Cebranopadol ((1α,4α)stereoisomer)   中文名称: 西博帕多(1α,4α)异构体

NOP Receptor/ORL1

体外活性：Cebranopadol（也称为 GRT-6005）是一种新型、同类首创化合物，对 ORL-1（阿片受体样 -1）和成熟的 mu 阿片受体具有强效激动剂活性。 Cebranopadol 是一种镇痛药，伤害感受肽/孤啡肽 FQ 肽 (NOP)，在多种急性和慢性疼痛（甩尾、类风湿关节炎、骨癌、脊神经结扎、糖尿病神经病变）大鼠模型中表现出高效力和功效，ED50 值为 0.5静脉注射后为-5.6 µg/kg，口服后为25.1 µg/kg。目前正在对它治疗慢性和急性疼痛的临床 2 期和 3 期试验进行评估。最近的证据表明阿片类药物和 NOP 受体激动剂的结合可能是可卡因成瘾的新治疗策略。激酶测定：人 MOP、DOP、KOP 和 NOP 受体结合测定在微量滴定板（Costar 3632；Corning Life Sciences，Tewksbury，MA）中使用麦芽凝集素包被的闪烁邻近测定珠（GE Healthcare，Chalfont St. Giles）进行， 英国）。转染人 MOP 受体（货号 RBHOMM，批号 307-065-A）或人 DOP 受体（货号 RBHODM，批号 307-065-A）的中国仓鼠卵巢 K1 细胞的细胞膜制剂。 423-553-B)，以及用人 NOP 受体（货号 RBHORLM，批号 1956）或人 KOP 受体（货号 6110558，批号）转染的人胚胎肾细胞系 293 细胞编号 295-769-A) 购自 PerkinElmer Life and Analytical Sciences（马萨诸塞州波士顿）。 [N-烯丙基-2,3-3H]纳洛酮和[酪氨酰-3,5-3H]deltorphin II（均购自 PerkinElmer Life and Analytical Sciences）、[3H]Ci-977 和 [亮氨酰-3H]nociceptin（均购自 GE Healthcare）分别用作 MOP、DOP、KOP 和 NOP 受体结合研究的配体。细胞测定：测试头孢拉朵尔对中国仓鼠卵巢 K1 细胞表达人重组 MOP、DOP 或 NOP 受体的细胞膜，或人胚胎肾细胞系 293 细胞表达 KOP 受体的细胞膜的激动活性，10 µg每次测定的膜蛋白与 0.4 nM [35S]GTPγS (GE Healthcare) 和不同浓度的激动剂在含有 20 mM HEPES (pH 7.4)、100 mM NaCl、10 mM MgCl2、1 mM EDTA、1 mM 二硫苏糖醇、1.28 的缓冲液中一起孵育。 mM NaN3 和 10 µM 二磷酸鸟苷，在 25°C 下反应 45 分钟。如前所述测定结合放射性。

在 Sprague-Dawley 大鼠（体重范围 134−423 g；甩尾模型：Iffa Credo，布鲁塞尔，比利时；骨癌模型：Harlan Laboratories，印第安纳波利斯，印第安纳州；所有其他疼痛模型）中进行了疼痛模型的行为研究和药代动力学评估和药代动力学：Janvier Laboratories，Le Genest Saint Isle，法国）；大多数实验都使用雄性大鼠，但甩尾和骨癌模型则使用雌性斯普拉格-道利大鼠。副作用模型研究在雄性 Wistar 大鼠（体重范围 150−375 g；Dépré，Saint Doulchard，法国）中进行。大鼠饲养在标准条件下（室温 20−24°C，12 小时光/暗周期，相对空气湿度 35−70%，每小时换气 10−15 次，空气流动<0.2 m/s），并提供食物和水可以在家里的笼子里随意使用。除了单神经病模型外，所有体内模型中的动物仅使用一次，对于单神经病模型，动物要重复测试，两次测试之间的清除期至少为 1 周。除下述例外情况外，动物试验是根据国际疼痛研究协会和德国动物福利法的建议和政策进行的。所有研究方案均得到当地政府动物研究委员会的批准，并由独立伦理委员会提供建议。将动物随机分配到治疗组。以随机方式测试不同的剂量和载体。尽管进行行为测试的操作员在治疗方面并未正式“失明”，但他们并不了解研究假设或药物之间差异的本质。

