BMS-986120

PAR4 (Protease-Activated Receptor 4)

BMS-986120 (BMS) 在体外可显着抑制人和猴血液中 PAR4-AP 诱导的 PA（IC50 分别为 9.5±2.7 和 2.1±0.4 nM）[1]。

在猴子中，BMS-986120对 PAR4-AP 的 log PA 剂量反应产生平行右移，而不影响最大反应，表明可克服的拮抗作用。 BMS (1 mg/kg) 不会抑制 PAR1-AP、ADP 和胶原蛋白诱导的 PA，支持选择性。 BMS（0.2、0.5、1 mg/kg）分别使 TW 降低 35±5、49±4 和 83±4%。 KBT 和 MBT 的最大增幅分别仅为 2.2 倍和 1.8 倍。 ASA 最大抗血小板剂量（4 mg/kg/h，n=8）使 TW 略微降低 12±2%，并使 KBT 和 MBT 分别增加 2.2 倍和 2.7 倍。 ASA 和 BMS（0.5 或 1 mg/kg）共同给药使 TW 分别降低 54±3 和 95±2%，KBT 分别增加 3.1 和 3.6 倍，MBT 分别增加 2.6 和 3.3 倍（ n=8/组）。在伴侣猴研究中，单独使用氯吡格雷（0.3 mg/kg/天，n=6）可使 TW 降低 49±6%，但使 KBT 和 MBT 分别增加 7.3 倍和 8.1 倍[1]。

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BMS对PAR4-AP诱导的体外人、猴血PA均有明显抑制作用（ic50分别为9.5±2.7 nM和2.1±0.4 nM）。在猴子中，BMS使对数PA剂量对PAR4-AP的反应平行向右移动，而不影响最大反应，表明可克服的拮抗作用。BMS （1 mg/kg）对PAR1-AP、ADP和胶原诱导的PA无抑制作用，具有选择性。BMS（0.2、0.5、1 mg/kg）分别使TW减少35±5%、49±4%和83±4%。KBT和MBT的最大增幅分别只有2.2倍和1.8倍。ASA最大抗血小板剂量（4 mg/kg/h, n=8）可使TW略微降低12±2%，使KBT和MBT分别增加2.2倍和2.7倍。ASA和BMS（0.5或1 mg/kg）联合给药可使TW分别降低54±3%和95±2%，使KBT分别提高3.1和3.6倍，使MBT分别提高2.6和3.3倍（n=8/组）。在同伴猴子研究中，氯吡格雷（0.3 mg/kg/天，n=6）单独使用可使TW降低49±6%，但使KBT和MBT分别增加7.3倍和8.1倍。 结论：在猴子中，BMS单独或联合ASA可预防闭塞性颈动脉血栓形成，但对BT的影响有限，与标准护理抗血小板药物阿司匹林和氯吡格雷相比，[1]

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在食蟹猴动脉血栓形成模型中，BMS-986120显示出强大而高效的抗血栓活性。与标准抗血小板药物氯吡格雷相比，BMS-986120在相同的非人灵长类动物模型中也表现出低出血倾向和明显更宽的治疗窗口。这些临床前发现确定了PAR4在介导血小板聚集中的生物学作用。此外，它们表明靶向PAR4是一种有吸引力的抗血小板策略，与目前的护理标准相比，它有可能治疗动脉粥样硬化血栓形成高风险患者，并且具有更高的安全性。［3］

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40名健康志愿者完成了1期平行组PROBE试验（前瞻性随机开放标签盲法终点）。在(1)口服BMS-986120 （60 mg）或(2)口服阿司匹林（600 mg）后（18小时）口服阿司匹林（600 mg）和口服氯吡格雷（600 mg）后0,2和24小时测量体外血小板活化，血小板聚集和血栓形成。BMS-986120对PAR4激动剂肽（100 μM）刺激的P-选择素表达、血小板单核细胞聚集和血小板聚集具有高度选择性和可逆性的抑制作用（P<0.001）。与预处理相比，高剪切时总血栓面积（μm2/mm）减少29.2%(95%可信区间，18.3% ~ 38.7%；P<0.001)和21.4% (9.3% ~ 32.0%；P=0.002)。血栓形成减少是由富血小板血栓沉积减少引起的：34.8% (19.3%-47.3%；P<0.001), 23.3% (5.1% ~ 38.0%；P=0.016)。与阿司匹林单独使用或与氯吡格雷联合使用相比，BMS-986120对低剪切血栓形成无影响（P=无统计学意义）。BMS-986120给药与凝血时间增加或严重不良事件无关。 结论：BMS-986120是一种高选择性和可逆性口服PAR4拮抗剂，可在高剪切应力条件下显著减少富含血小板的血栓形成。我们的研究结果表明PAR4拮抗剂作为抗血小板治疗策略具有很大的潜力。［2］

