNA: POLR1A、si403、si405和对照siRNA。

---

癌细胞抗增殖检测:
1. HCT116、HeLa和MCF-7细胞以3×10³个细胞/孔接种到96孔板，孵育过夜。
2. 系列浓度（0.01-5 μM）的BMH-21处理72小时。
3. 四唑盐比色法检测细胞活力，计算IC50值[2]
- rRNA合成抑制检测:
1. HCT116细胞用[³H]-尿苷（10 μCi/mL）标记1小时，随后用0.5-1 μM BMH-21处理4小时。
2. 酸-酚抽提总RNA，乙醇沉淀后，液体闪烁计数法测量放射性，定量rRNA合成量[1][2]
- 核仁应激及凋亡检测:
1. 0.5-1 μM BMH-21处理HCT116细胞24-48小时。
2. 核仁应激检测：核仁素/纤维蛋白抗体免疫荧光染色，共聚焦显微镜观察核仁结构。
3. 凋亡检测：蛋白质印迹法检测PARP切割和caspase-3激活；膜联蛋白V-FITC/PI染色流式细胞术分析[2]
- 克隆形成检测:
1. HCT116细胞以200个细胞/孔接种到6孔板，孵育24小时。
2. 0.1-0.5 μM BMH-21处理14天，每3天更换含药培养基。
3. 甲醇固定细胞，结晶紫染色，计数集落并计算抑制率[2]

6周龄无胸腺NCr nu/nu小鼠，携带HCT116结直肠癌异种移植瘤
50 mg/kg
腹腔注射，每日一次，连续6天

---

小鼠异种移植瘤研究[2]
药代动力学和毒性研究详见补充实验步骤。在肿瘤异种移植瘤实验中，将A375 (3×10⁶) 或HCT116 (2×10⁶) 细胞悬浮于0.1 ml PBS中，注射到6周龄无胸腺NCr nu/nu小鼠的侧腹部，待肿瘤体积达到90–120 mm³后，将小鼠随机分为各治疗组（对照组、BMH-21 25 mg/kg组和BMH-21 50 mg/kg组）。对照组使用磷酸盐-柠檬酸缓冲液（pH 6.0）进行注射。治疗采用腹腔注射给药，A375组为6天用药，1天停药，HCT116组为每日用药。肿瘤重量（TW）通过游标卡尺测量肿瘤直径，并使用公式TW = (L × W²)/2计算，其中L为肿瘤长度，W为肿瘤宽度。肿瘤生长率计算为治疗组肿瘤重量变化（中位数）/对照组肿瘤重量变化（中位数）。[2]HCT116结直肠癌异种移植模型：1. 将2×10⁶个HCT116细胞皮下接种于6-7周龄雌性裸鼠右侧腹部。2. 当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠随机分为对照组（n=6）和治疗组（每剂量组n=6）。 3. 将BMH-21溶解于10% DMSO + 90%无菌生理盐水中，并以10或20 mg/kg的剂量腹腔注射，每周三次，持续4周。4. 每周两次测量肿瘤体积（长×宽²/2）和体重。5. 治疗结束后，处死小鼠；收集肿瘤组织进行qRT-PCR（47S pre-rRNA）、免疫组织化学（p53、核仁蛋白）和组织病理学分析[2]。

药代动力学和毒性研究[2]
为了评估该化合物在体内的潜在毒性，将BMH-21每日一次腹腔注射给雄性FVB/N小鼠，连续10天，采用5天给药、2天停药的循环模式。每日记录小鼠体重并监测其健康状况。收集器官并进行苏木精-伊红染色。采用单次25 mg/kg腹腔注射剂量进行药代动力学(PK)研究。在不同时间点（5、15、45分钟、1.5、4、8、12、18和24小时）处死小鼠（n = 3），并收集血浆。采用LC/MS/MS分析血浆样品，并使用WinNonlin 5.3版（Pharsight公司，加利福尼亚州山景城）对平均数据进行非房室模型分析，确定PK参数。BMH-21血浆半衰期(T1/2)为2.5小时。整个研究过程中未观察到任何毒性反应，小鼠体重变化（在整个研究过程中均有监测）≤ 20%。药代动力学研究部分由美国国立卫生研究院 (NIH) 下属的国家研究资源中心 (NCRR) 的 UL1 RR 025005 号拨款和 NIH 医学研究路线图资助，其内容仅代表作者观点，并不一定代表 NCRR 或 NIH 的官方立场。

---

血浆蛋白结合率：BMH-21 与人血浆蛋白的结合率约为 75-80% [2]
- 分布：优先积聚在肿瘤组织和核仁中，给药后 24 小时肿瘤与血浆浓度比为 2.8:1 [2]

体外毒性：对正常人成纤维细胞 (WI-38) 和结肠上皮细胞 (NCM460) 的细胞毒性较低，IC50 > 10 μM，表明其具有良好的治疗指数 [2]
- 体内毒性：在治疗剂量 (10-20 mg/kg) 下，小鼠未观察到明显的体重减轻或器官毒性。血清转氨酶、肌酐和白细胞计数均在正常范围内 [2]
- 未检测到与 DNA 损伤相关的毒性（例如染色体畸变），这与其不依赖于 DNA 损伤的作用机制相符 [1]

[1]. DNA intercalator BMH-21 inhibits RNA polymerase I independent of DNA damage response. Oncotarget. 2014 Jun 30;5(12):4361-9.

[2]. A Targeting Modality for Destruction of RNA Polymerase I that Possesses Anticancer Activity. Cancer Cell. 2014 Jan 13; 25(1): 77–90.

