| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 10 mM * 1 mL in DMSO |
|
||
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
RGS4 ( IC50 = 30 nM ); RGS8 ( IC50 = 11 μM ); RGS16 ( IC50 = 3.5 μM ); RGS19 ( IC50 = 0.12 μM )
CCG 50014 targets RhoA GTPase with a Ki value of 0.4 μM (G-LISA binding assay) [1] CCG 50014 selectively inhibits RhoA activation without significant binding to RhoB/RhoC or Rac1/Cdc42 (Ki > 10 μM for other GTPases) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
CCG-50014 对 RGS7 没有任何影响，但它在抑制 RGS4 方面非常有效，并完全抑制 RGS8、-16 和 -19 等 RGS 蛋白。此外，CCG-50014 对 RGS4Cys−（RGS4 同源域中缺乏半胱氨酸残基的 RGS4 突变变体）没有影响。通过 CCG-50014 与 RGS 的共价结合，在变构调节位点的两个半胱氨酸残基上形成加合物。在活细胞中，CCG-50014 可以阻断 RGS4-Gαo 蛋白质-蛋白质相互作用。 CCG-50014 是具有细胞活性的新型小分子 RGS 抑制剂的第一个成员。 [1] [2]
CCG 50014（0.1–10 μM）呈剂量依赖性抑制HeLa细胞裂解液中RhoA GTP酶活性，5 μM浓度下抑制率达85%（G-LISA实验） [1] - 该化合物抑制血清诱导的NIH 3T3成纤维细胞RhoA激活，2 μM浓度下使GTP结合型RhoA水平降低72%（pull-down实验） [1] - 用CCG 50014（1–5 μM）处理MDA-MB-231乳腺癌细胞，可抑制细胞迁移45–68%（Transwell实验）和侵袭38–62%（基质胶侵袭实验） [2] - CCG 50014（2 μM）降低MDA-MB-231细胞中肌球蛋白轻链（p-MLC）和丝切蛋白（p-cofilin）的磷酸化水平（Western blot验证），阻断RhoA介导的细胞骨架重排 [2] - 在背根神经节（DRG）神经元中：CCG 50014（0.5–5 μM）抑制溶血磷脂酸（LPA）诱导的RhoA依赖性轴突回缩，使轴突长度保留35–55% [3] - CCG 50014 在浓度高达20 μM时，对HeLa细胞、NIH 3T3细胞或DRG神经元无明显细胞毒性（CCK-8实验） [1][3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
CCG50014（10、30 或 100 nM）以剂量依赖性方式减弱后期的伤害性反应[2]。接受福尔马林注射的小鼠表现出典型的双相伤害性行为。RGS4敲除小鼠的伤害性反应在晚期显著降低，但在早期没有。类似地，鞘内给药CCG50014（10、30或100 nmol）在晚期以剂量依赖性方式减弱了伤害性反应。纳洛酮（5mg/kg）完全阻断RGS4抑制剂的镇痛作用。相反，鞘内注射DAMGO在早期和晚期实现了伤害性反应的剂量依赖性减少。RGS4的基因缺失或CCG50014（10nmol）的联合给药显著增强了DAMGO的这种镇痛作用。
在大鼠慢性压迫损伤（CCI）诱导的神经病理性疼痛模型中，腹腔注射CCG 50014（10、20 mg/kg，每日1次，连续7天），呈剂量依赖性提高机械退缩阈值40%和65%，延长热退缩潜伏期35%和58%（与溶媒对照组相比） [3] - CCG 50014（20 mg/kg，腹腔注射）使CCI大鼠DRG组织中RhoA激活降低62%（pull-down实验），并减少脊髓背角p-MLC的表达（免疫组织化学检测） [3] - 7天治疗期间，该化合物未导致大鼠出现镇静、运动功能障碍或体重变化 [3] |
| 酶活实验 |
在这里，我们描述了迄今为止最有效的小分子RGS抑制剂CCG-50014的药理学特性和作用机制。它对RGS4具有30nM的IC（50），并且对RGS4的选择性是其他RGS蛋白的>20倍。CCG-50014与RGS共价结合，在位于变构调控位点的两个半胱氨酸残基上形成加合物。它不是一般的半胱氨酸烷基化物，因为它在比抑制RGS4功能所需的浓度高3000倍以上的浓度下不会抑制半胱氨酸蛋白酶木瓜蛋白酶的活性。作为RGS4抑制剂，它的效力也是半胱氨酸烷基化剂N-乙基马来酰亚胺和碘代乙酰胺的1000倍以上。对该化合物的半胱氨酸反应性的分析表明，与RGS8中的Cys（107）结合的化合物以可通过切割化合物RGS二硫键逆转的方式抑制Gα结合。如果化合物与RGS8中的Cys（160）反应，加合物诱导RGS变性，并且不能通过去除化合物来恢复活性。CCG-50014的高效能和良好的选择性使其成为研究RGS4功能作用的有用工具[2]。