BMS-986120对血小板活化和聚集[2]
的影响 BMS-986120对PAR4激动剂肽(AP；100 μM)刺激的血小板活化和聚集（P<0.001）。与预处理相比，PAR4 ap刺激的血小板P-选择素表达（%）、血小板单核细胞聚集（%）和血小板聚集（%）的增加在2小时降低了91.7%（95%置信区间[CI]， 81.0-102.4）、80.6% （95% CI, 68.6%-92.6%）和85.0% (95% CI, 82.0-88.1)，在24小时降低了53.9% （95% CI, 43.2%-64.7%）、41.1% （95% CI, 28.9%-53.2%）和6.0% (95% CI, 2.9%-9.0%)(所有P<0.001；图2)BMS-986120血浆浓度与p -选择素表达（ρ=−0.87）、血小板-单核细胞聚集（ρ=−0.88）和血小板聚集(ρ=−0.82；P<0.001；图III（仅在线数据补充）。对PAR1、AP、ADP或花生四烯酸血小板反应均无影响（P=无统计学意义[ns]）；图2)。

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BMS-986120对体外血栓形成的影响 BMS-986120在高剪切时减少血栓形成总量（P<0.001），但在低剪切时没有减少血栓形成总量(P=ns；图3)与预处理相比，高剪切时总血栓面积（μm2/mm）减少29.2% (95% CI, 18.3%-38.7%；P<0.001)和21.4% (95% CI, 9.3%-32.0%；P=0.002)。血浆BMS-986120浓度与高剪切时血栓形成总量相关(ρ= - 0.47；P<0.001)，但在低剪切(ρ= - 0.18；P = ns;图III（仅在线数据补充）。

在进行血栓形成、血栓形成和离体生物标志物实验前2小时，分别给麻醉的猴子口服BMS（0.2、0.5、1 mg/kg）或赋形剂（每组n=8）。同时研究了单独使用阿司匹林（ASA，4 mg/kg/h 静脉注射）或阿司匹林联合BMS（0.5、1 mg/kg）的效果（每组n=8）。测定了血栓重量（TW）的减少、肾脏（KBT）和肠系膜动脉（MBT）血栓形成量相对于赋形剂的增加以及血小板聚集（PA）的抑制情况。采用全血聚集法测定了PAR4选择性激活肽（PAR4-AP，12.5 μM）、PAR1选择性激活肽（PAR1-AP，18 μM）、ADP（20 μM）和胶原蛋白（5 μg/ml）引起的血小板聚集峰值反应。[1]

口服BMS-986120的药代动力学特征[2]
BMS-986120吸收迅速，血浆峰浓度出现在2小时（255±136 ng/mL；图1）。BMS-986120的血浆浓度在4小时时减半（133±100 ng/mL），并在24小时时降至峰浓度的10%以下（21±9 ng/mL）。

[1]. Abstract 175: A Novel Orally-Active Small-Molecule Antagonist of the Platelet Protease-Activated Receptor-4, BMS-986120, Inhibits Arterial Thrombosis With Limited Impact on Hemostasis in Cynomolgus Monkeys. Stroke. 2018;47:A175.

[2]. PAR4 (Protease-Activated Receptor 4) Antagonism With BMS-986120 Inhibits Human Ex VivoThrombus Formation. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2018 Feb;38(2):448-456.

[3]. Blockade of protease-activated receptor-4 (PAR4) provides robust antithrombotic activity with low bleeding. Sci Transl Med. 2017 Jan 4;9(371).