Cebranopadol（反式6′-氟-4′，9′-二氢- n， n -二甲基-4-苯基-螺[环己烷-1,1′（3′h）-吡喃[3,4-b]吲哚]-4-胺）是一种新型镇痛药痛感肽/孤肽FQ肽（NOP）和阿片受体激动剂[Ki (nM)/EC50 (nM)/相对疗效（%）：人NOP受体0.9/13.0/89；人mu-阿片肽（MOP）受体0.7/1.2/104；人阿片肽受体2.6/17/67；人阿片肽受体18/110/105].[1]

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人MOP、DOP、KOP和NOP受体结合试验用小麦胚芽凝集素包被闪烁接近试验珠在微滴板上进行。[n -烯丙基-2,3-3H]纳洛酮和[tyroyl -3,5-3H]deltorphin II、[3H]Ci-977和[亮氨酸-3H]nociceptin分别作为MOP、DOP、KOP和NOP受体结合研究的配体。用于计算Ki值的辐射配体的KD值作为补充信息提供。用于MOP、DOP和KOP受体结合研究的实验缓冲液为50 mM Tris-HCl (pH 7.4)，添加0.052 mg/mL牛血清白蛋白。对于NOP受体结合研究，使用的实验缓冲液为50 mM HEPES， 10 mM MgCl2, 1 mM EDTA （pH 7.4）。最终测定体积为250 μL/孔，分别为1 nM [3H]纳洛酮、1 nM [3H]三角洲啡肽、1 nM [3H]Ci-977或0.5 nM [3H]诺西普汀配体和稀释系列头孢帕多。将Cebranopadol在水中用25%的DMSO稀释，最终得到0.5%的DMSO浓度，这也作为相应的载体对照。实验开始时加入微球（1 mg /孔），在室温下预载15分钟，每250µL最终测定体积中含有23.4 μg人MOP膜、12.5 μg人DOP膜、45 μg人KOP膜或25.4 μg人NOP膜。短暂混合后，在室温下运行90分钟。然后将微量滴度板以500 rpm离心20分钟，用1450 MicroBeta Trilux测量信号率。通过非线性回归分析计算[3H]纳洛酮-、[3H]deltorphin II-、[3H]Ci-977-或[3H]痛感肽特异性受体结合50%位移的IC50值。单个实验重复运行，独立实验重复3次[1]。

测试了 Cebranopadol 对来自中国仓鼠卵巢 K1 细胞的表达人重组 MOP、DOP 或 NOP 受体的细胞膜，或来自人胚胎肾细胞系 293 细胞的表达 KOP 受体的细胞膜的激动活性。对于每次测定，将 10 µg 膜蛋白与 0.4 nM [35S]GTPγS (GE Healthcare) 和不同浓度的激动剂在含有 20 mM HEPES (pH 7.4)、100 mM NaCl、 10 mM MgCl2、1 mM EDTA、1 mM 二硫苏糖醇、1.28 mM NaN3 和 10 µM 二磷酸鸟苷。使用前面提到的方法计算结合放射性。