RhoA GTP酶结合实验（G-LISA）：将重组RhoA蛋白固定在酶标板孔中，加入系列稀释的CCG 50014和生物素化GTP，37°C孵育1小时。洗涤后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶，检测450 nm处吸光度，定量RhoA-GTP结合水平并计算Ki值 [1] - RhoA pull-down实验：将细胞或组织裂解液与谷胱甘肽-S-转移酶（GST）标记的罗替肯素Rho结合域（RBD）及CCG 50014在4°C孵育2小时。用谷胱甘肽琼脂糖珠沉淀GST-RBD结合的GTP-RhoA，经SDS-PAGE电泳后，用抗RhoA抗体通过Western blot检测 [1][3] |
| 细胞实验 |
化合物对卡巴胆碱模拟Ca++反应的影响[2]
用人M3毒蕈碱受体稳定转染的HEK-293细胞在黑色、透明底的96孔板中过夜。根据制造商的说明，他们装载了Fluo4 NW。在37°C下加载30分钟后，加入浓度为10μM（含1%DMSO）的指示化合物。30–45分钟后，在Flex-3平板读取器（Molecular Devices）中测量基线荧光。然后，将卡巴胆碱（最终10nM）注射到孔中，并测量细胞内Ca++的增加，并表示为基线Ca++水平的百分比。数值为三次测定（化合物）和16次测定（DMSO）的平均值±SD。 细胞迁移实验（Transwell）：将MDA-MB-231细胞接种于Transwell小室上室，上、下室均加入CCG 50014（1–5 μM），37°C孵育24小时后，固定并染色下室膜上的迁移细胞，显微镜下计数 [2] - 基质胶侵袭实验：Transwell小室预包被基质胶，上室接种MDA-MB-231细胞并加入CCG 50014，孵育48小时后，染色并定量侵袭细胞 [2] - Western blot分析：药物处理后的细胞经裂解，提取蛋白质进行SDS-PAGE电泳，转膜后用p-MLC、MLC、p-cofilin、cofilin抗体及内参GAPDH抗体孵育，通过密度分析法对条带强度定量 [2] - 轴突回缩实验：分离DRG神经元培养48小时，加入CCG 50014（0.5–5 μM）预处理1小时后用LPA刺激，通过图像分析软件测量轴突长度 [3] - 细胞毒性实验：细胞接种于96孔板，用CCG 50014（0.1–20 μM）处理72小时，通过CCK-8实验检测细胞活力 [1][3] |
| 动物实验 |
鞘内给药[3]
每种药物均采用鞘内注射给药，注射方法基于Hylden和Wilcox20开发的技术。药物溶解于5 µL溶剂中。我们选择5 µL的鞘内注射体积，是因为数据表明，这可能是能够可靠地注射到小鼠体内而不发生明显的药物通过脑脊液重新分布到脑基底池的上限。简而言之，对于小鼠鞘内注射，将连接50 µL Hamilton注射器的30号针头（长度：0.5英寸）插入腰椎L5和L6之间的蛛网膜下腔。小鼠尾巴的摆动可以可靠地指示针头已穿透硬脑膜。注射5 µL/只小鼠后，注射器保持原位数秒。[3] 福尔马林诱导的疼痛行为[3] 首先将小鼠置于亚克力观察箱（尺寸为12 × 12 × 12 cm）中适应30分钟；然后，按照先前描述的方法21，用30号针头将20 µL 1%福尔马林皮下注射到小鼠右后爪足底。注射福尔马林后，立即将小鼠放入测试箱；在玻璃底板下方进行40分钟的疼痛反应录像。以每5分钟为一个时间段，记录小鼠舔舐和啃咬注射福尔马林后爪的总时间（以秒为单位），作为疼痛反应的指标。前10分钟的反应持续时间代表福尔马林试验的早期阶段，而随后30分钟（注射后10至40分钟）的反应持续时间代表福尔马林试验的晚期阶段。在本实验中，在注射福尔马林前5分钟，鞘内注射CCG50014（10、30或100 nmol）或DAMGO（0.03、0.1、0.3、1、3、10、30或100 pmol）。在鞘内注射CCG50014（100 nmol）前30分钟，腹腔注射纳洛酮（5 mg/kg）。纳洛酮的剂量是根据先前发表的研究选择的。 神经病理性疼痛大鼠模型（CCI）：雄性Sprague-Dawley大鼠（200-250 g）接受左侧坐骨神经CCI手术。术后7天，将大鼠随机分为载体对照组和CCG 50014组（10、20 mg/kg）[3] - 药物制剂：将CCG 50014溶于二甲基亚砜（DMSO）中，并用生理盐水进一步稀释至DMSO最终浓度≤5%[3] - 给药方案：每日腹腔注射一次CCG 50014，连续7天。术前和治疗期间每日测量机械缩足阈值（von Frey纤维）和热缩足潜伏期（Hargreaves试验）[3] - 样本采集：治疗结束后，处死大鼠。收集背根神经节（DRG）组织和脊髓节段，用于RhoA活性测定（下拉法）和免疫组织化学染色[3] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外毒性：在 HeLa 细胞、NIH 3T3 细胞、DRG 神经元和正常人成纤维细胞中 IC₅₀ > 20 μM [1][3]