总之，我们已证实，使用高选择性且可逆的口服PAR4拮抗剂BMS-986120进行PAR4拮抗，可显著降低健康志愿者在高剪切应力条件下的体外血栓形成。BMS-986120耐受性良好，未引起凝血试验异常或严重不良事件。鉴于PAR4拮抗剂潜在的止血保护作用，我们的结果表明BMS-986120具有作为新型抗血小板药物的巨大潜力，值得开展进一步的临床试验研究。[2]

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BMS-986120 (BMS) 是一种新型口服活性蛋白酶激活受体4 (PAR4) 拮抗剂，PAR4是人血小板凝血酶受体，目前正处于I期临床试验阶段。在食蟹猴的电刺激诱导颈动脉血栓形成模型和出血时间（BT）模型中，研究人员探讨了BMS的抗血栓潜力。食蟹猴的血小板凝血酶受体与人类相似。[1]抗血小板药物已被证实是治疗心血管和脑血管疾病的有效方法。然而，现有药物存在出血风险，有时甚至会危及生命，这限制了药物的使用或剂量。因此，目前迫切需要一种疗效显著且出血风险低的抗血小板药物。凝血酶是一种强效的血小板激动剂，它通过G蛋白（异源三聚体鸟嘌呤核苷酸结合蛋白）偶联的蛋白酶激活受体PAR1和PAR4直接诱导血小板活化。PAR1拮抗剂已获准临床应用，但其使用受到显著出血风险的限制。相反，PAR4作为抗血小板靶点的潜力尚未得到充分阐明。我们利用抗PAR4抗体，在豚鼠模型中证实了PAR4抑制剂具有低出血风险和有效的抗血栓特性。随后，通过高通量筛选和广泛的药物化学研究，我们发现了BMS-986120，一种口服有效的选择性可逆PAR4拮抗剂。在食蟹猴动脉血栓模型中，BMS-986120表现出强效的抗血栓活性。与在同一非人灵长类动物模型中测试的标准抗血小板药物氯吡格雷相比，BMS-986120还表现出较低的出血风险和显著更宽的治疗窗。这些临床前研究结果阐明了PAR4在介导血小板聚集中的生物学作用。此外，这些结果表明，靶向PAR4是一种极具吸引力的抗血小板策略，与目前的标准疗法相比，该策略有望以更高的安全性治疗动脉粥样硬化血栓形成高风险患者。[3]

C23H23N5O5S2

513.589222192764

513.11

C, 53.79; H, 4.51; N, 13.64; O, 15.58; S, 12.48

1478712-37-6

72190270

White to off-white solid powder

4.2

153Ų

0

11

7

35

724

0

MINMDCMSHDBHKG-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C23H23N5O5S2/c1-13-17(25-21(34-13)27-4-6-31-7-5-27)12-32-18-8-14(29-2)9-19-15(18)10-20(33-19)16-11-28-22(24-16)35-23(26-28)30-3/h8-11H,4-7,12H2,1-3H3

4-[4-[[6-methoxy-2-(2-methoxyimidazo[2,1-b][1,3,4]thiadiazol-6-yl)-1-benzofuran-4-yl]oxymethyl]-5-methyl-1,3-thiazol-2-yl]morpholine

BMS 986120; BMS-986120; 1478712-37-6; WDT28B7071; 4-(4-(((6-methoxy-2-(2-methoxyimidazo[2,1-b][1,3,4]thiadiazol-6-yl)benzofuran-4-yl)oxy)methyl)-5-methylthiazol-2-yl)morpholine; 4-[4-[[6-methoxy-2-(2-methoxyimidazo[2,1-b][1,3,4]thiadiazol-6-yl)-1-benzofuran-4-yl]oxymethyl]-5-methyl-1,3-thiazol-2-yl]morpholine; BMS986120; compound 43 [PMID: 35729784]; 2-methoxy-6-[6-methoxy-4-[[5-methyl-2-(4-morpholinyl)-4-thiazolyl]methoxy]-2-benzofuranyl]-imidazo[2,1-b]-1,3,4-thiadiazole; BMS986120.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~3.3 mg/mL (~6.5 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。