\n\nCebranopadol 溶解于由 5% 二甲基亚砜、5% Emulphor 和 90% 蒸馏水组成的溶剂中。将溶液涡旋混匀后，装入1毫升注射器进行口服注射。Cebranopadol以0.0、25和50 μg/kg的剂量通过灌胃法口服给药。盐酸可卡因以0.5 mg/kg/次的剂量溶于0.9%生理盐水中，并进行静脉自给药。甜炼乳以2:1 (v/v)的比例用水稀释。[2]
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\nCebranopadol对可卡因自给药递增的影响[2]
\n14只大鼠在固定比率1 (FR1)强化程序下接受可卡因自给药训练，每日训练6小时。每次按下有效操作杆，即可获得一次可卡因剂量（0.5 mg/kg/0.1毫升）。每次可卡因注射后均设有20秒的暂停期（TO）。在暂停期内，按压操作杆不会产生任何预定的后果。暂停期与位于操作杆上方的提示灯同时亮起，提示灯亮起表示即将进行正强化。大鼠接受15次训练（每周5天）以达到可卡因的自我给药，直至强化水平达到稳定基线（最后三次训练的变异小于10%）。药物处理采用受试者内拉丁方设计。在训练开始前30分钟，大鼠经口注射塞布拉诺帕多（0、25和50 μg/kg）。经口给药采用灌胃法，使用19号针头和8厘米长的Tygon管（内径0.030英寸，外径0.090英寸）。在两次药物测试之间，动物每隔2天进行一次可卡因自我给药。\n

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\n塞布拉诺帕多对甜炼乳自我给药的影响[2]
\n为了模拟可卡因自我给药，每天训练12只大鼠在FR1强化程序下进行6小时的甜炼乳自我给药。每次给予甜炼乳奖励后，会出现一个20秒的TO期，在此期间，按下操作杆不会产生任何预定的后果。TO期与位于操作杆上方的提示灯同时亮起，提示即将给予正强化。大鼠接受数天的甜炼乳自我给药训练，直至达到稳定的强化基线（最后三次训练的变异小于10%）。达到稳定基线后，在开始下一次训练前30分钟，大鼠口服塞布拉诺帕多（0、25和50 μg/kg）。动物在药物测试之间每隔2天进行一次SCM自我给药。\n

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\n塞布拉诺帕多诱导的条件性位置偏好和运动活性[2]
\n采用偏倚平衡条件性位置偏好（CPP）程序评估塞布拉诺帕多诱导的CPP。在研究开始前，对未经处理的大鼠（n = 9）进行处理并适应口服给药1周。实验包括三个30分钟的阶段：预测试（1次）、条件反射训练（8次）和偏好测试（1次）。在测试开始前30分钟，将大鼠置于光线昏暗（40勒克斯）的房间内。使用双室（38厘米×32厘米×32厘米）位置条件反射装置，墙壁上有视觉线索（A室为条纹，B室为圆点），地板上有触觉线索（A室为光滑，B室为粗糙）。在第1天（预测试），将未经训练的大鼠置于两个隔间之间，并允许其自由探索两个隔间30分钟。观察到每只大鼠对A隔间或B隔间的偏好，并根据其最不偏好的隔间将动物分配到不同的位置条件反射亚组；因此，采用了偏好分配法。条件反射训练在受试者自身中进行。每只大鼠在放入条件反射隔间前30分钟，隔天口服塞布拉诺帕多（25 μg/kg）和溶剂，采用平衡设计。偏好测试在最后一次条件反射训练后24小时进行。给予溶剂30分钟后，将大鼠置于装置的非条件反射侧，并允许其自由进入两个隔间。记录大鼠在不同隔间停留的时间。在每个阶段（预测试、条件反射训练和偏好测试），均使用连接至 ANY-maze 视频追踪系统 5.11 的摄像机记录运动活动。\n

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\n塞布拉诺帕多对可卡因觅药行为条件性恢复的影响[2]
\n可卡因自我给药训练[2]
\n对 10 只大鼠进行手术，在其右侧颈静脉植入留置微型聚氨酯导管。术后恢复 7 天后，开始进行自我给药训练。在存在情境/辨别刺激 (SD) 的情况下，按照 FR1 强化程序，训练大鼠每天自我给药 6 小时（0.5 mg/kg/0.1 ml，静脉输注）。每次训练开始时，将两个可伸缩的操纵杆伸入操作条件反射箱中。持续的70分贝白噪声作为辨别刺激，在整个实验过程中提示强化物的可用性。右侧有效操作杆的反应会获得一定剂量的可卡因作为强化，随后进入20秒的暂停期（TO期），该暂停期由有效操作杆上方的指示灯亮起提示。在暂停期内，操作杆保持无效状态，以防止意外过量使用可卡因。左侧无效操作杆的反应没有预定的后果。\n