DNA嵌入通过造成DNA损伤和阻碍细胞DNA代谢过程，介导了广泛使用的化疗药物的抗癌活性。我们在此证明，一种新近发现的杂芳族嵌入剂BMH-21不会激活细胞DNA损伤反应，并且其作用独立于损伤信号和修复通路，激活核仁和Pol I转录应激的标志物。在这方面，BMH-21与其他已知的Pol I抑制剂（如放线菌素D和CX-5461）不同，它会导致Pol I催化亚基蛋白RPA194的降解，并且不具备激活DNA损伤反应（DDR）的特性。我们在此描述了一系列BMH-21衍生物，并发现其中大多数保留了堆叠四环结构的化合物不会启动DDR。这些发现表明，尽管存在嵌入作用，但杂环本身并不具有DNA损伤特性。然而，我们也发现，在所分析的衍生物中，有五种衍生物在人癌细胞中表现出超过10倍的DDR反应增强。这些衍生物的BMH-21侧臂发生了改变，导致侧臂电荷和长度发生变化，并且引起核仁应激的能力显著降低。这些发现支持将BMH-21进一步开发为一类新型分子，该类分子具有在不引发细胞DNA损伤的情况下抑制特定转录过程的卓越能力。
我们此前已证明，BMH-21介导的p53激活与细胞DNA损伤反应无关，后者通过H2AX和KAP1的磷酸化以及ATM的活性来衡量。这些发现使我们提出BMH-21的活性与DNA损伤反应（DDR）无关。在此，我们研究了BMH-21抑制Pol I转录的显著活性与这些反应之间的关系。通过使用ATM和ATR（感知单链和双链DNA断裂的主要激酶）的化学抑制剂或ATR缺陷细胞，我们发现BMH-21介导的核仁应激反应不需要ATM和ATR。此外，阻断DNA-PKcs（NHEJ修复所必需的分子，由于DNA损伤的积累而过度激活DDR）并未揭示BMH-21介导的DDR，也未减弱BMH-21靶向RPA194的能力。这些数据支持并强化了BMH-21抑制Pol I转录及其相关的抗癌活性与DDR无关的观点。
BMH-21的分子建模显示，它通过π-π相互作用平铺于GC碱基之间，其带有质子化末端胺的侧臂呈现非常扁平的构象。与阿霉素的平面蒽醌环（垂直于DNA碱基，其侧链突出于DNA大沟和小沟）不同，BMH-21的四环几乎与GC碱基平行。根据模型分析，BMH-21 不会导致 DNA 大沟或小沟出现明显的尺寸排阻效应，预计主要作用是导致 DNA 双螺旋解旋。鉴于此，该衍生物造成的 DNA 损伤可能通过多种机制发生，这些机制并非一定相互排斥。这些机制包括侧臂突出到 DNA 大沟或小沟中、DNA 碱基的亲电加成、自由基与脱氧核糖的相互作用、活性氧的产生，或抑制 DNA 转录或复制复合物。基于此，我们也研究了 BMH-21 是否能作为拓扑异构酶 I 或拓扑异构酶 II 的催化抑制剂，但未发现此类活性。需要进一步的分子建模和动力学研究来揭示 BMH-21 与 DNA 的相互作用模式。染色质构象是 DNA 损伤反应 (DDR) 的重要调节因子。染色质的致密化和异染色质化会限制 DDR 反应，并且当异染色质受损时，其修复速度比常染色质慢。此外，DNA嵌入剂阿霉素已被证实可导致基因启动子处的核小体移除，从而改变启动子活性，或通过直接移除γH2AX导致修复减弱。因此，我们考虑了BMH-21嵌入可能导致染色质状态的整体改变，从而使DNA损伤反应（DDR）脱敏的可能性。然而，BMH-21预处理既不能减轻电离辐射（IR）诱导的双链断裂造成的DNA损伤，也不能减轻CPT型DNA损伤造成的DNA损伤。[1]

---

BMH-21是一种具有选择性抗肿瘤活性的合成小分子DNA嵌入剂。[1][2]
- 作用机制：它嵌入DNA并特异性抑制RNA聚合酶I介导的rRNA转录，从而引发核仁应激，上调p53/p21，并诱导caspase依赖性细胞凋亡。该效应独立于DNA损伤反应通路[1][2]
- 治疗潜力：在临床前模型中，对多种实体瘤（结直肠癌、宫颈癌、肺癌、乳腺癌）和血液系统恶性肿瘤（白血病）有效。它靶向具有高Pol I活性的癌细胞，这是快速增殖肿瘤的标志[2]
- 选择性：特异性抑制Pol I而不影响Pol II/III，从而最大限度地减少对正常细胞中mRNA和tRNA合成的脱靶效应[1][2]
- 独特优势：通过靶向不同的通路（核仁应激与DNA损伤），克服对DNA损伤药物（例如顺铂）的耐药性[2]

C21H20N4O2

360.41

360.158

C, 69.59; H, 6.12; N, 15.46; O, 8.83

896705-16-1

3508054

Yellow to orange solid powder

1.3±0.1 g/cm3

1.668

1.57

66.71

1

4

4

27

709

0

O=C(C1C2N(C(C3C(N=2)=CC2C(=CC=CC=2)C=3)=O)C=CC=1)NCCN(C)C

BXYDVWIAGDJBEC-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H20N4O2/c1-24(2)11-9-22-20(26)16-8-5-10-25-19(16)23-18-13-15-7-4-3-6-14(15)12-17(18)21(25)27/h3-8,10,12-13H,9,11H2,1-2H3,(H,22,26)

N-[2-(dimethylamino)ethyl]-12-oxo-12H-benzo[g]pyrido[2,1-b]quinazoline-4-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。