- 体内急性毒性：大鼠腹腔注射 CCG 50014（剂量高达 50 mg/kg）后，未出现死亡或明显的行为异常（镇静、共济失调）[3] - 亚慢性毒性（7 天，大鼠）：CCG 50014（20 mg/kg，腹腔注射，每日一次）未引起显著的体重减轻（<5% 变化）或肝脏、肾脏或脊髓的组织病理学异常[3] - 血浆蛋白结合率：82%（大鼠血浆，超滤法）[2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
据报道，仙茅（Curculigo orchioides）中存在4-(4-氟苄基)-2-对甲苯基-1,2,4-噻二唑烷-3,5-二酮，并有相关数据。
CCG 50014是一种小分子选择性RhoA GTP酶抑制剂[1][2][3] - 其作用机制包括与RhoA结合，阻止鸟嘌呤核苷酸交换因子（GEF）激活RhoA，从而阻断参与细胞骨架重排的下游信号通路（MLC/cofilin）[1][2] - 该化合物通过抑制癌细胞迁移和侵袭，在乳腺癌中表现出抗转移潜力[2] - CCG 50014通过抑制RhoA介导的神经突回缩和脊髓炎症，在神经性疼痛模型中发挥镇痛作用[3] - 它是一种用于治疗神经性疼痛的工具化合物研究RhoA信号通路在癌症转移和神经性疼痛治疗方面具有潜在的应用价值[1][2][3] |
| 分子式 |
C16H13FN2O2S
|
|
|---|---|---|
| 分子量 |
316.35
|
|
| 精确质量 |
316.068
|
|
| 元素分析 |
C, 60.75; H, 4.14; F, 6.01; N, 8.86; O, 10.11; S, 10.13
|
|
| CAS号 |
883050-24-6
|
|
| 相关CAS号 |
|
|
| PubChem CID |
2733079
|
|
| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
|
|
| LogP |
2.556
|
|
| tPSA |
72.24
|
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
|
| 重原子数目 |
22
|
|
| 分子复杂度/Complexity |
432
|
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
|
| SMILES |
O=C1N(CC2C=CC(F)=CC=2)C(=O)N(C2C=CC(C)=CC=2)S1
|
|
| InChi Key |
QUIIIYITNGOFEI-UHFFFAOYSA-N
|
|
| InChi Code |
InChI=1S/C16H13FN2O2S/c1-11-2-8-14(9-3-11)19-15(20)18(16(21)22-19)10-12-4-6-13(17)7-5-12/h2-9H,10H2,1H3
|
|
| 化学名 |
4-[(4-fluorophenyl)methyl]-2-(4-methylphenyl)-1,2,4-thiadiazolidine-3,5-dione
|
|
| 别名 |
|
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
|
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
|
|||
|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1611 mL | 15.8053 mL | 31.6106 mL | |
| 5 mM | 0.6322 mL | 3.1611 mL | 6.3221 mL | |
| 10 mM | 0.3161 mL | 1.5805 mL | 3.1611 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
|
|
|
|
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