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\n\n条件性复吸。[2]
\n\n两天后，对大鼠进行SD测试。为了评估塞布拉诺帕多对可卡因渴求条件性复吸的影响，在复吸测试前30分钟，采用平衡拉丁方设计，对大鼠分别给予塞布拉诺帕多（0、25和50 μg/kg）处理。复吸测试在标准差条件下持续2小时，但测试期间无法获得可卡因。塞布拉诺帕多仅在标准差条件下使用，两次测试间隔2天。\n\n

8.9 和 26.6 mg/kg 皮下注射，用于清醒大鼠的全身容积描记法试验。

Sprague-Dawley 大鼠

[1]. J Pharmacol Exp Ther . 2014 Jun;349(3):535-48.

[2]. J Pharmacol Exp Ther . 2017 Sep;362(3):378-384.

塞布拉诺帕多属于吲哚类化合物。
塞布拉诺帕多已用于疼痛、肿瘤和慢性疼痛治疗的临床试验。
塞布拉诺帕多是一种口服有效的苯类化合物，可作为伤害感受素/孤啡肽FQ受体（阿片受体样-1；OPRL1；ORL-1；NOP；κ型3阿片受体）和经典阿片受体（μ、δ和κ）的阿片肽受体激动剂，具有潜在的抗伤害感受活性。口服后，塞布拉诺帕多与NOP以及μ、δ和κ阿片受体结合，增强NOP和阿片受体介导的信号传导，干扰疼痛感觉，从而产生镇痛作用。 NOP 是阿片受体家族的成员，其内源性配体伤害感受素在调节包括疼痛在内的多种脑活动以及一些炎症和免疫反应中发挥着关键作用。

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药物适应症
治疗慢性疼痛。

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Cebranopadol（反式-6'-氟-4',9'-二氢-N,N-二甲基-4-苯基-螺[环己烷-1,1'(3'H)-吡喃并[3,4-b]吲哚]-4-胺）是一种新型镇痛药，属于伤害感受素/孤啡肽 FQ 肽 (NOP) 和阿片受体激动剂 [Ki (nM)/EC50 (nM)/相对疗效 (%)：人 NOP 受体 0.9/13.0/89；人 μ-阿片肽 (MOP) 受体 0.7/1.2/104；塞布拉诺帕多与人κ-阿片肽受体2.6/17/67和人δ-阿片肽受体18/110/105有亲和力。在多种大鼠急性和慢性疼痛模型（甩尾试验、类风湿性关节炎、骨癌、脊神经结扎、糖尿病性神经病变）中，塞布拉诺帕多表现出高效强效的镇痛和抗痛觉过敏作用，静脉注射后ED50值为0.5-5.6 µg/kg，口服后为25.1 µg/kg。与选择性MOP受体激动剂相比，塞布拉诺帕多在慢性神经性疼痛模型中的效力高于急性伤害性疼痛模型。塞布拉诺帕多的作用持续时间长（静脉注射12 µg/kg后可持续长达7小时；在大鼠甩尾试验中口服55 µg/kg后可持续超过9小时）。在脊神经结扎模型中，塞布拉诺帕多（cebranopadol）的抗痛觉过敏活性可被选择性NOP受体拮抗剂J-113397[1-[(3R,4R)-1-环辛基甲基-3-羟甲基-4-哌啶基]-3-乙基-1,3-二氢-2H-苯并咪唑-2-酮]或阿片受体拮抗剂纳洛酮的预处理部分逆转，表明NOP受体和阿片受体激动作用均参与了该活性。在慢性压迫损伤模型中，与等效镇痛剂量的吗啡相比，塞布拉诺帕多镇痛耐受性的发展明显延迟（分别在第26天和第11天达到完全耐受）。与吗啡不同，塞布拉诺帕多在镇痛剂量范围内及以上剂量下均未干扰运动协调和呼吸。 Cebranopadol 是一种新型的伤害感受素/孤啡肽 FQ (NOP) 和阿片受体激动剂，具有镇痛作用，在多种疼痛模型中均表现出高效镇痛效果，且副作用较小。[1] Cebranopadol 目前正在进行 II 期和 III 期临床试验，用于治疗慢性疼痛和急性疼痛。近期证据表明，阿片受体和 NOP 受体激动剂的联合作用可能是一种治疗可卡因成瘾的新策略。为了进一步探究这些发现，我们研究了 Cebranopadol 对长期可接触可卡因的大鼠可卡因自我给药（0.5 mg/kg/次）和条件性复吸的影响。口服塞布拉诺帕多（0、25 和 50 μg/kg）可逆转给予大鼠长时间（6 小时）可卡因自由摄入后可卡因自我给药量的增加，但对甜炼乳（SCM）的自我给药量没有影响。塞布拉诺帕多可诱导条件性位置偏好，但在条件反射训练期间不影响运动活性。此外，塞布拉诺帕多可阻断条件性可卡因渴求的复吸。这些结果表明，口服塞布拉诺帕多可预防成瘾样行为（即摄入量增加和复吸），提示其可能是一种治疗可卡因使用障碍的新策略。然而，塞布拉诺帕多给药后观察到的条件性位置偏好提示该化合物可能具有一定的内在奖赏效应。[2]

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本研究的一个局限性在于缺乏对塞布拉诺帕多药代动力学和药效学的全面表征。我们也没有评估塞布拉诺帕多对可卡因药代动力学的影响。然而，我们认为可卡因剂量递增的减少与血液中可卡因水平可能存在的药代动力学效应无关，因为塞布拉诺帕多有效地降低了条件性复吸。在本研究中，由于无法获得可卡因，因此排除了其对血液中可卡因水平的潜在影响。我们也没有发现剂量反应曲线的偏移或介导其临床前疗效的特定受体。需要进行后续研究来全面表征塞布拉诺帕多的强化特性和潜在滥用风险，尤其考虑到我们发现塞布拉诺帕多能够诱导条件性位置偏好。然而，尽管从理论角度来看，此类表征研究对于理解药物的确切作用机制和促进药物研发至关重要，但塞布拉诺帕多已被证明在人体中具有良好的耐受性，并且目前正在多项临床试验中进行疼痛治疗的测试。总之，本研究提供了塞布拉诺帕多逆转可卡因强迫样反应和线索诱发的可卡因渴求复发的临床前疗效证据。塞布拉诺帕多可能成为预防可卡因滥用和复发的新型治疗选择。[2]

C24H27FN2O

378.482389688492

378.21

C, 68.34; H, 6.58; F, 4.00; N, 5.90; O, 15.17

863513-93-3

Cebranopadol; 863513-91-1

11848225

White to gray solid powder

4.3

28.3

1

3

2

28

553

0

N([C@@]1(CC[C@]2(OCCC3C4C=C(F)C=CC=4NC2=3)CC1)C1C=CC=CC=1)(C)C

CSMVOZKEWSOFER-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H27FN2O/c1-27(2)23(17-6-4-3-5-7-17)11-13-24(14-12-23)22-19(10-15-28-24)20-16-18(25)8-9-21(20)26-22/h3-9,16,26H,10-15H2,1-2H3

6-fluoro-N,N-dimethyl-1'-phenylspiro[4,9-dihydro-3H-pyrano[3,4-b]indole-1,4'-cyclohexane]-1'-amine

GRT6005; GRT 6005; GRT-6005; Cebranopadol

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。